本文關(guān)鍵詞：糖代謝機(jī)制在丹參酮ⅡA和姜黃素抑制食管癌細(xì)胞增殖的作用研究

  更多相關(guān)文章： 丹參酮ⅡA 姜黃素 M2型丙酮酸激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 食管癌細(xì)胞

【摘要】：近年來發(fā)現(xiàn)細(xì)胞代謝異常是腫瘤細(xì)胞增殖的一個重要因素,而一些天然產(chǎn)物具有很好的抗腫瘤作用,但其對腫瘤細(xì)胞代謝水平的影響和作用機(jī)制目前尚未完全闡明。本課題觀察天然產(chǎn)物姜黃素和丹參酮ⅡA能否通過抑制腫瘤糖酵解途徑,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。姜黃素對食管癌Ec109細(xì)胞產(chǎn)生劑量依賴性抑制作用,可以誘導(dǎo)其出現(xiàn)G2/M周期阻滯。姜黃素下調(diào)糖酵解關(guān)鍵酶,包括葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUT4),己糖激酶(HK2),果糖磷酸激酶(PFKFP3)和丙酮酸激酶(PKM2)的mRNA和蛋白表達(dá)。姜黃素誘導(dǎo)Ec109細(xì)胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路蛋白的顯著性激活,并且呈濃度依賴性;AMPK激活劑AICAR促進(jìn)了姜黃素介導(dǎo)的Ec109細(xì)胞中糖酵解酶的下調(diào),然而其抑制劑compound C逆轉(zhuǎn)了姜黃素介導(dǎo)的Ec109細(xì)胞中糖酵解酶的下調(diào)現(xiàn)象,同時,小分子干擾RNA特異靶向AMPK顯著地逆轉(zhuǎn)了姜黃素介導(dǎo)Ec109細(xì)胞中糖酵解酶的下調(diào)現(xiàn)象。敲低GLUT4,HK2,PFKFP3和PKM2的表達(dá)后Ec109細(xì)胞存活率降低,然而敲低AMPK后促進(jìn)Ec109細(xì)胞的增殖,此現(xiàn)象表明姜黃素對Ec109細(xì)胞增殖的抑制是通過促進(jìn)AMPK的磷酸化激活A(yù)MPK信號通路來實現(xiàn)的,并最終抑制了Ec109細(xì)胞的增殖。丹參酮IIA能夠顯著的抑制Ec109細(xì)胞增殖,可以誘導(dǎo)其出現(xiàn)S期阻滯。丹參酮IIA誘導(dǎo)Ec109細(xì)胞中GLUT4,HK2,PFKFP3和PKM2表達(dá)的顯著性下調(diào)。敲低PKM2后可以促進(jìn)丹參酮ⅡA誘導(dǎo)Ec109細(xì)胞中PKM2表達(dá)的顯著性下調(diào)。TargetScan軟件預(yù)測PKM2是miR-122的潛在靶標(biāo),敲低miR-122后Ec109細(xì)胞中PKM2的表達(dá)明顯升高,而miR-122過表達(dá)顯著抑制了PKM2的表達(dá),結(jié)果表明Ec109細(xì)胞中miR-122是PKM2表達(dá)的負(fù)調(diào)控子,丹參酮ⅡA誘導(dǎo)miR-122上調(diào)與PKM2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。丹參酮ⅡA誘導(dǎo)miR-122上調(diào)有助于抑制Ec109細(xì)胞增殖,其通過靶向下調(diào)PKM2的表達(dá)實現(xiàn)。研究表明丹參酮IIA對PKM2表達(dá)的下調(diào)是通過促進(jìn)miR-122的表達(dá)上調(diào)來實現(xiàn)的,并最終抑制Ec109細(xì)胞的增殖。綜上所述,代謝重編程的逆轉(zhuǎn)在丹參酮ⅡA和姜黃素抑制Ec109細(xì)胞增殖中起著關(guān)鍵作用。深入認(rèn)識糖酵解途徑中限速酶和通路蛋白在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到怎樣的機(jī)制,從而為進(jìn)一步解釋W(xué)arburg效應(yīng)的分子機(jī)制,以及研發(fā)出靶向調(diào)控腫瘤代謝的藥物提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：丹參酮ⅡA 姜黃素 M2型丙酮酸激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 食管癌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R73-3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文縮寫詞7-11
• 第1章 緒論11-23
• 1.1 癌癥研究概況11-13
• 1.2 腫瘤糖酵解13-14
• 1.3 糖酵解通路中的關(guān)鍵酶與腫瘤14-16
• 1.3.1 己糖激酶 2(HK2)14
• 1.3.2 丙酮酸激酶(PK)14-15
• 1.3.3 果糖磷酸激酶 2(PFK2/PFKFB3)15-16
• 1.3.4 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUT)16
• 1.4 糖酵解通路中的信號途徑與腫瘤16-18
• 1.4.1 PI3K-AKT信號通路16-17
• 1.4.2 mTOR信號通路與腫瘤糖代謝17
• 1.4.3 AMPK信號通路與腫瘤糖代謝17-18
• 1.5 天然產(chǎn)物對腫瘤代謝的影響18-21
• 1.5.1 姜黃素19-20
• 1.5.2 丹參酮20-21
• 1.6 miRNA調(diào)控糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶與腫瘤21-22
• 1.7 研究內(nèi)容與意義22-23
• 第2章 姜黃素通過AMPK通路介導(dǎo)的代謝轉(zhuǎn)變抑制Ec109細(xì)胞生長23-41
• 2.1 引言23-24
• 2.2 實驗材料24-27
• 2.2.1 藥品24
• 2.2.2 儀器設(shè)備24
• 2.2.3 試劑及耗材24-26
• 2.2.4 引物的設(shè)計合成26-27
• 2.3 實驗方法27-32
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)27
• 2.3.2 MTS法細(xì)胞毒檢測27-28
• 2.3.3 細(xì)胞凋亡試驗28
• 2.3.4 RNA提取及RT-PCR實驗28-30
• 2.3.5 蛋白質(zhì)提取及Western檢測30-32
• 2.3.6 轉(zhuǎn)染32
• 2.3.7 統(tǒng)計學(xué)處理32
• 2.4 實驗結(jié)果32-37
• 2.4.1 姜黃素抑制Ec109細(xì)胞生長32-33
• 2.4.2 姜黃素誘導(dǎo)Ec109細(xì)胞周期阻滯在G2/M期33-35
• 2.4.3 姜黃素下調(diào)Ec109細(xì)胞中的糖酵解酶的表達(dá)35-36
• 2.4.4 AMPK參與姜黃素介導(dǎo)的Ec109細(xì)胞中糖酵解酶的下調(diào)過程36
• 2.4.5 AMPK介導(dǎo)的糖酵解酶下調(diào)阻遏Ec109細(xì)胞的生長36-37
• 2.5 討論37-39
• 2.6 本章小結(jié)39-41
• 第3章 糖代謝機(jī)制在丹參酮ⅡA抑制Ec109細(xì)胞增殖的作用研究41-59
• 3.1 引言41
• 3.2 實驗材料41-42
• 3.2.1 藥品41-42
• 3.3 實驗方法42-45
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)42
• 3.3.2 MTS法細(xì)胞毒檢測42
• 3.3.3 細(xì)胞周期分析42
• 3.3.4 RNA提取及RT-PCR實驗42-43
• 3.3.5 蛋白質(zhì)提取及Western檢測43
• 3.3.6 micro RNA轉(zhuǎn)染43-44
• 3.3.7 轉(zhuǎn)染44-45
• 3.3.8 統(tǒng)計學(xué)處理45
• 3.4 實驗結(jié)果45-55
• 3.4.1 丹參酮ⅡA對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用45-46
• 3.4.2 丹參酮ⅡA對Ec109細(xì)胞細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響46-48
• 3.4.3 丹參酮ⅡA對糖酵解通路關(guān)鍵酶mRNA表達(dá)的影響48-49
• 3.4.4 丹參酮ⅡA對糖酵解通路關(guān)鍵酶蛋白表達(dá)的影響49-51
• 3.4.5 siRNA轉(zhuǎn)染檢測丹參酮ⅡA對腫瘤細(xì)胞糖酵解通路關(guān)鍵酶的抑制作用51-52
• 3.4.6 丹參酮ⅡA通過miRNA下調(diào)PKM2的表達(dá)從而抑制Ec109細(xì)胞的增殖52-55
• 3.5 討論55-57
• 3.6 本章小結(jié)57-59
• 結(jié)論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71-73
• 致謝73

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本文編號：907667