本文關(guān)鍵詞：CHL1對(duì)乳腺癌增殖及侵襲能力的作用研究

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【摘要】：目的:檢測(cè)乳腺癌組織及乳腺癌細(xì)胞系中CHL1基因的表達(dá)情況,觀察改變CHL1基因表達(dá)水平對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖及侵襲能力的作用。方法:選取2012年山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院的接受手術(shù)治療的30例原發(fā)性乳腺癌患者,所選患者均未接受過(guò)化療和放療。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Real-time PCR)檢測(cè)乳腺癌組織及乳腺癌細(xì)胞系CHL1 m RNA表達(dá)水平;Western blotting法檢測(cè)CHL1蛋白表達(dá)水平。以正常人乳腺上皮細(xì)胞系MCF10A反轉(zhuǎn)錄c DNA為模板,PCR擴(kuò)增CHL1基因c DNA全長(zhǎng),構(gòu)建CHL1基因重組質(zhì)粒pc DNA3.1-CHL1。Lipofectamin TM 2000轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-CHL1,在MDA-MB-231細(xì)胞中過(guò)表達(dá)CHL1;Lipofectamin TM 2000轉(zhuǎn)染CHL1-si RNA-1及CHL1-si RNA-2,在MCF-7細(xì)胞敲降CHL1表達(dá)。MTT法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)或敲降CHL1表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響;Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)或敲降CHL1表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。構(gòu)建靶向CHL1的sh RNA慢病毒重組質(zhì)粒,sh RNA-CHL1慢病毒感染MCF-7細(xì)胞株,穩(wěn)定敲降CHL1表達(dá),免疫缺陷小鼠皮下接種,觀察CHL1降表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞免疫缺陷小鼠皮下移植瘤增殖能力的影響。結(jié)果:1.與癌旁正常組織相比,乳腺癌組織中CHL1 m RNA及蛋白水平降低,CHL1表達(dá)水平與乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)負(fù)相關(guān)。2.與正常乳腺上皮細(xì)胞MCF10A相比,乳腺癌細(xì)胞MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-435,T47D細(xì)胞中CHL1 m RNA及蛋白水平降低,其中MDA-MB-231表達(dá)最低,MCF-7表達(dá)相對(duì)較高。3.與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)CHL1明顯抑制MDA-MB-231細(xì)胞的增殖及克隆形成能力,敲降CHL1表達(dá),MCF-7細(xì)胞增殖及克隆形成能力明顯提高。4.與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)CHL1明顯抑制MDA-MB-231侵襲能力;敲降CHL1表達(dá),MCF-7細(xì)胞侵襲能力明顯增強(qiáng)(P0.05)。5.與對(duì)照組相比,穩(wěn)定敲降CHL1表達(dá)可明顯抑制MCF-7免疫缺陷小鼠皮下移植瘤的增殖(P0.05)。結(jié)論:乳腺癌組織及細(xì)胞中CHL1的表達(dá)水平普遍降低,與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)成負(fù)相關(guān),CHL1在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：CHL1 乳腺癌 增殖 侵襲
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、對(duì)象與方法14-33
• 1.1 材料與儀器14-15
• 1.1.1 細(xì)胞系14
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 1.1.3 主要儀器15
• 1.2 試劑配制15-16
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法16-33
• 1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-18
• 1.3.2 組織標(biāo)本采集18-19
• 1.3.3 Real-time PCR檢測(cè)乳腺癌組織及細(xì)胞中CHL1 mRNA表達(dá)19-21
• 1.3.4 Western blot檢測(cè)乳腺癌組織及細(xì)胞中CHL1蛋白表達(dá)21-25
• 1.3.5 脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染質(zhì)粒25-28
• 1.3.6 慢病毒法構(gòu)建穩(wěn)定敲降CHL1乳腺癌細(xì)胞株28-29
• 1.3.7 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力29-30
• 1.3.8 軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力30-31
• 1.3.9 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力31
• 1.3.10 免疫缺陷小鼠皮下移植瘤增殖實(shí)驗(yàn)31-32
• 1.3.11 統(tǒng)計(jì)方法32-33
• 二、結(jié)果33-40
• 2.1 CHL1基因在乳腺癌組織及細(xì)胞株中低表達(dá)33-34
• 2.2 過(guò)表達(dá)CHL1對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖及侵襲能力的影響34-36
• 2.3 敲降CHL1對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖及侵襲能力的影響36-37
• 2.4 CHL1降表達(dá)對(duì)MCF-7 免疫缺陷小鼠皮下移植瘤增殖能力的影響37-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明49-50
• 綜述 CHL1基因研究進(jìn)展50-58
• 綜述參考文獻(xiàn)54-58
• 致謝58

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：871487