本文關(guān)鍵詞：MAGE-A3基因沉默對(duì)肝癌化療藥物敏感性的影響及凋亡機(jī)制的初步研究

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【摘要】：【背景與目的】肝細(xì)胞癌(hepatocellsular carcinoma,HCC))是一種惡性程度高、預(yù)后差的常見腫瘤。治療早期肝癌最為有效的方式是手術(shù)切除,但藥物的化療仍是中晚期肝癌患者重要的輔助治療手段。黑色素瘤抗原(melanoma antigen gene,MAGE)在正常組織中僅表達(dá)于睪丸和胎盤中,而在各種腫瘤組織中高表達(dá),與惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、預(yù)后及耐藥相關(guān)。化學(xué)合成MAGE-A3 si RNA小干擾片段,轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株Hep G2及Huh-7,加入化療藥物處理,觀察MAGE-A3沉默后對(duì)人肝癌細(xì)胞株Hep G2、Huh-7化療藥物敏感性的影響,并初步闡明相關(guān)的分子機(jī)制,探討MAGE-A3基因在人肝細(xì)胞癌化療藥物治療過程中所起的作用,為臨床尋找提高肝癌化療藥物敏感性的方法奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā�1.培養(yǎng)表達(dá)MAGE-A3的人肝癌細(xì)胞株HepG2(P53野生型)和Huh-7(P53突變型),化療藥順鉑(Cisplatin,DDP)和阿霉素(Adriamycin,ADM)處理后,實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,采用Q-PCR和Western Blot檢測(cè)加藥前后兩種細(xì)胞中MAGE-A3 m RNA和MAGE-A3蛋白的表達(dá)情況。2.針對(duì)MAGE-A3 m RNA體外化學(xué)合成si RNA,采用RNAi-Mate瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染Hep G2,Huh-7細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分空轉(zhuǎn)組(僅加轉(zhuǎn)染試劑)、陰性對(duì)照組(加不相關(guān)小RNA)和MAGE-A3 si RNA干擾組(干擾組),倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,用Q-PCR和Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞MAGE-A3 m RNA和MAGE-A3蛋白的表達(dá)情況。3.在MAGE-A3基因沉默的肝癌細(xì)胞中加入不同濃度的化療藥,MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況,計(jì)算半數(shù)抑制濃度(inhibitory concentration 50,IC50),比較MAGE-A3 si RNA轉(zhuǎn)染前后肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的變化,觀察其變化是否通過MAGE-A3表達(dá)下調(diào)起作用。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)化療藥物作用前后肝癌細(xì)胞凋亡情況和細(xì)胞周期的改變,了解MAGE-A3基因沉默后肝癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的變化。5.MAGE-A3基因沉默前后,Q-PCR和Western Blot技術(shù)比較化療藥物處理的肝癌細(xì)胞中P53、Bcl-2、Bax、survivin、caspase3和caspase9基因的表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】1.Hep G2、Huh-7細(xì)胞表達(dá)MAGE-A3,加入DDP和ADM處理后,Hep G2、Huh-7細(xì)胞MAGE-A3的表達(dá)隨著藥物劑量的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。2.MAGE-A3 si RNA 664片段轉(zhuǎn)染Hep G2、Huh-7細(xì)胞24h、48h、72h,Q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示MAGE-A3基因的表達(dá)受到顯著抑制,以轉(zhuǎn)染后48h效果最佳,沉默效率達(dá)70%以上。Western Blot檢測(cè)也證實(shí)該片段轉(zhuǎn)染48h后兩株細(xì)胞的MAGEA3蛋白表達(dá)水平顯著下降。3.MTT檢測(cè)結(jié)果顯示:DDP、ADM分別作用于Hep G2、Huh-7細(xì)胞24h、48h、72h后,細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制,顯示劑量依賴性和時(shí)間依賴性。轉(zhuǎn)染MAGE-A3si RNA后,Hep G2細(xì)胞對(duì)DDP、ADM的敏感性分別提高1.57倍、2.15倍,差別有顯著意義(P0.05),而Huh-7細(xì)胞對(duì)DDP、ADM的敏感性分別提高1.22倍、1.21倍,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有差異(P0.05)。4.Annexin V檢測(cè)Hep G2、Huh-7細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示:在不加化療藥物處理的情況下,Hep G2細(xì)胞干擾組細(xì)胞凋亡率顯著增加,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而Huh-7細(xì)胞干擾組與對(duì)照組相比,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無明顯差異(P0.05)。加入DDP、ADM處理后,Hep G2、Huh-7細(xì)胞干擾組的細(xì)胞凋亡率均明顯高于對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示沉默MAGE-A3能夠增強(qiáng)DDP、ADM對(duì)Hep G2、Huh-7細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用,以Hep G2細(xì)胞為顯著。5.碘化丙啶(Prodium Iodide,PI)檢測(cè)Hep G2、Huh-7細(xì)胞周期,結(jié)果顯示:MAGE--A3沉默后,兩株細(xì)胞易阻滯于G2期;加入DDP處理,干擾組與對(duì)照組比較,Hep G2、Huh-7細(xì)胞易阻滯于S期,加入ADM處理,干擾組與對(duì)照組比較,Hep G2、Huh-7細(xì)胞易阻滯于G2期。6.Q-PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)因子,結(jié)果顯示:下調(diào)MAGE-A3后,加入DDP、ADM處理,Hep G2細(xì)胞中P53、Bax、caspase3、caspase9表達(dá)增加,而Bcl-2、survivin表達(dá)下降,提示MAGE-A3沉默增強(qiáng)Hep G2細(xì)胞化療藥物細(xì)胞毒作用的可能機(jī)制是誘導(dǎo)P53依賴的細(xì)胞凋亡通路;而Huh-7細(xì)胞中突變型P53表達(dá)下降同時(shí)伴有Bax表達(dá)增加及survivin表達(dá)下降,但與Bcl-2、caspase3、caspase9的變化無相關(guān)性。提示MAGE-A3沉默影響Huh-7細(xì)胞化療藥物細(xì)胞毒作用可能涉及非P53依賴的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路�！窘Y(jié)論】1.化療藥DDP和ADM可誘導(dǎo)MAGE-A3的表達(dá),沉默MAGE-A3能增強(qiáng)野生型P53和突變型P53肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。2.凋亡涉及MAGE-A3 si RNA促進(jìn)化療藥殺傷肝癌細(xì)胞的過程,可能與P53依賴的細(xì)胞凋亡通路關(guān)系更為密切。
【關(guān)鍵詞】：MAGE-A3 肝癌 RNA干擾 化療 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略名詞對(duì)照表3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-16
• 材料和方法16-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 2 方法19-31
• 結(jié)果31-64
• 1 人肝癌細(xì)胞株形態(tài)學(xué)觀察及 MAGE-A3 在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)31-32
• 2 化療藥物細(xì)胞毒性作用及肝癌細(xì)胞 MAGE-A3 變化32-35
• 3 MAGE-A3 si RNA 轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞35-38
• 4 MTT 檢測(cè) MAGE-A3 沉默前后化療藥對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響38-43
• 5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) MAGE-A3 沉默前后細(xì)胞化療藥對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響改變43-51
• 6 MAGE-A3 沉默前后化療藥對(duì)凋亡相關(guān)基因的影響51-64
• 討論64-70
• 全文小結(jié)70-71
• 參考文獻(xiàn)71-76
• 綜述76-87
• 參考文獻(xiàn)83-87
• 致謝87

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 彭清英,盧平,宋彩云;多彈頭射頻治療肝癌病人的護(hù)理[J];護(hù)理研究;2001年01期

2 ;目前治療肝癌有哪些方法?怎樣選擇?[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2002年11期

3 丁亞香;中晚期肝癌病人疼痛的護(hù)理體會(huì)[J];右江醫(yī)學(xué);2002年05期

4 劉永智,劉慶華;10對(duì)同胞兄妹死于肝癌的報(bào)告[J];河南腫瘤學(xué)雜志;2003年06期

5 趙海艷;1例肝癌病人臨終關(guān)懷的護(hù)理[J];蛇志;2005年01期

6 高建梅;賈國(guó)慶;陳妍;;三維適形放射治療肝癌的研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2006年08期

7 楊桂華;王奉寶;張馨丹;;肝癌病人的護(hù)理[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年11期

8 謝月琛;;68例肝癌病人的臨終關(guān)懷[J];家庭護(hù)士;2008年02期

9 王秀麗;;晚期肝癌病人的護(hù)理[J];家庭護(hù)士;2008年13期

10 嚴(yán)翩;;肝癌最喜歡折騰哪些人?[J];肝博士;2009年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 羅偉玲;陳澤紅;;在肝癌病人中開展健康教育的幾點(diǎn)體會(huì)[A];全國(guó)護(hù)理臨床研究學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文會(huì)編[C];2001年

2 湯釗猷;;提高肝癌療效的探討[A];2008年浙江省外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

3 鄭樹森;;肝癌的診治進(jìn)展[A];2009年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 曾文鋌;謝青山;朱科倫;馬佩球;劉衍民;;射頻毀損治療中晚期肝癌的初步研究(附12例臨床報(bào)告)[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 宋恕平;盛立軍;劉波;;肝癌藥物治療的新探索[A];中國(guó)臨床腫瘤學(xué)教育專輯（2001）——中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)臨床腫瘤學(xué)協(xié)作中心（CSCO）第五屆年會(huì)論文集[C];2001年

6 陸益錢;;肝癌病人的健康教育體會(huì)[A];第一屆全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

7 楊秉輝;;肝癌綜合治療的選擇[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

8 談菊萍;;肝癌病人的心理表現(xiàn)及護(hù)理對(duì)策[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2005年

9 曾帶娣;岳建榮;王翠霞;田月月;;肝癌病人心理變化的護(hù)理對(duì)策[A];全國(guó)傳染病護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 林云萍;;肝癌病人的心理特點(diǎn)及護(hù)理對(duì)策[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報(bào)記者 沙文茹 本期專家 李基業(yè);肝癌術(shù)后如何康復(fù)[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2003年

2 記者 唐先武邋通訊員 黃顯斌;我科學(xué)家在肝癌發(fā)病機(jī)制研究中獲新進(jìn)展[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 副主任醫(yī)師 周德瑞;肝癌病人能生育喂奶嗎[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

4 通訊員 程守勤;五類危險(xiǎn)人群尤需警惕肝癌[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

5 本報(bào)記者 李娜;肝癌高發(fā)真相探源[N];吉林日?qǐng)?bào);2013年

6 黃靜　李媛媛;丙肝發(fā)展成肝癌速度或更快[N];人民政協(xié)報(bào);2013年

7 記者 黃才剛;肝癌宜因人施治[N];健康報(bào);2000年

8 鐘肖協(xié);肝癌“偏愛”哪些人[N];陜西日?qǐng)?bào);2000年

9 黃顯斌邋唐明山;我科學(xué)家在肝癌發(fā)病機(jī)制研究中取得重大進(jìn)展[N];光明日?qǐng)?bào);2007年

10 福星;肝癌如何早發(fā)現(xiàn)[N];民族醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王明海;Musashi-2通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)乙肝病毒相關(guān)性肝癌進(jìn)展的作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 周少來;CXCL5促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及其在肝癌微環(huán)境中的作用和機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 劉艷豐;PROX1通過上調(diào)HIF-1α的表達(dá)及蛋白穩(wěn)定性促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 景瑩;拷貝數(shù)變異基因SERPINA5和SMARCA4在肝癌細(xì)胞中功能及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 趙琪;Ftx IncRNA編碼的miR-545/374a在HBV相關(guān)的肝癌中的變化及其意義[D];山東大學(xué);2015年

6 上官輝;肝癌易感相關(guān)基因及組織基因表達(dá)譜生物信息學(xué)分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 袁星;釫酮類天然產(chǎn)物異巴西紅厚殼素的抗肝癌活性及其作用機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 盧杉;長(zhǎng)鏈非編碼RNA:HOXD-AS1在肝癌中的功能和機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 冀彤;IL6、TNFα和TNFR1在卵圓細(xì)胞增殖和炎癥誘發(fā)肝癌中作用和機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2015年

10 趙昌林;CD4~+CXCR5~+CD57~+T細(xì)胞在肝癌發(fā)病中的作用及解毒抗癌方干預(yù)的研究[D];暨南大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳曼;Ki67、VEGF、P53在移植后肝癌復(fù)發(fā)中的預(yù)測(cè)價(jià)值及化療對(duì)移植后復(fù)發(fā)肝癌患者的預(yù)后影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 楊帥;ZNF545在肝癌中的表觀遺傳學(xué)改變及功能的研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

3 齊冰;肝癌患者肝臟中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶活性變化[D];鄭州大學(xué);2015年

4 楊文;RNF2抑制肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為及其與MANF相互作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王顯騰;A20抑制TNF-α誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的遷移[D];山東大學(xué);2015年

6 盧樂樂;NG2在肝癌中的表達(dá)以及與患者預(yù)后相關(guān)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 楊西勝;MiR-200a/ZEB2調(diào)控肝癌干性樣細(xì)胞惡性表型轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 禹鴻鳴;醛縮酶B在索拉非尼治療肝癌的耐藥作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 張春忙;肝螺桿菌對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響及分子機(jī)制的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 杜敏;微脈管浸潤(rùn)對(duì)小肝癌病人預(yù)后的影響及MicroRNA對(duì)微脈管浸潤(rùn)的預(yù)測(cè)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

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