本文關(guān)鍵詞：E-cadherin介導(dǎo)的麥冬皂苷B調(diào)控非小細(xì)胞肺癌Hippo通路的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： OP-B YAP Hippo E-cadherin β-catenin

【摘要】：[研究背景與目的]隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的逐步深入,靶向調(diào)控在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用的信號(hào)通路已在惡性腫瘤的治療中占據(jù)重要地位。Hippo信號(hào)通路是近年來研究發(fā)現(xiàn)的能夠協(xié)調(diào)細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和細(xì)胞死亡,調(diào)控細(xì)胞、組織生長的一個(gè)高度保守的生長控制信號(hào)通路。YAP和TAZ是其關(guān)鍵下游效應(yīng)分子,非磷酸化狀態(tài)的YAP可以轉(zhuǎn)移入核,與TEAD/TEF家族和其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用來調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡的作用,最終影響器官的大小以及腫瘤的形成。大量研究證實(shí),Hippo通路在腫瘤進(jìn)程中扮演了重要角色。“周氏克金巖方”(來自國醫(yī)大師周仲瑛教授)為臨床抗肺癌的有效驗(yàn)方。課題組前期對(duì)該方已經(jīng)展開了系列的研究,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,該方能顯著抑制裸鼠移植瘤生長。并且通過藥化分離及高通量平臺(tái)篩選,從該方中獲取到了一批細(xì)胞毒性成分。分析發(fā)現(xiàn),麥冬皂苷類化合物具有顯著地抗腫瘤效應(yīng)。針對(duì)抗癌效果較好的麥冬皂苷B(Ophiopogonin B, OP-B)做進(jìn)一步研究,分析發(fā)現(xiàn)其對(duì)Hippo通路的交叉網(wǎng)絡(luò)有顯著調(diào)節(jié)作用。因此,本研究試圖發(fā)現(xiàn)和闡明OP-B在調(diào)控Hippo通路及其系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)的作用,為其臨床腫瘤治療提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容]本文以發(fā)病率及死亡率居首位的非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell lung cancer, NSCLC)為病理模型,剖析OP-B對(duì)Hippo通路的調(diào)控作用。第一部分以YAP為指標(biāo)考察OP-B對(duì)Hippo通路是否有調(diào)節(jié)作用。第二部分對(duì)可能與OP-B作用相關(guān)的Hippo通路的交叉網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析,最終選擇E-cadherin及其相關(guān)連接蛋白進(jìn)行研究,利用Westernblot、細(xì)胞免疫熒光技術(shù)、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)及siRNA干擾等技術(shù)探究其在OP-B調(diào)節(jié)YAP、發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)中的關(guān)系。第三部分則通過siRNA干擾實(shí)驗(yàn)和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)最終驗(yàn)證了Hippo通路在OP-B發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)中的重要地位。[研究結(jié)果]第一部分我們利用Westernblot檢測藥物對(duì)YAP和p-YAP(Ser127)蛋白表達(dá)的作用,發(fā)現(xiàn)OP-B能劑量依賴性地促進(jìn)YAP的Serl27磷酸化蛋白的生成。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)OP-B能降低YAP入核細(xì)胞百分比。說明OP-B能抑制YAP的活化,促進(jìn)YAP的Serl27磷酸化,限制YAP的入核。第二部分為了研究E-cadherin是否參與OP-B的抗腫瘤作用的發(fā)揮,我們分別通過誘導(dǎo)E-cadherin的表達(dá)和抑制E-cadherin的功能后檢測OP-B對(duì)細(xì)胞活力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)E-cadherin的合成,OP-B對(duì)NCI-H460細(xì)胞增殖能力的抑制作用增強(qiáng),而抑制E-cadherin的功能明顯削弱了OP-B對(duì)NCI-H460細(xì)胞增殖能力的抑制作用。說明E-cadherin參與OP-B的抑制細(xì)胞增殖作用。而且發(fā)現(xiàn)OP-B能劑量依賴性地促進(jìn)E-cadherin的表達(dá),抑制β-catenin的表達(dá),但是對(duì)α-catenin蛋白表達(dá)水平無明顯作用。進(jìn)一步通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)、β-catenin siRNA干擾實(shí)驗(yàn)等發(fā)現(xiàn),OP-B劑量依賴性地促進(jìn)β-catenin與E-cadherin的結(jié)合；干擾β-catenin蛋白的表達(dá)后,YAP的Serl27磷酸化水平明顯降低,YAP核內(nèi)大量聚積,且阻斷了OP-B的促進(jìn)YAP磷酸化的作用。第三部分通過LATS1 siRNA干擾實(shí)驗(yàn)和構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)YAP細(xì)胞株檢測OP-B對(duì)YAP及NCI-H460細(xì)胞活力的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與干擾β-catenin的表達(dá)效應(yīng)類似,干擾LATS1蛋白的表達(dá)后,阻斷了OP-B的促進(jìn)YAP磷酸化的作用,且過表達(dá)YAP削弱了OP-B的抑制細(xì)胞增殖作用。進(jìn)一步驗(yàn)證了Hippo通路在OP-B發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)中的重要作用。。[結(jié)論與意義]本研究結(jié)果表明,OP-B通過促進(jìn)β-catenin與E-cadherin的結(jié)合,傳遞調(diào)控Hippo通路的信號(hào),抑制YAP的活化,使其滯留在細(xì)胞質(zhì)中,限制其核內(nèi)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,從而發(fā)揮抑制細(xì)胞生長、抗腫瘤作用。研究中我們探討了E-cadherin與Hippo通路之間的聯(lián)系,從某種意義上,對(duì)于尋找新的抗腫瘤治療靶點(diǎn)有積極意義。另外,本研究為后續(xù)進(jìn)一步闡明OP-B的抑癌分子機(jī)制指明了方向,為其臨床腫瘤治療提供了強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：OP-B YAP Hippo E-cadherin β-catenin
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-16
• 第一部分 麥冬皂苷B對(duì)NCI-H460細(xì)胞中Hippo通路的調(diào)控作用16-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 1.3 統(tǒng)計(jì)處理21
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-23
• 1.5 小結(jié)與討論23-24
• 第二部分 OP-B調(diào)控YAP的具體分子機(jī)制研究24-34
• 第一節(jié) E-cadherin參與OP-B抑制NCI-H460細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)作用24-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法25
• 1.3 統(tǒng)計(jì)處理25-26
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 1.5 小結(jié)與討論27-28
• 第二節(jié) OP-B對(duì)YAP的調(diào)節(jié)作用依賴于β-catenin與E-cadherin的結(jié)合28-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-33
• 2.4 小結(jié)與討論33-34
• 第三部分 OP-B的抑增殖作用依賴于Hippo通路34-39
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料34
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 1.3 統(tǒng)計(jì)處理35
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-38
• 1.5 小結(jié)與討論38-39
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)論與討論39-41
• 文獻(xiàn)綜述41-45
• 參考文獻(xiàn)45-56
• 附錄56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果57-58
• 致謝58

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1 ;Hippo signaling:A hub of growth control,tumor suppression and pluripotency maintenance[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年10期

2 許傳銘;萬福生;;哺乳動(dòng)物Hippo信號(hào)通路:腫瘤治療的新標(biāo)靶[J];遺傳;2012年03期

3 李敏睿;張盛洪;鐘碧慧;;Hippo信號(hào)通路在惡性腫瘤及干細(xì)胞中的作用[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2013年04期

4 朱忠勝;張春林;;腫瘤中Hippo-TAZ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2013年03期

5 史夢(mèng)婕;邵松軍;李潔媚;周艷芳;黃培春;;Hippo通路與腫瘤相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

6 李桂蘭;張麗;閆華超;;Hippo信號(hào)通路與腫瘤發(fā)生相關(guān)性研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年09期

7 鮑乾坤;何金龍;朱毅;;Hippo-YAP通路在心血管系統(tǒng)中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年03期

8 Jiliang Zhou;;An emerging role for Hippo-YAP signaling in cardiovascular development[J];The Journal of Biomedical Research;2014年04期

9 Masato Enomoto;Tatsushi Igaki;;Deciphering tumor-suppressor signaling in flies:Genetic link between Scribble/Dlg/Lgl and the Hippo pathways[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年10期

10 張靖;朱金水;;Hippo-YAP信號(hào)通路與胃癌相關(guān)性研究[J];國際消化病雜志;2011年04期

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1 Zhan Yang;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十一次會(huì)員代表大會(huì)暨2014年全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——專題報(bào)告五[C];2014年

2 Hongtan Wu;Luyao Wei;Suyuan Ji;Fuqin Fan;Funiu Qin;Lanfen Chen;Dawang Zhou;;MST1/2-Yap signaling pathway in organ size control and cancer development[A];生命的分子機(jī)器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2012年

3 Zhan Yang;Bin Zheng;Yu Zhang;Xin-hua Zhang;Ming He;Dong Ma;Jin-kun Wen;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

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1 記者 胡德榮;我學(xué)者發(fā)現(xiàn)原癌蛋白質(zhì)YAP抑制劑[N];健康報(bào);2014年

2 記者 徐瑞哲;人造“克星”抑制胃癌[N];解放日?qǐng)?bào);2014年

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1 安健;Nedd4-like E3泛素連接酶調(diào)控Angiomotin/p130蛋白穩(wěn)定性的分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

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3 劉鵬;HBV preS2 通過miR-338-3p 調(diào)控Hippo通路效應(yīng)分子TAZ促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌作用研究[D];山東大學(xué);2015年

4 朱國華;上調(diào)miR-130b通過滅活Hippo信號(hào)通路來增強(qiáng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的表型[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓笑;Hippo信號(hào)通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 郭鵬達(dá);RARγ的缺失通過調(diào)控Hippo-Yap信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[D];蘇州大學(xué);2016年

7 周菁;YAP在哮喘發(fā)生過程中的表達(dá)情況及其功能探討[D];南昌大學(xué);2016年

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1 陸亞紅;家蠶BmYki不同剪接體的功能研究[D];蘇州大學(xué);2016年

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5 梁坤;Hippo信號(hào)通路在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[D];青島大學(xué);2014年

6 魏文超;Hippo信號(hào)通路在胃粘膜癌變過程中的作用[D];青島大學(xué);2013年

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8 錢瑩;家蠶Hippo信號(hào)通路主要基因的研究[D];蘇州大學(xué);2014年

9 沈龍霞;HCMV經(jīng)Hippo-YAP信號(hào)通路對(duì)絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞功能影響的體外研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

10 陳柯宏;LATS1基因去甲基化對(duì)人腎癌細(xì)胞生物學(xué)功能及其Hippo-YAP信號(hào)通路的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：859593