發(fā)布時(shí)間：2017-09-18 12:09

  本文關(guān)鍵詞：胃癌干細(xì)胞標(biāo)記物的探索及三氧化二砷對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌干細(xì)胞 CD14 免疫熒光 三氧化二砷

【摘要】：胃癌是世界上最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,目前手術(shù)治療是胃癌的主要治療方式,但是切除后,仍有部分病人的腫瘤會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。研究認(rèn)為導(dǎo)致腫瘤再次發(fā)生的是腫瘤干細(xì)胞。而表面特異性標(biāo)記物可以鑒定腫瘤干細(xì)胞,并通過(guò)研究其生物學(xué)和病理學(xué)特性確定它們?cè)谀[瘤發(fā)生發(fā)展和預(yù)后中的作用。本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)干細(xì)胞標(biāo)記物在胃癌細(xì)胞中表達(dá)的篩查,然后采用間接熒光抗體雙重染色法檢測(cè)胃癌組織中CD133和CD14的蛋白表達(dá),鑒定胃癌干細(xì)胞并分析其與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。從人胃癌新鮮組織塊內(nèi),獲得穩(wěn)定生長(zhǎng)的胃癌原代細(xì)胞后,通過(guò)Q-PCR方法,檢測(cè)CD133和CD14基因的表達(dá)情況。同時(shí)將三氧化二砷作用于胃癌細(xì)胞系NCI-N87,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察,并通過(guò)MTT法和TUNEL法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)證明,CD14在胃癌細(xì)胞中呈陽(yáng)性反應(yīng)。CD133+/CD14+可做為胃癌鑒定的標(biāo)記物,也可作為早期診斷和預(yù)后判斷的重要參考指標(biāo),實(shí)驗(yàn)也揭示,CD133和CD14的基因在胃癌組織內(nèi)的表達(dá)量均高于癌旁組織。通過(guò)三氧化二砷誘導(dǎo)其細(xì)胞凋亡,對(duì)胃癌細(xì)胞系NCI-N87的細(xì)胞增殖產(chǎn)生明顯的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為胃癌干細(xì)胞增加了新的標(biāo)記物,為胃癌的治療和預(yù)后提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù),也對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：胃癌干細(xì)胞 CD14 免疫熒光 三氧化二砷
【學(xué)位授予單位】：牡丹江師范學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-10
• 前言10-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 干細(xì)胞概念及分類12
• 1.1.1 概念12
• 1.1.2 干細(xì)胞的分類12
• 1.2 腫瘤干細(xì)胞理論的提出以及來(lái)源假說(shuō)12-13
• 1.3 干細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系與區(qū)別13-14
• 1.3.1 干細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系13
• 1.3.2 腫瘤干細(xì)胞與干細(xì)胞的區(qū)別13-14
• 1.4 腫瘤干細(xì)胞的主要調(diào)控通路14-15
• 1.4.1 Wnt通路14
• 1.4.2 Notch通路14
• 1.4.3 Shh通路14-15
• 1.5 胃癌干細(xì)胞15-17
• 1.5.1 胃癌干細(xì)胞的生物學(xué)特性15
• 1.5.2 胃癌干細(xì)胞的來(lái)源15-16
• 1.5.3 胃癌干細(xì)胞的微環(huán)境16
• 1.5.4 胃癌干細(xì)胞的分離和鑒定16-17
• 1.5.5 胃癌干細(xì)胞的表面標(biāo)記物17
• 1.6 干細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞的相關(guān)標(biāo)記物17-19
• 1.6.1 ALDH117
• 1.6.2 CD3417-18
• 1.6.3 CD10518
• 1.6.4 Oct418
• 1.6.5 CD1418-19
• 1.7 消化道腫瘤的特異性標(biāo)記物CD13319-20
• 1.8 三氧化二砷的特點(diǎn)以及它對(duì)惡性腫瘤的作用20-21
• 1.8.1 三氧化二砷的特點(diǎn)20
• 1.8.2 三氧化二砷的抗腫瘤機(jī)制20-21
• 1.9 結(jié)語(yǔ)21-22
• 第2章 胃癌標(biāo)記物的實(shí)驗(yàn)研究22-26
• 2.1 材料、儀器和試劑22-24
• 2.1.1 標(biāo)本來(lái)源22
• 2.1.2 主要儀器22-23
• 2.1.3 主要試劑23
• 2.1.4 主要溶液配制方法23-24
• 2.2 方法24-25
• 2.2.1 免疫熒光鑒定24
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定24-25
• 2.3 結(jié)果25
• 2.4 小結(jié)25-26
• 第3章 胃癌組織中CD133~+/CD14~+的表達(dá)及其臨床意義26-37
• 3.1 材料、儀器和試劑26-28
• 3.1.1 標(biāo)本來(lái)源26
• 3.1.2 主要儀器26-27
• 3.1.3 主要試劑27
• 3.1.4 主要溶液配制方法27-28
• 3.2 方法28-29
• 3.2.1 間接熒光抗體技術(shù)28-29
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定29
• 3.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29
• 3.3 結(jié)果29-36
• 3.3.1 病例特點(diǎn)29-30
• 3.3.2 CD133和CD14蛋白的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系30-33
• 3.3.3 CD133~+/CD14~+蛋白的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系33-35
• 3.3.4 人胃癌中CD14和CD133表達(dá)的相互關(guān)系35-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 第4章 原代胃癌細(xì)胞內(nèi)CD14與CD133基因的表達(dá)情況37-46
• 4.1 材料、儀器和試劑37-39
• 4.1.1 標(biāo)本來(lái)源37
• 4.1.2 主要儀器37-38
• 4.1.3 主要試劑與耗材38
• 4.1.4 主要溶液配制方法38-39
• 4.2 方法39-42
• 4.2.1 胃癌細(xì)胞的分離和培養(yǎng)39
• 4.2.2 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察39-40
• 4.2.3 RNA的提取40
• 4.2.4 逆轉(zhuǎn)錄cDNA40-41
• 4.2.5 引物設(shè)計(jì)41
• 4.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)41-42
• 4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法42
• 4.3 結(jié)果42-45
• 4.3.1 原代細(xì)胞培養(yǎng)觀察42-43
• 4.3.2 RNA濃度檢測(cè)結(jié)果43-44
• 4.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果44-45
• 4.4 小結(jié)45-46
• 第5章 三氧化二砷對(duì)胃癌細(xì)胞增殖影響的檢測(cè)46-53
• 5.1 材料、儀器和試劑46-47
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料46
• 5.1.2 主要儀器46
• 5.1.3 主要試劑與耗材46-47
• 5.1.4 主要溶液配制方法47
• 5.2 方法47-49
• 5.2.1 不同濃度的As_2O_3抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的觀察47-48
• 5.2.2 MTT法進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)48
• 5.2.3 TUNEL法進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)48-49
• 5.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法49
• 5.3 結(jié)果49-52
• 5.3.1 As_2O_3對(duì)NCI-N87細(xì)胞生長(zhǎng)的影響49-51
• 5.3.2 As_2O_3對(duì)NCI-N87細(xì)胞增殖的影響51
• 5.3.3 As_2O_3對(duì)NCI-N87細(xì)胞凋亡的影響51-52
• 5.4 小結(jié)52-53
• 第6章 討論53-57
• 6.1 關(guān)于胃癌細(xì)胞與干細(xì)胞標(biāo)記物的關(guān)系53
• 6.2 關(guān)于聯(lián)合檢測(cè)CD14和CD133在人胃癌干細(xì)胞中的表達(dá)53-55
• 6.3 關(guān)于CD14和CD133的陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系55-56
• 6.4 關(guān)于三氧化二砷對(duì)胃癌細(xì)胞系NCI-N87生長(zhǎng)抑制的作用56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-67
• 致謝67-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文68

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本文編號(hào)：875443