本文關(guān)鍵詞：腫瘤微環(huán)境中hUC-MSCs的生物學(xué)特性分析

  更多相關(guān)文章： hUC-MSCS 腫瘤微環(huán)境 生物學(xué)特性 BMSCS

【摘要】：目的通過構(gòu)建人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,hUC-MSCs)與MCF-7B乳腺癌細(xì)胞及U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞非接觸共培養(yǎng)模型,探討hUC-MSCs在腫瘤微環(huán)境中生物學(xué)特性改變及其分子機(jī)制,為hUC-MSCs作為腫瘤靶向治療載體的臨床安全應(yīng)用提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；通過構(gòu)建SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型,腫瘤原位注射BMSCsCM-Dil (Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)并動(dòng)態(tài)觀察其在腫瘤組織的分布,為BMSCs在體內(nèi)腦膠質(zhì)瘤微環(huán)境中惡性轉(zhuǎn)化的研究提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性裸鼠,6周齡,體重20±5g；SPF級(jí)雄性SD大鼠,3-5周齡,體重50±10 g；SPF級(jí)雄性SD大鼠,體重200-250 g；以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)于“重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心”。2.細(xì)胞來(lái)源hUC-MSCs由重慶市干細(xì)胞治療工程技術(shù)研究中心惠贈(zèng)；乳腺癌細(xì)胞系MCF-7B購(gòu)自廣州吉妮歐生物科技有限公司；腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)；腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系C6來(lái)源于重慶醫(yī)科大學(xué)“兒科研究所”；大鼠BMSCs由骨髓貼壁法分離獲得。3.實(shí)驗(yàn)分組研究共分為三部分：4.實(shí)驗(yàn)方法第一部分及第二部分：hUC-MSCs在腫瘤微環(huán)境中生物學(xué)特性的檢測(cè)4.1非接觸共培養(yǎng)后,細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征觀察。4.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí)相分布。4.3 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。4.4細(xì)胞染色體核型分析。4.5體內(nèi)裸鼠成瘤試驗(yàn)及組織HE染色。4.6β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老。4.7 RT-qPCR檢測(cè)各組hTERT.c-Myc和Bcl-x1的mRNA相對(duì)表達(dá).4.8 Western b lot檢測(cè)各組p53.c-Myc和Bcl-x1蛋白表達(dá)。4.9細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)c-Myc和Bcl-xl蛋白表達(dá)及定位。第三部分：腦膠質(zhì)瘤模型建立及BMSCsCM-Dil原位注射及其分布觀察4.10倒置顯微鏡下觀察CM-Dil熒光標(biāo)記的BMSCs。4.11腦活體定位建立腦膠質(zhì)瘤模型。4.12 HE染色觀察腦膠質(zhì)瘤組織結(jié)構(gòu)。4.13熒光顯微鏡下觀察BMSCs在腫瘤組織中的分布。結(jié)果第一部分及第二部分：hUC-MSCs在腫瘤微環(huán)境中的生物學(xué)特性分析1.各組細(xì)胞培養(yǎng)至P10代,兩實(shí)驗(yàn)組hUC-MSCs呈多形性,大小不均核質(zhì)比略增大,細(xì)胞聚集成團(tuán)狀生長(zhǎng),排列較紊亂呈輕度異型性。2.實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2的hUC-MSCs G1期比例顯著低于對(duì)照組(p0.05),S期和G2期細(xì)胞比例均顯著高于對(duì)照組(p0.05)。3.兩實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率在第2天到第6天均顯著高于空白對(duì)照組的hUC-MSCs (p0.05)。4.兩實(shí)驗(yàn)組經(jīng)染色體分析,其染色體總數(shù)均為46條,分為23對(duì)(46,XX),G顯帶未見染色體結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯異常的改變。5.8W后空白對(duì)照組及兩實(shí)驗(yàn)組裸鼠死亡未見包塊形成。HE染色顯示,空白對(duì)照組及兩實(shí)驗(yàn)組皮下肌肉組織結(jié)構(gòu)正常,排列規(guī)則,細(xì)胞胞質(zhì)染為紅色,多個(gè)扁平胞核分布于細(xì)胞邊緣,呈藍(lán)色。6.培養(yǎng)至6Wβ-半乳糖苷酶染色顯示,實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2 SA-P-gal活性細(xì)胞比例顯著高于空白對(duì)照組(p0.05)。7.實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2細(xì)胞c-Myc和Bcl-xl的mRNA相對(duì)表達(dá)量與空白對(duì)照組相比均顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而實(shí)驗(yàn)組hTERT mRNA水平與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著差異,且較陽(yáng)性對(duì)照組,其表達(dá)量極低。8.實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2細(xì)胞p53、c-Myc和Bcl-xl蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著高于空白對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。9.c-Myc蛋白定位于細(xì)胞核,兩實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率均顯著高于空白對(duì)照組(p0.05)；Bcl-xl胞質(zhì)與胞核均有表達(dá),主要定位于細(xì)胞核外膜,兩實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于空白對(duì)照組(p0.05)。第三部分：腦膠質(zhì)瘤模型建立及BMSCsCM-Dil原位注射及分布觀察10.CM-Dil標(biāo)記的BMSCs呈現(xiàn)紅色熒光,主要表達(dá)于細(xì)胞膜。11.腦膠質(zhì)瘤模型建立后7 d, SD大鼠右側(cè)大腦半球表面出現(xiàn)直徑約1 cm的圓形異常組織,浸潤(rùn)生長(zhǎng),周邊組織腫脹,中線向左側(cè)偏移約1-1.5 mm。12.HE染色可見腫瘤組織密集排列,浸潤(rùn)性生長(zhǎng),與正常腦部組織分界不清,質(zhì)地較均勻,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),胞核深染,核質(zhì)比增大,亦可見新生血管生成。13.實(shí)驗(yàn)組BMSCsCM-Dil植入C6/SD大鼠腦膠質(zhì)瘤中2 d,存在于針道損傷部位,7d后BMSCsCM-Dil已大量遷移至腫瘤組織邊緣。結(jié)論1.本研究通過hUC-MSCs與MCF-7B乳腺癌細(xì)胞及U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞非接觸共培養(yǎng)模型的構(gòu)建,證實(shí)hUC-MSCs受腫瘤微環(huán)境中炎癥性因子作用易通過細(xì)胞周期限制點(diǎn)使增殖能力加強(qiáng),受癌基因壓力信號(hào)作用,p53蛋白激活致使不可修復(fù)的細(xì)胞衰老,防止其惡性轉(zhuǎn)化,維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性,2.成功構(gòu)建SD大鼠C6腦膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型,CM-Dil熒光標(biāo)記的BMSCs植入膠質(zhì)瘤內(nèi)定位分布于正常腦組織與膠質(zhì)瘤的交界部位,為BMSCs在體內(nèi)腦膠質(zhì)瘤微環(huán)境中惡性轉(zhuǎn)化的研究提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br/> 【關(guān)鍵詞】：hUC-MSCS 腫瘤微環(huán)境 生物學(xué)特性 BMSCS
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-36
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-17
• 前言17-19
• 第一部分 腫瘤微環(huán)境中hUC-MSCs的生物學(xué)特性19-33
• 1 材料與方法19-24
• 2 結(jié)果24-28
• 3 討論28-30
• 4 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第二部分 hUC-MSCs在腫瘤微環(huán)境中生物學(xué)特性改變的分子機(jī)制研究33-47
• 1 材料與方法33-39
• 2 結(jié)果39-41
• 3 討論41-44
• 4 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 第三部分 SD大鼠C6腦膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型的建立及大鼠BMSCs原位注射后的分布觀察47-57
• 1 材料與方法47-51
• 2 結(jié)果51-53
• 3 討論53-54
• 4 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 全文總結(jié)57
• 創(chuàng)新性與意義57
• 局限性57-58
• 文獻(xiàn)綜述58-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 致謝66-67
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄67

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8 張t焹，

本文編號(hào)：902523