本文關(guān)鍵詞：2,3-吲哚醌抗人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞侵襲及遷移機(jī)制研究

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【摘要】：背景:2,3-吲哚醌(Isatin)是色氨酸代謝途徑的產(chǎn)物,廣泛存在于人和哺乳動(dòng)物的組織和體液中。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Isatin對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用,本研究旨在研究Isatin對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞侵襲和遷移的抑制作用及其機(jī)制。方法:不同濃度Isatin(100,200,400μmol/L)處理細(xì)胞,transwell小室測(cè)定SH-SY5Y細(xì)胞侵襲能力,劃痕法測(cè)定SH-SY5Y細(xì)胞遷移能力,Real-time PCR檢測(cè)SH-SY5Y細(xì)胞MMP2和MMP9的表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)SH-SY5Y細(xì)胞MMP2和MMP9的表達(dá)和STAT3的磷酸化水平。結(jié)果:Isatin能顯著抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞侵襲和遷移能力。Isatin處理細(xì)胞后,SH-SY5Y細(xì)胞穿過(guò)Transwell小室的數(shù)量明顯減少,侵襲抑制率分別為42.14%和87.42%(P0.01),200μmol/L Isatin在36 h和48 h對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞遷移抑制率為42.78%和45.03%(P0.05)。Real-time PCR顯示,隨著Isatin濃度增加,MMP2和MMP9 m RNA表達(dá)顯著下降(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,隨著Isatin濃度增加,MMP2和MMP9 m RNA和蛋白表達(dá)顯著下降(P0.05);Western blot結(jié)果表明,隨著Isatin濃度增加,STAT3磷酸化水平顯著下降(P0.01),且呈濃度依賴關(guān)系。結(jié)論:Isatin明顯抑制SH-SY5Y細(xì)胞侵襲和遷移,該作用可能和MMP2,MMP9表達(dá)量降低以及下調(diào)磷酸化STAT3有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：2 3-吲哚醌 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤 侵襲 MMPs STAT3
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第1章 實(shí)驗(yàn)材料8-10
• 1.1 細(xì)胞株8
• 1.2 主要試劑耗材8-9
• 1.3 主要儀器9-10
• 第2章 實(shí)驗(yàn)方法10-17
• 2.1 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞系的體外培養(yǎng)10
• 2.2 Transwell測(cè)定細(xì)胞侵襲能力10-11
• 2.2.1 包被基底膜10
• 2.2.2 水化基底膜10
• 2.2.3 接種細(xì)胞10
• 2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)10-11
• 2.2.5 細(xì)胞固定、計(jì)數(shù)11
• 2.3 劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定測(cè)定細(xì)胞遷移能力11
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)11
• 2.3.2 劃痕11
• 2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)11
• 2.3.4 計(jì)算細(xì)胞距離11
• 2.4 實(shí)時(shí)定量(Real-time)PCR檢測(cè)MMP2、MMP9 mRNA相對(duì)表達(dá)量11-13
• 2.4.1 總RNA的提取11-12
• 2.4.2 RNA瓊脂糖電泳檢測(cè)RNA純度和完整性12
• 2.4.3 cDNA的合成12-13
• 2.4.4 Real-time PCR檢測(cè)mRNA相對(duì)表達(dá)13
• 2.5 Western Blotting檢測(cè)MMP2，MMP9，pSTAT3的相對(duì)表達(dá)量13-16
• 2.5.1 試劑配制13-14
• 2.5.2 總蛋白質(zhì)的提取14
• 2.5.3 BCA法測(cè)定總蛋白濃度14
• 2.5.4 制備聚丙烯酰胺凝膠14-15
• 2.5.5 SDS-PAGE電泳15
• 2.5.6 半干法轉(zhuǎn)膜15
• 2.5.7 封閉15
• 2.5.8 孵育抗體15-16
• 2.5.9 顯色16
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法16-17
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-22
• 3.1 Isatin對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞侵襲的影響17
• 3.2 Isatin對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞遷移的影響17-18
• 3.3 Isatin對(duì)MMP2、MMP9 mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響18-19
• 3.4 Isatin對(duì)MMP2、MMP9蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響19-20
• 3.5 Isatin對(duì)STAT3 Tyr705位點(diǎn)磷酸化的影響20-22
• 第4章 討論22-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-32
• 綜述 神經(jīng)母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究進(jìn)展32-53
• 綜述參考文獻(xiàn)44-53
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果53-54
• 致謝54-55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 曾明;崔永華;吳翠環(huán);;生長(zhǎng)抑素受體與P-STAT3在人嗅神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2010年15期

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本文編號(hào)：887764