本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞周期相關(guān)蛋白參與NSCLC大分割放療敏感性的調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 非小細(xì)胞肺癌 大分割放療 放療抗拒 細(xì)胞周期 p21 Cyclin D1

【摘要】：目的:1.建立人源非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)A549常規(guī)分割(A549-2R)和大分割(A549-4R)放療抗拒細(xì)胞系。2.明確細(xì)胞周期分布在A549-NC組、A549-2R組、A549-4R組不同放療敏感性中的作用,并進(jìn)一步探討各組細(xì)胞周期分布差異的機(jī)制。方法:1.體外培養(yǎng)A549細(xì)胞,分別經(jīng)6MV-X線常規(guī)照射(2Gy*17f)和大分割照射(4Gy*7f)篩選常規(guī)分割抗拒細(xì)胞系(A549-2R組)和大分割抗拒細(xì)胞系(A549-4R組)。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)A549-NC組、A549-2R組、A549-4R組在接受單次0Gy、2Gy、4Gy照射后細(xì)胞周期分布情況(PI單染)。3.基因芯片技術(shù)檢測(cè)A549-NC組、A549-2R組、A549-4R組周期相關(guān)蛋白基因表達(dá)情況。4.Western-blot檢測(cè)A549-NC組、A549-2R組、A549-4R組在接受單次0Gy、2Gy、4Gy照射后P53、P53 Ser15、P53 Ser20、P21、Cyclin D1、Cyclin D3、CDK2、CDK4、CDK6等周期相關(guān)蛋白表達(dá)情況。5.免疫組化技術(shù)檢測(cè)NSCLC患者中Aurora A、P53、P21表達(dá)情況,進(jìn)一步探討P53、P21不同表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的影響。結(jié)果:1.通過(guò)多分割照射可獲得放療抗拒細(xì)胞系。在細(xì)胞形態(tài)上,A549-2R組和A549-4R組細(xì)胞均較A549-NC組細(xì)胞變長(zhǎng)變細(xì),呈細(xì)長(zhǎng)條狀,胞漿渾濁,邊緣毛糙,細(xì)胞間隙增大,且A549-4R組較A549-2R組更明顯。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,在基礎(chǔ)狀態(tài)下(未接受單次射線刺激),A549-2R組與A549-NC組細(xì)胞周期分布無(wú)明顯差異;A549-4R組與A549-NC組比較,G1期細(xì)胞明顯減少而S期細(xì)胞明顯增多,提示A549-4R組增殖潛能及DNA修復(fù)潛力增加。接受單次放療刺激后,A549-NC組可激活G1/S期阻滯使細(xì)胞停滯于G1期,表現(xiàn)為G1期細(xì)胞增多而S期和G2期細(xì)胞減少。而A549-2R組和A549-4R組G1/S期檢查點(diǎn)失效,DNA損傷后不能誘導(dǎo)細(xì)胞停滯于G1期,表現(xiàn)為G1期細(xì)胞比例不變或減少、S期和G2期細(xì)胞增多;A549-NC組、A549-2R組和A549-4R組均可誘導(dǎo)G2/M期阻滯,表明A549-2R組和A549-4R組G2/M期檢查點(diǎn)仍可正常運(yùn)行。3.基因芯片結(jié)果顯示,A549-NC組與A549-2R組相比,2R組cyclin D和cyclin E表達(dá)升高2倍以上,而P53、P21、CDK2、CDK4、CDK6表達(dá)無(wú)差異;A549-NC組與A549-4R組比較,4R組CDK4、CDK6和cyclin E表達(dá)升高2倍以上,而P53、P21、CDK2、cyclin D表達(dá)無(wú)差異;A549-2R組與A549-4R組比較,4R組P21表達(dá)降低2倍以上,而P53、CDK2、CDK4、CDK6、cyclin D、cyclin E表達(dá)無(wú)明顯差異。4.Western Blot結(jié)果顯示,A549-NC組、A549-2R組和A549-4R組P53、P53Ser15、P53 Ser20及P21總蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異;而胞漿P21蛋白在NC、2R、4R組表達(dá)逐漸增高,且在各組隨著放療劑量增加表達(dá)增高。A549-2R組和A549-4R組CDK6和cyclin D1表達(dá)均較A549-NC組明顯升高,而CDK2、CDK4和cyclin D3表達(dá)無(wú)明顯差異。A549-2R組和A549-4R組間周期相關(guān)蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。5.免疫組化結(jié)果顯示,58例NSCLC患者中Aurora A、P53及P21表達(dá)陽(yáng)性率分別為89.7%(52/58)、46.6%(27/58)、31.0%(18/58)。Aurora A與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率相關(guān),即高表達(dá)者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高(69.2%vs.37.8%,P=0.045)。單因素分析,Aurora A低表達(dá)組OS明顯優(yōu)于高表達(dá)組,1、2、3年生存率分別為90%vs.80.3%,77%vs.50.5%,75%vs.46%(P=0.039);P53低表達(dá)組OS明顯優(yōu)于高表達(dá)組,1、2、3年生存率分別為91.9%vs.83.4%,82.3%vs.57.5%,80.6%vs.55.6%(χ2=4.39,P=0.036),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P21低表達(dá)組OS明顯優(yōu)于高表達(dá)組,1、2、3年生存率分別為92.0%vs.77.8%,80%vs.50%,77.5%vs.50%(χ2=4.56,P=0.033),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.A549-2R組放療抗拒可能與cyclin D1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致的G1/S期檢查點(diǎn)失效有關(guān),胞漿中過(guò)表達(dá)的P21通過(guò)輔助cyclin D-CDK4/6結(jié)合進(jìn)一步促進(jìn)G1/S期轉(zhuǎn)換。2.A549-4R組放療抗拒與G1/S期檢查點(diǎn)失效、S期細(xì)胞積聚均有關(guān)。A549-4R組G1/S期檢查點(diǎn)失效與A549-2R組相同,即與cyclin D1及胞漿P21蛋白過(guò)表達(dá)有關(guān)。此外,A549-4R組S期細(xì)胞增多、增殖潛能增強(qiáng)及DNA修復(fù)潛力增加進(jìn)一步增加其放療抗拒性。3.A549-2R組、A549-4R組P53-P21介導(dǎo)的G2/M期阻滯仍能正常運(yùn)行。4.Aurora A、P53、P21可作為NSCLC患者的預(yù)后指標(biāo),Aurora A、P53、P21為NSCLC患者的不良預(yù)后指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 大分割放療 放療抗拒 細(xì)胞周期 p21 Cyclin D1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明12-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、NSCLC抗拒細(xì)胞系的建立及細(xì)胞周期檢測(cè)16-31
• 1.1 對(duì)象和方法16-19
• 1.1.1 材料與儀器16-17
• 1.1.2 主要試劑的配制17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 1.2 結(jié)果19-27
• 1.2.1 放療抗拒細(xì)胞系的建立19-20
• 1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果20-27
• 1.3 討論27-29
• 1.3.1 大分割抗拒組S期細(xì)胞明顯增多、G1期細(xì)胞明顯減少28
• 1.3.2 放療抗拒組G1/S期檢查點(diǎn)失效而G2/M期檢查點(diǎn)仍正常28-29
• 1.4 小結(jié)29-31
• 二、各組細(xì)胞周期分布差異機(jī)制的探討31-49
• 2.1 對(duì)象和方法31-38
• 2.1.1 材料與儀器31-32
• 2.1.2 主要試劑的配制32-34
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法34-38
• 2.2 結(jié)果38-44
• 2.2.1 全基因組芯片篩選結(jié)果38-40
• 2.2.2 Western Blot檢測(cè)周期相關(guān)蛋白表達(dá)情況40-41
• 2.2.3 58例NSCLC患者中p21、p53表達(dá)與預(yù)后分析41-44
• 2.3 討論44-48
• 2.3.1 A549-2R組放療抗拒機(jī)制的探討45-46
• 2.3.2 A549-4R組放療抗拒機(jī)制的探討46
• 2.3.3 本研究中G2/M期檢查點(diǎn)作用的探討46-47
• 2.3.4 Aurora A、p21、p53表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后分析47-48
• 2.4 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明57-58
• 綜述 細(xì)胞周期在腫瘤放療敏感性中的研究進(jìn)展58-71
• 綜述參考文獻(xiàn)65-71
• 致謝71

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本文編號(hào)：889476