本文關鍵詞：SERPINA3高表達對MGC803細胞增殖的影響

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【摘要】：胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。雖然我國胃癌的診斷和治療水平已明顯提高,但是患者的5年生存率仍然非常低,不足15%。胃癌的發(fā)生是一個多因素參與、多基因相互作用和多階段演進的復雜病理學過程。我們課題組前期采用激光捕獲顯微切割與定量蛋白質組學技術,從正常胃粘膜、非典型增生、胃低分化腺癌及淋巴結轉移癌組織中鑒定了243個胃粘膜上皮細胞癌變過程中各階段的差異表達蛋白質,其中SERPINA3蛋白質在胃粘膜癌變過程中表達進行性下調。為了探討SERPINA3高表達對MGC803細胞增殖的影響,我們采用基因重組技術,建立了SERPINA3穩(wěn)定高表達的胃癌MGC803細胞系(MGC803/pcDNA3.1-SERPINA3);通過繪制細胞生長曲線、平皿克隆形成實驗、軟瓊脂集落形成實驗、流式細胞術,觀察SERPINA3高表達對MGC803細胞增殖、周期與凋亡的影響。結果顯示:1、MGC803/pcDNA3.1-SERPINA3細胞較對照細胞MGC803/pcDNA3.1的生長速度減慢、平皿克隆數(shù)和軟瓊脂集落數(shù)均減少。2、MGC803/pcDNA3.1-SERPINA3細胞較對照細胞MGC803/pcDNA3.1的凋亡率增加、細胞增殖指數(shù)降低。結果表明:SERPINA3通過降低MGC803細胞的增殖指數(shù),誘導細胞的凋亡,而發(fā)揮其抑制細胞增殖的作用。
【關鍵詞】：胃癌 MGC803細胞 周期與凋亡 細胞增殖
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 主要縮略語英文索引9-10
• 第1章 前言10-12
• 技術路線12-14
• 第2章 材料和方法14-20
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 細胞系14
• 2.1.2 菌株和質粒載體14
• 2.1.3 主要試劑14
• 2.1.4 引物14-15
• 2.1.5 主要實驗儀器15
• 2.2 方法15-20
• 2.2.1 質粒的轉化和純化15
• 2.2.2 RT-PCR15-16
• 2.2.3 pCDNA3.1- SERPINA3真核表達載體的構建16
• 2.2.4 細胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.5 基因轉染17
• 2.2.6 轉染陽性克隆細胞的鑒定17
• 2.2.7 MTT比色法繪制細胞生長曲線17-18
• 2.2.8 流式細胞儀（FCM）檢測細胞周期和凋亡18
• 2.2.9 平板克隆形成實驗18-19
• 2.2.10 軟瓊脂集落形成實驗19
• 2.2.11 結果統(tǒng)計學分析19-20
• 第3章 實驗結果20-32
• 3.1 pcDNA3.1- SERPINA3質粒的重組與鑒定20-22
• 3.2 建立SERPINA3穩(wěn)定高表達的MGC803細胞系22-24
• 3.3 MTT法檢測SERPINA3高表達對MGC803細胞生長的影響1524-25
• 3.4 平皿克隆形成實驗檢測SERPINA3高表達對MGC803細胞停泊依賴性生長的影響25-26
• 3.5 軟瓊脂集落形成實驗檢測SERPINA3高表達對MGC803細胞非停泊依賴性生長的影響26-28
• 3.6 流式細胞術檢測SERPINA3高表達對MGC803細胞周期分布的影響28-29
• 3.7 流式細胞術檢測SERPINA3高表達對MGC803細胞凋亡的影響29-32
• 第4章 討論32-36
• 第5章 結論36-38
• 參考文獻38-42
• 文獻綜述 啟動子報道基因分析的原理與應用42-52
• 參考文獻48-52
• 作者攻讀學位期間的科研成果52-54
• 致謝54-55
• 基金55

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