本文關(guān)鍵詞：宮頸癌相關(guān)生物標(biāo)記物檢測(cè)新方法研究

  更多相關(guān)文章： 宮頸癌 人乳頭瘤病毒 E6/E7信使RNA 芯片毛細(xì)管電泳 p53蛋白 滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)

【摘要】：在世界范圍內(nèi),宮頸癌是女性易發(fā)癌癥之一,在欠發(fā)達(dá)地區(qū)宮頸癌的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)區(qū)域。分子生物學(xué)和流行病學(xué)研究證實(shí),人類乳頭瘤病毒對(duì)于上皮細(xì)胞的持續(xù)感染可以導(dǎo)致子宮頸罹癌或病變。目前,研究人員以發(fā)現(xiàn)超過(guò)100多種人乳頭狀瘤病毒類型,這其中,HPV16型普遍在肛門和其它生殖器官的癌變組織中,HPV16連同HPV18、HPV31、HPV33、 HPV35和其它幾種易存在與肛門-生殖器癌變組織的型別,被稱為“高風(fēng)險(xiǎn)”型。相比之下,主要存在于疣和其它病變組織中的人類乳頭瘤病毒類型被指定為“低風(fēng)險(xiǎn)”類型。高危型HPV的持續(xù)感染,導(dǎo)致包括E6、E7基因在內(nèi)的關(guān)鍵癌蛋白編碼基因的過(guò)量表達(dá),E6、E7的過(guò)表達(dá)必將編碼癌蛋白與重要的細(xì)胞周期調(diào)控分子或腫瘤抑制基因p53相互作用,降解或抑制其活性,導(dǎo)致惡性轉(zhuǎn)變。盡管HPV是DNA病毒,由于較低的臨床特異性和較弱實(shí)際價(jià)值,人乳頭狀瘤病毒DNA檢測(cè)沒(méi)有被廣泛接受為主要篩查手段。在本工作中,NASBA、兩步法RT-PCR和一步法RT-PCR聯(lián)合芯片電泳用于成HPV16E6/E7mRNA的檢測(cè)；本工作的另一部分是選擇p53蛋白作為宮頸癌生物標(biāo)志物,基于滾環(huán)擴(kuò)增和氯高鐵血紅素/G-四聯(lián)體技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分析檢測(cè)。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)論如下：第一章綜述了子宮頸癌和人乳頭瘤病毒之間的關(guān)系,簡(jiǎn)要介紹和比較了細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、HPV DNA檢測(cè)和E6/E7mRNA檢測(cè)。第二章針對(duì)三種不同的核酸擴(kuò)增技術(shù)聯(lián)合芯片電泳對(duì)HPV 16 E6/ E7 mRNA檢測(cè)做了比較型的研究。這些研究具有高通量、高可靠性的特點(diǎn),相對(duì)于傳統(tǒng)耗時(shí)的毛細(xì)管電泳或分子信標(biāo)檢測(cè)方法,檢測(cè)耗時(shí)大大縮短。基于核酸序列擴(kuò)增技術(shù)(NASBA)、一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR的HPV篩查檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)建立。相信在進(jìn)一步修改和完善后,這種方法能夠在肛門-生殖器癌臨床診斷和預(yù)后中發(fā)揮作用。第三章p53作為一種腫瘤抑制蛋白、轉(zhuǎn)錄因子,在細(xì)胞生長(zhǎng)控制、DNA修復(fù)、細(xì)胞程序性調(diào)亡過(guò)程中起著重要的作用。p53被證實(shí)與宮頸癌相關(guān),p53蛋白和E6蛋白的結(jié)合在宮頸癌的發(fā)生核發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。在這項(xiàng)工作中,我們計(jì)劃設(shè)計(jì)制造一個(gè)簡(jiǎn)易、便攜的芯片裝置,以期實(shí)現(xiàn)p53蛋白的高敏感性和高選擇性檢測(cè)。p53蛋白在微通道中被選擇性捕獲,然后是借助RCA實(shí)現(xiàn)目標(biāo)放大,再借助RCA擴(kuò)增得到的G-quadruplex結(jié)構(gòu)單元,催化ABTS-hemin-H2O2體系發(fā)光體系,實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大,最后進(jìn)行比色測(cè)定。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 人乳頭瘤病毒 E6/E7信使RNA 芯片毛細(xì)管電泳 p53蛋白 滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 第一章 緒論13-29
• 1.1 宮頸癌和人乳頭瘤病毒13-20
• 1.1.1 E6和E7蛋白與宮頸癌的發(fā)生15-16
• 1.1.2 HPV的檢測(cè)16-20
• 1.1.2.1 細(xì)胞學(xué)檢測(cè)16-17
• 1.1.2.2 HPV DNA檢測(cè)17-19
• 1.1.2.3 HPV mRNA的檢測(cè)19-20
• 1.2 依賴核酸序列擴(kuò)增技術(shù)20-22
• 1.2.1 NASBA概述20
• 1.2.2 NASBA的基本原理20-21
• 1.2.3 NASBA的應(yīng)用21-22
• 1.3 p53和癌癥22-25
• 1.4 滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)25-27
• 1.4.1 RCA概述26
• 1.4.2 RCA的基本原理26
• 1.4.3 RCA的應(yīng)用26-27
• 1.5 本論文的立題內(nèi)容和意義27-29
• 第二章 比較三種不同的核酸擴(kuò)增技術(shù)聯(lián)合芯片毛細(xì)管電泳用于HPV16E6/E7 mRNA的檢測(cè)29-50
• 2.1 前言29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分29-36
• 2.2.1 宮頸癌細(xì)胞的選擇和培養(yǎng)29-30
• 2.2.2 宮頸癌細(xì)胞總RNA提取30-31
• 2.2.3 依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)(NASBA)擴(kuò)增HPV16 E6/E7 mRNA31-33
• 2.2.4 RNA反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)33
• 2.2.5 RT-PCR用于HPV16型E6XE7相關(guān)mRNA反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增33-35
• 2.2.6 實(shí)驗(yàn)所需試劑及儀器35-36
• 2.3 結(jié)果與討論36-49
• 2.3.1 芯片毛細(xì)管電泳(MCE)分離緩沖液的配制37-39
• 2.3.2 總RNA提取質(zhì)量分析39-40
• 2.3.3 依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)(NASBA)條件優(yōu)化40-42
• 2.3.4 依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)(NASBA)聯(lián)合芯片毛細(xì)管電泳(MCE)檢測(cè)E6/E7 mRNA特異性和靈敏度42-44
• 2.3.5 兩步法RT-PCR聯(lián)合芯片毛細(xì)管電泳(MCE)檢測(cè)E6/E7 mRNA44-46
• 2.3.6 一步法RT-PCR聯(lián)合芯片毛細(xì)管電泳(MCE)檢測(cè)E6/E7 mRNA46-47
• 2.3.7 RT-PCR聯(lián)合芯片毛細(xì)管電泳(MCE)檢測(cè)HPV18型E6/E7 mRNA47-49
• 2.4 本章小結(jié)49-50
• 第三章 基于滾換擴(kuò)增技術(shù)和血晶素/G-四聯(lián)體體系雙官能團(tuán)比色檢測(cè)P53蛋白50-59
• 3.1 前言50-51
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分51-54
• 3.2.1 芯片制備和修飾51-53
• 3.2.2 probe-primer-circle-template制備53
• 3.2.3 滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)和p53蛋白檢測(cè)53-54
• 3.3 結(jié)果與討論54-58
• 3.3.1 probe-primer-circle-template制備54
• 3.3.2 滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)和P53蛋白檢測(cè)54-58
• 3.4 本章小結(jié)58-59
• 第四章 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 附錄68-69
• 致謝69-70
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文70-71
• 作者與導(dǎo)師簡(jiǎn)介71-72
• 附件72-73

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉全利;宮頸癌相關(guān)生物標(biāo)記物檢測(cè)新方法研究[D];北京化工大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：914045