本文關(guān)鍵詞：改良型人NK細(xì)胞體外擴增技術(shù)建立及CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù)初步研究

  更多相關(guān)文章： NK細(xì)胞 體外擴增 pAPCNK CAR-NK HER2-CAR-T 癌癥免疫治療

【摘要】：NK細(xì)胞過繼療法是腫瘤免疫療法的一種具有前景的治療策略,然而,大量擴增具有功能的NK細(xì)胞方法的缺乏限制了它的發(fā)展。由于IL21分子是NK細(xì)胞功能的重要調(diào)節(jié)分子,因此本文的主要目的之一是建立一種改良型的基于IL21分子的NK細(xì)胞體外擴增技術(shù)。在本文中,我們在穩(wěn)定表達(dá)IL15和CD137L分子的p APC細(xì)胞上再進(jìn)一步表達(dá)IL21分子,然后用構(gòu)建的該工程細(xì)胞株(命名為p APCNK)來擴增NK細(xì)胞。具體方法為:分離4名健康人外周血單個核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用工程細(xì)胞p APCNK并補充細(xì)胞因子IL2對NK細(xì)胞進(jìn)行體外擴增,應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)法和流式細(xì)胞術(shù)分別比較NK細(xì)胞的擴增倍數(shù)和NK細(xì)胞純度,并采用CFSE/7-AAD法對腫瘤細(xì)胞K562和RPMI-8226進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗檢測殺傷效率。經(jīng)過三周的刺激培養(yǎng),NK細(xì)胞平均擴增至409.4倍,細(xì)胞純度由最初的低于20%提高到90%以上。殺傷實驗結(jié)果顯示,擴增的NK細(xì)胞對K562細(xì)胞殺傷率高達(dá)85.2%。但由于NK細(xì)胞非抗原特異性的殺傷特征,會限制其臨床上的治療效果。近年來過繼性細(xì)胞治療技術(shù)中,嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor,CAR)修飾的T細(xì)胞技術(shù)異軍突起,在體外和臨床試驗中表現(xiàn)出良好的靶向性、殺傷性和持久性,展示了巨大的應(yīng)用潛力和發(fā)展前景。因此本研究在NK細(xì)胞擴增技術(shù)體系建立的基礎(chǔ)上,嘗試開發(fā)CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù),從而提高NK細(xì)胞活性并且讓NK細(xì)胞具備腫瘤抗原特異性殺傷能力。本研究選用HER2作為靶點來探索開發(fā)CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù)的可能性,并積累了初步的實驗數(shù)據(jù),為進(jìn)一步建立完善的CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù)提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：NK細(xì)胞 體外擴增 pAPCNK CAR-NK HER2-CAR-T 癌癥免疫治療
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.51
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-13
• 材料和方法13-22
• 2.1 實驗材料13-14
• 2.1.1 標(biāo)本及細(xì)胞系13
• 2.1.2 主要試劑與材料13
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備13-14
• 2.1.4 主要抗體14
• 2.2 實驗方法14-22
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)14
• 2.2.2 建立pAPC~(NK)細(xì)胞系14-18
• 2.2.2.1 mbIL21質(zhì)粒構(gòu)建14-18
• 2.2.2.2 慢病毒包裝18
• 2.2.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染pAPC細(xì)胞18
• 2.2.3 慢病毒濃縮18-19
• 2.2.4 慢病毒滴度測定19
• 2.2.5 分離并制備淋巴細(xì)胞單細(xì)胞懸液19-20
• 2.2.6 NK細(xì)胞體外激活20
• 2.2.7 表型分析(流式分析)20
• 2.2.8 慢病毒感染T/NK細(xì)胞20-21
• 2.2.9 細(xì)胞殺傷試驗21
• 2.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析21-22
• 結(jié)果22-34
• 3.1 IL21/p CDH-CMV-MCS-EF1-Cop GFP分子構(gòu)建22-24
• 3.2 IL21/p CDH-CMV-MCS-EF1-Cop GFP慢病毒包裝24
• 3.3 IL21/p CDH-CMV-MCS-EF1-Cop GFP慢病毒感染pAPC細(xì)胞24-25
• 3.4 不同濃度IL2對NK細(xì)胞擴增表型的影響25-26
• 3.5 不同濃度IL2對NK細(xì)胞擴增倍數(shù)的影響26
• 3.6 不同樣本NK細(xì)胞體外擴增效率26-27
• 3.7 NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果27-28
• 3.8 CAR-T/CAR-NK技術(shù)建立28-34
• 3.8.1 HER2-CAR-pCDH重組質(zhì)粒的構(gòu)建28-30
• 3.8.2 HER2-CAR慢病毒的包裝和測定30-31
• 3.8.3 HER2-CAR-T技術(shù)體系的建立31-33
• 3.8.4 HER2-CAR-NK技術(shù)體系的建立33-34
• 討論34-37
• 參考文獻(xiàn)37-43
• 綜述43-57
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 碩士期間科研成果57-58
• 致謝58-60

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李亞芬;改良型人NK細(xì)胞體外擴增技術(shù)建立及CAR-NK細(xì)胞治療技術(shù)初步研究[D];蘇州大學(xué);2015年

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本文編號：883006