本文關(guān)鍵詞：SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響

  更多相關(guān)文章： 胃癌 MGC803細(xì)胞 周期與凋亡 細(xì)胞增殖

【摘要】：胃癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。雖然我國(guó)胃癌的診斷和治療水平已明顯提高,但是患者的5年生存率仍然非常低,不足15%。胃癌的發(fā)生是一個(gè)多因素參與、多基因相互作用和多階段演進(jìn)的復(fù)雜病理學(xué)過(guò)程。我們課題組前期采用激光捕獲顯微切割與定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),從正常胃粘膜、非典型增生、胃低分化腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中鑒定了243個(gè)胃粘膜上皮細(xì)胞癌變過(guò)程中各階段的差異表達(dá)蛋白質(zhì),其中SERPINA3蛋白質(zhì)在胃粘膜癌變過(guò)程中表達(dá)進(jìn)行性下調(diào)。為了探討SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響,我們采用基因重組技術(shù),建立了SERPINA3穩(wěn)定高表達(dá)的胃癌MGC803細(xì)胞系(MGC803/pcDNA3.1-SERPINA3);通過(guò)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù),觀察SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞增殖、周期與凋亡的影響。結(jié)果顯示:1、MGC803/pcDNA3.1-SERPINA3細(xì)胞較對(duì)照細(xì)胞MGC803/pcDNA3.1的生長(zhǎng)速度減慢、平皿克隆數(shù)和軟瓊脂集落數(shù)均減少。2、MGC803/pcDNA3.1-SERPINA3細(xì)胞較對(duì)照細(xì)胞MGC803/pcDNA3.1的凋亡率增加、細(xì)胞增殖指數(shù)降低。結(jié)果表明:SERPINA3通過(guò)降低MGC803細(xì)胞的增殖指數(shù),誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡,而發(fā)揮其抑制細(xì)胞增殖的作用。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 MGC803細(xì)胞 周期與凋亡 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 主要縮略語(yǔ)英文索引9-10
• 第1章 前言10-12
• 技術(shù)路線12-14
• 第2章 材料和方法14-20
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 細(xì)胞系14
• 2.1.2 菌株和質(zhì)粒載體14
• 2.1.3 主要試劑14
• 2.1.4 引物14-15
• 2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器15
• 2.2 方法15-20
• 2.2.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化和純化15
• 2.2.2 RT-PCR15-16
• 2.2.3 pCDNA3.1- SERPINA3真核表達(dá)載體的構(gòu)建16
• 2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.5 基因轉(zhuǎn)染17
• 2.2.6 轉(zhuǎn)染陽(yáng)性克隆細(xì)胞的鑒定17
• 2.2.7 MTT比色法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線17-18
• 2.2.8 流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡18
• 2.2.9 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)18-19
• 2.2.10 軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)19
• 2.2.11 結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19-20
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-32
• 3.1 pcDNA3.1- SERPINA3質(zhì)粒的重組與鑒定20-22
• 3.2 建立SERPINA3穩(wěn)定高表達(dá)的MGC803細(xì)胞系22-24
• 3.3 MTT法檢測(cè)SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)的影響1524-25
• 3.4 平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞停泊依賴性生長(zhǎng)的影響25-26
• 3.5 軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞非停泊依賴性生長(zhǎng)的影響26-28
• 3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞周期分布的影響28-29
• 3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SERPINA3高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞凋亡的影響29-32
• 第4章 討論32-36
• 第5章 結(jié)論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 文獻(xiàn)綜述 啟動(dòng)子報(bào)道基因分析的原理與應(yīng)用42-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果52-54
• 致謝54-55
• 基金55

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