本文關(guān)鍵詞：基于循環(huán)腫瘤細(xì)胞在體捕獲方法的飲食因素抑癌效果評(píng)價(jià)

  更多相關(guān)文章： 飲食因素 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 在體捕獲 抑癌作用

【摘要】：飲食因素對(duì)癌癥的抑制機(jī)制復(fù)雜。研究表明,循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Criculating Tumor Cells,CTCs)在血液循環(huán)中的數(shù)量多少可反映癌癥進(jìn)展的程度,并可用于抗癌藥物的治療效果評(píng)價(jià)。因此評(píng)價(jià)飲食因素對(duì)CTCs的影響將有助于更全面地評(píng)價(jià)飲食因素的抑癌作用。論文介紹了一種基于功能化留置針的CTCs在體捕獲方法,并用于小鼠腫瘤模型外周血中CTCs的捕獲與檢測(cè),可在同一只動(dòng)物的多個(gè)癌癥進(jìn)展時(shí)間點(diǎn)評(píng)價(jià)飲食因素對(duì)CTCs的影響,該方法靈敏度高,操作簡(jiǎn)單且成本低,可用于評(píng)價(jià)飲食因素對(duì)癌癥轉(zhuǎn)移的影響。本課題組在之前的工作中介紹了一種基于功能化留置針的CTCs在體捕獲方法。本文將此方法用于小鼠腫瘤模型CTCs的捕獲,對(duì)捕獲的細(xì)胞采用免疫熒光染色鑒別并計(jì)數(shù)。第一章概述了CTCs檢測(cè)方法和飲食因素抑癌作用研究進(jìn)展,簡(jiǎn)單介紹了當(dāng)前飲食因素抑癌作用的評(píng)價(jià)方法。重點(diǎn)綜述了CTCs在體捕獲方法及幾種食品提取物抑癌作用的研究進(jìn)展。第二章將基于功能化留置針的在體捕獲方法用于捕獲小鼠腫瘤模型CTCs,結(jié)合體外細(xì)胞免疫熒光染色方法,鑒定CTCs并計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)將留置針套管表面包被聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS),PDMS可吸附抗上皮細(xì)胞粘附因子(EpCAM)抗體。上述功能化留置針能特異性捕獲可在細(xì)胞表面表達(dá)EpCAM抗原的CTCs。將功能化留置針穿刺入實(shí)驗(yàn)小鼠的尾靜脈,停留一段時(shí)間,可捕獲流經(jīng)靜脈的CTCs。將特異性捕獲的CTCs和非特異性吸附在針表面的白細(xì)胞洗脫后,經(jīng)過(guò)固定、透膜、熒光標(biāo)記抗體染色及細(xì)胞核染色等步驟完成細(xì)胞免疫熒光染色,在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察,根據(jù)細(xì)胞是否有核和不同抗體的特異性染色來(lái)區(qū)分計(jì)數(shù)白細(xì)胞和CTCs。實(shí)驗(yàn)對(duì)比了基于功能化留置針的在體捕獲方法和基于免疫磁球的體外捕獲方法的檢測(cè)效果。將不同數(shù)量的癌細(xì)胞接種小鼠,建立腫瘤模型,獲得不同癌癥進(jìn)展程度的小鼠,檢測(cè)不同癌癥進(jìn)展程度的小鼠腫瘤模型CTCs的數(shù)量。實(shí)驗(yàn)對(duì)洗脫劑及免疫熒光染色的細(xì)胞固著基底、透膜時(shí)間等進(jìn)行了優(yōu)化,選擇磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline,PBS)作為洗脫劑,酶標(biāo)板作為固著基底,透膜時(shí)間25 min。在體及體外捕獲方法分別于小鼠接種癌細(xì)胞后的第7天及第21天捕獲到CTCs。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著癌癥的惡化,CTCs的捕獲數(shù)量呈遞增趨勢(shì)。第三章介紹了不同的飲食因素對(duì)小鼠腫瘤模型CTCs數(shù)目變化的影響。實(shí)驗(yàn)采用姜黃素、原花青素、β-谷甾醇、紫蘇醇和茶多酚等有明確抑癌效果的抗癌食品活性成分,灌胃小鼠腫瘤模型,抑制其癌癥發(fā)展。考察了高糖飲食和高脂飲食等不良飲食模式對(duì)小鼠腫瘤模型CTCs數(shù)目的變化情況,并對(duì)其促癌作用進(jìn)行了比較。結(jié)合不同小鼠腫瘤模型的CTCs捕獲數(shù)目、原位癌體積和轉(zhuǎn)移癌的發(fā)展情況,從癌癥進(jìn)展的三個(gè)主要階段——原位癌、轉(zhuǎn)移過(guò)程和轉(zhuǎn)移瘤,全面評(píng)價(jià)了飲食因素的抑癌作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,多種有抑癌作用的抗癌食品活性成分對(duì)原位癌體積、CTCs數(shù)量和轉(zhuǎn)移瘤數(shù)量與發(fā)生率具有不同程度的抑制作用;不良飲食模式對(duì)癌癥進(jìn)展的各個(gè)階段均有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：飲食因素 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 在體捕獲 抑癌作用
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 中英文名詞術(shù)語(yǔ)對(duì)照11-12
• 第一章 緒論12-27
• 1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞概述12
• 2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲與檢測(cè)方法12-21
• 2.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外檢測(cè)方法研究進(jìn)展13-16
• 2.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞在體檢測(cè)方法研究進(jìn)展16-18
• 2.3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞在體捕獲方法研究進(jìn)展18-21
• 3 食品抗癌活性成分的抑癌作用21-26
• 3.1 飲食因素抑癌作用研究進(jìn)展21-24
• 3.2 飲食因素抑癌作用的評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展24-26
• 4 論文選題的意義、研究?jī)?nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)26-27
• 第二章 基于留置針的在體捕獲方法在小鼠腫瘤模型中的應(yīng)用27-41
• 1 引言27-29
• 2 實(shí)驗(yàn)部分29-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器29-31
• 2.2 相關(guān)溶液配制31
• 2.3 小鼠 4T1細(xì)胞的培養(yǎng)及準(zhǔn)備31-32
• 2.4 小鼠 4T1乳腺癌腫瘤模型的構(gòu)建32
• 2.5 功能化的留置針的制備32-33
• 2.6 小鼠腫瘤模型外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的在體捕獲33
• 2.7 循環(huán)腫瘤細(xì)胞免疫熒光染色鑒別和計(jì)數(shù)33-34
• 2.8 腫瘤模型原位癌體積測(cè)量和轉(zhuǎn)移瘤計(jì)數(shù)34
• 3 結(jié)果與討論34-40
• 3.1 基于免疫熒光染色的體外檢測(cè)方法的建立34-37
• 3.2 體外捕獲檢測(cè)方法和在體捕獲方法的對(duì)比37-38
• 3.3 在體捕獲方法在小鼠腫瘤模型癌癥發(fā)展評(píng)價(jià)中的應(yīng)用38-40
• 4 本章小結(jié)40-41
• 第三章 飲食因素對(duì)小鼠腫瘤模型的抑癌效果評(píng)價(jià)41-51
• 1 引言41-42
• 2 實(shí)驗(yàn)部分42-46
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器42-44
• 2.2 相關(guān)溶液配制44-45
• 2.3 小鼠 4T1細(xì)胞的培養(yǎng)及準(zhǔn)備45
• 2.4 小鼠 4T1乳腺癌腫瘤模型的構(gòu)建45
• 2.5 功能化的留置針的制備45
• 2.6 小鼠腫瘤模型的分組及灌胃45
• 2.7 小鼠腫瘤模型外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的在體捕獲45-46
• 2.8 循環(huán)腫瘤細(xì)胞的體外免疫染色鑒別和計(jì)數(shù)46
• 2.9 腫瘤模型原位癌體積的測(cè)量和轉(zhuǎn)移瘤計(jì)數(shù)46
• 3 結(jié)果與討論46-50
• 3.1 抗癌食品活性成分的抑癌效果的評(píng)價(jià)46-48
• 3.2 不良飲食模式的促癌效果的評(píng)價(jià)48
• 3.3 在體捕獲方法在飲食因素抑癌效果評(píng)價(jià)中的應(yīng)用48-50
• 4 本章小結(jié)50-51
• 第四章 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：911286