本文關(guān)鍵詞：ILT4和HLA-G在NSCLC中的共表達(dá)對(duì)病人預(yù)后的影響及其機(jī)制研究

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【摘要】：[研究背景]肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病路和死亡率均很高的惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC, non-small-cell lung cancer)是肺癌最常見的類型,占肺癌所有類型的的85%。ILT4是免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子家族的一員,主要通過免疫受體絡(luò)氨酸抑制基序產(chǎn)生抑制信號(hào)。本課組前期研究在NSCLC細(xì)胞中檢測(cè)到ILT4的表達(dá),且其表達(dá)與患者臨床預(yù)后具有相關(guān)性,ILT4可以通過免疫調(diào)節(jié)和非免疫調(diào)節(jié)參與促進(jìn)NSCLC進(jìn)展的過程。HLA-G屬于非經(jīng)典MHCI分子,可在腫瘤組織中表達(dá)并發(fā)揮免疫逃避的作用。已有研究證實(shí),HLA-G在NSCLC患者肺癌組織和血漿中均有表達(dá),并與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后相關(guān)。綜上所述,ILT4和HLA-G均可表達(dá)于NSCLC中,而且均可以影響NSCLC的進(jìn)程。由此我們推測(cè),ILT4和HLA-G可能通過相互作用參與NSCLC的進(jìn)展。據(jù)我們所知,關(guān)于ILT4和HLA-G在NSCLC中的共表達(dá)作用和相互調(diào)節(jié)機(jī)制目前尚無(wú)人研究。本課題組擬研究ILT4和HLA-G在NSCLC組織和細(xì)胞中的共表達(dá),分析二者共表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系,并進(jìn)一步研究二者參與NSCLC進(jìn)展的分子生物學(xué)機(jī)制,這將對(duì)提高NSCLC治療的有效率、延長(zhǎng)病人的無(wú)病生存期、改善預(yù)后具有重要意義。[目的]明確ILT4及HLA-G在NSCLC細(xì)胞系和腫瘤組織中的共表達(dá)情況；明確ILT4與HLA-G的共表達(dá)對(duì)NSCLC患者預(yù)后的影響；明確ILT4與HLA-G在NSCLC中共表達(dá)的相互調(diào)節(jié)作用；探究二者相互作用影響NSCLC發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制；[方法]1、采用免疫組化方法,檢測(cè)81例NSCLC腫瘤組織中ILT4和HLA-G的表達(dá)情況,分析ILT4與HLA-G表達(dá)之間的相關(guān)性,從而分析ILT4-HLA-G共表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系；2、收集81例患者病歷資料,采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件中Kaplan-Meier法分析并繪制生存曲線,觀察ILT4與HLA-G的共表達(dá)對(duì)NSCLC患者生存和預(yù)后的影響。3、采用RT-PCR和Western Blot的方法,檢測(cè)5株NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、H1650、H226、H1299、H1975中ILT4及HLA-G mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況。4、檢測(cè)上調(diào)或下調(diào)受體ILT4的表達(dá)是否對(duì)HLA-G的表達(dá)產(chǎn)生影響。采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù),分別用Pez-lv105-ILT-4 (ILT-4 vector)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ILT4低表達(dá)細(xì)胞株(H1650)上調(diào)ILT4的表達(dá),用pGPU6/GFP/Neo-shILT4 (shILT4)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ILT4高表達(dá)細(xì)胞株(A549)下調(diào)ILT4的表達(dá),通過RT-PCR和Western Blot的方法,檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞株中HLA-G mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化；5、在HLA-G低表達(dá)細(xì)胞株(1650)中加入不同濃度的HLA-G重組蛋白刺激,采用RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞株中ILT4 mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化；采用western blot的方法檢測(cè)信號(hào)通路蛋白pAKT, pERK1/2, pNF-κB。6、在H1650細(xì)胞株中加入ILT4封閉性抗體,再加入HLA-G重組蛋白刺激,采用western blot的方法檢測(cè)信號(hào)通路蛋白pERKl/2的表達(dá)變化。[結(jié)果]1、在NSCLC腫瘤組織中,ILT4和HLA-G存在共表達(dá)并與臨床參數(shù)具有相關(guān)性。在81例病例組織中,ILT4和HLA-G的表達(dá)有非常明顯的相關(guān)關(guān)系(P(0.0001,R=0.596)。ILT4+/HLA-G+組與其他組(ILT4-/HLA-G-組、ILT4+/HLA-G-組和ILT4-/HLA-G+組)相比,在局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.001)和和腫瘤分期(p=0.006)更具相關(guān)性。ILT4+/HLA-G+組與ILT4-/HLA-G-組相比,在組織學(xué)類型(p=0.042)和細(xì)胞分化(p=0.013)也具相關(guān)性。2、ILT4和HLA-G的共表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后相關(guān)。Kaplan-Meier法計(jì)算生存率并繪制生存曲線分析,ILT4+/HLA-G+的患者的生存率明顯比ILT4-/HLA-G-患者(p=0.048)和ILT4+/HLA-G-患者(p=0.021)低。但是ILT4+/HLA-G+的患者與ILT4-/HLA-G+的患者相比,生存率無(wú)明顯差異(p=0.254)。3、在NSCLC細(xì)胞系中,ILT4和HLA-G存在共表達(dá)。5株NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、H1650、H226、H1299、H1975中均有ILT4及HLA-G的表達(dá)。且二者在五銖細(xì)胞系中的表達(dá)強(qiáng)度具有一致性。4、在NSCLC細(xì)胞系中,上調(diào)、下調(diào)ILT4的表達(dá)可影響HLA-G的表達(dá)。與對(duì)照組相比,上調(diào)ILT4表達(dá)水平,]HLA-G的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高；下調(diào)ILT4表達(dá)水平,HLA-G的mRNA和蛋白表達(dá)水平也下降。5、HLA-G重組蛋白刺激可以上調(diào)ILT4的表達(dá)。加入不同濃度的HLA-G重組蛋白刺激,ILT4在mRNA和蛋白水平的表達(dá)均上調(diào),并成明顯的濃度依賴性。6、HLA-G與ILT4的相互作用可以激活ERK信號(hào)通路。在NSCLC中加入HLA-G重組蛋白后,pERK1/2的表達(dá)明顯增高,而加入ILT4封閉抗體后再用HLA-G重組蛋白刺激,可抵消pERK1/2的增高。[結(jié)論]本研究對(duì)81例NSCLC患者腫瘤組織進(jìn)行免疫組化分析,結(jié)果顯示ILT4-HLA-G共表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及患者預(yù)后生存明顯相關(guān)。NSCLC細(xì)胞系中ILT4與HLA-G在mRNA和蛋白水平均存在共表達(dá),且ILT4和HLA-G在NSCLC細(xì)胞中的表達(dá)可以相互調(diào)節(jié)。HLA-G與ILT4的相互作用可激活ERK信號(hào)通路。因此,我們推測(cè)ILT4與HLA-G之間可能存在潛在的相互作用機(jī)制,對(duì)NSCLC的進(jìn)展產(chǎn)生影響。ILT4和HLA-G的檢測(cè),可能有助于NSCLC的預(yù)后預(yù)測(cè)和指導(dǎo)NSCLC的防治。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子4 人類白細(xì)胞抗原-G 靶向治療
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 符號(hào)說明13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-35
• 結(jié)果35-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 附圖表42-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-52
• 攻讀學(xué)位期間撰寫的論文52-53
• 外文論文53-66
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表66

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本文編號(hào)：889891