本文關(guān)鍵詞：S1P通過S1PR2抑制癌細(xì)胞遷移及其信號通路的研究

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【摘要】：癌癥是危及人類健康的重大疾病之一,癌癥的發(fā)生和發(fā)展受許多信號通路的調(diào)控。細(xì)胞膜上的S1P受體S1PRs(包括S1PR1、S1PR2、S1PR3、 S1PR4 和 S1PR5)能夠被S1P激活,介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)多條信號通路,調(diào)控細(xì)胞的生理功能,如細(xì)胞增殖、遷移、凋亡、血管生成等。這些受體是跨膜蛋白,能夠與細(xì)胞內(nèi)不同類型的G蛋白偶聯(lián),激活下游的信號分子,傳遞信號。腫瘤細(xì)胞具有無限增殖和轉(zhuǎn)移的特性。有研究報道S1PR2能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞的遷移,還能抑制彌散性B細(xì)胞淋巴瘤的產(chǎn)生,可能是一種具有抑癌作用的受體。因此,研究S1PR2在腫瘤細(xì)胞遷移中的作用及其信號通路對于腫瘤治療具有重要的意義。本實驗應(yīng)用Real Time PCR技術(shù)檢測多種細(xì)胞中S1PRs的表達(dá)。并選取S1PR2高表達(dá)的人胃癌細(xì)胞SGC-7901 和 BGC-803細(xì)胞,用Micro Chemotaxis Chamber檢查了S1P刺激下細(xì)胞的遷移,同時用S1PR2的拮抗劑JTE-013預(yù)處理細(xì)胞后,檢測S1PS1P刺激下細(xì)胞遷移,探究S1PR2對細(xì)胞遷移的影響�？寺×巳薙1PR2的cDNA,構(gòu)建了S1PR2過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染到S1PR2低表達(dá)的人肺癌細(xì)胞A549中,成功構(gòu)建S1PR2過表達(dá)細(xì)胞模型,并檢查S1P刺激下細(xì)胞遷移,進(jìn)一步驗證S1PR2對細(xì)胞遷移的作用。利用S1PR2高表達(dá)的SGC-7901細(xì)胞,使用了多種抑制劑(Gi蛋白抑制劑PTX, ERK的抑制劑PD98059, Rho激酶抑制劑Y27632和NF-κB抑制劑BAY)探索S1PR2抑制細(xì)胞遷移的信號通路。實驗結(jié)果顯示：在A549、HCT-116、A2780、HO-8910細(xì)胞中S1PR3高表達(dá),S1PR2表達(dá)量低于S1PR3表達(dá)量,在我們檢測的胃癌細(xì)胞中S1PR2都高表達(dá)。用S1P刺激細(xì)胞后,細(xì)胞的遷移能力下降,當(dāng)用JTE-013預(yù)處理細(xì)胞,被S1P抑制的細(xì)胞遷移能力得到恢復(fù),證明S1P通過S1PR2抑制了細(xì)胞的遷移。當(dāng)用抑制劑PTX、PD98059、Y27632和BAY處理細(xì)胞后,S1P通過S1PR2抑制細(xì)胞遷移的作用被解除,說明Gi蛋白、ERK、R ho激酶(ROCK)和NF-κB參與了S1P介導(dǎo)S1PR2抑制細(xì)胞遷移的過程。我們的研究結(jié)果顯示S1PR2具有抑制癌細(xì)胞遷移的作用,可能成為癌癥治療的分子靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：癌細(xì)胞 S1PR2 細(xì)胞遷移 信號通路
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 英文縮略詞11-12
• 一. 前言12-13
• 二. 材料與方法13-29
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 儀器設(shè)備13
• 2.1.2 試劑溶液13-15
• 2.2 方法15-29
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)15-17
• 2.2.2 Real time PCR檢測S1PRs表達(dá)17-20
• 2.2.3 S1PR2 cDNA的克隆及克隆載體的構(gòu)建20-25
• 2.2.4 S1PR2 cDNA真核表達(dá)載體構(gòu)建25-26
• 2.2.5 S1PR2過表達(dá)A549細(xì)胞系建立26-28
• 2.2.6 S1PR2在2種胃癌細(xì)胞遷移活性中的作用28
• 2.2.7 S1PR2在SGC-7901細(xì)胞中抑制細(xì)胞遷移的信號通路研究28-29
• 2.2.8 數(shù)據(jù)分析29
• 三. 結(jié)果29-46
• 3.1 細(xì)胞中S1PRs的mRNA表達(dá)情況29-32
• 3.2 胃癌細(xì)胞遷移活性檢測32-34
• 3.2.1 SGC-7901細(xì)胞遷移活性檢測32-33
• 3.2.2 BGC-803細(xì)胞遷移活性的檢測33-34
• 3.3 人鞘氨醇-1-磷酸2型受體S1PR2真核表達(dá)載體的構(gòu)建34-36
• 3.3.1 人鞘氨醇-1-磷酸2型受體S1PR2的cDNA克隆34
• 3.3.2 重組質(zhì)粒pMD19-T-S1PR2的雙酶切(SalI和BamHI)鑒定34-35
• 3.3.3 重組質(zhì)粒pMD19-T-S1PR2的測序鑒定35
• 3.3.4 表達(dá)載體pIRES2-EGFP的雙酶切(SalI和BamHl)35-36
• 3.3.5 重組表達(dá)載體pIRES2-EGFP-S1PR2雙酶切鑒定36
• 3.3.6 重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-S1PR2的測序鑒定36
• 3.4 S1PR2過表達(dá)A549細(xì)胞系的建立36-38
• 3.4.1 A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染表達(dá)載體pIRES2-EGFP-S1PR2后熒光顯微照相36-37
• 3.4.2 Real Time PCR相對定量結(jié)果37-38
• 3.5 S1PR2過表達(dá)A549細(xì)胞遷移活性檢測38-40
• 3.6 SGC-7901細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)曲線和生長曲線的繪制40-41
• 3.6.1 SGC-7901細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制40
• 3.6.2 SGC-7901細(xì)胞生長曲線繪制40-41
• 3.7 S1P/S1PR2抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞遷移的信號通路探究41-46
• 3.7.1 PTX對S1P/S1PR2抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞遷移的影響41-42
• 3.7.2 PD98059對S1P/S1PR2抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞遷移的影響42-43
• 3.7.3 Y27632對S1P/S1PR2抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞遷移的影響43-44
• 3.7.4 BAY對S1P/S1PR2抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞遷移的影響44-46
• 四. 討論46-47
• 五. 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-49
• 文獻(xiàn)綜述49-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 附錄56-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文與參與的科研項目61

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李瑞娟;S1P通過S1PR2抑制癌細(xì)胞遷移及其信號通路的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

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本文編號：922238