本文關(guān)鍵詞：MiRNA-1對食管鱗癌細(xì)胞KYSE510增殖、侵襲的影響及相關(guān)機(jī)制的研究

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【摘要】：食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤之一。根據(jù)世界癌癥發(fā)病與死亡報告,全球2008年食管癌發(fā)病大約為48.16萬例,全球死亡大約為40.65萬例[1]。食管癌的流行病學(xué)特征表現(xiàn)為:不同地區(qū)、國家、種族、性別的食管癌發(fā)病率和死亡率有明顯差異。全球以亞、非、拉一些國家和地區(qū)發(fā)病較高,歐美和大洋洲發(fā)病偏低,我國更是食管癌的高發(fā)區(qū),且死亡率高,區(qū)域之間發(fā)病率與死亡率差異顯著[2]。消化道腫瘤患者之中存在著異mi RNA表達(dá)[3],Konishi[4]等利用RT-PCR技術(shù)對106例食管癌及54名志愿者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)食管癌患者血清中mi RNA-18a的表達(dá)量明顯高于正常人,大約為正常人的16倍,食管癌組織mi RNA-18a的表達(dá)量明顯高于周圍正常組織,食管癌術(shù)后患者血清中mi RNA-18a的表達(dá)量明顯低于術(shù)前患者表達(dá)水平。目前多數(shù)文獻(xiàn)報告局限于mi RNA在ESCC中的表達(dá),其作用機(jī)制并未明確闡述。本課題研究了mi RNA-1對食管鱗癌細(xì)胞體外增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,并探討了其可能的相關(guān)機(jī)制。mi RNA是一類內(nèi)生性的由長度大約20-22個核苷酸組成的非編碼的小分子RNA[5]。mi RNA在細(xì)胞代謝、化生、增殖和凋亡過程中發(fā)揮了不容忽視的生物作用。多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與mi RNA有著極其密切的關(guān)系,mi RNA對于腫瘤的早期臨床診斷及提供新的臨床治療策略具備極其重要的新的潛在用途[13]。目的:通過過表達(dá)/沉默mi RNA-1,檢測mi RNA-1在食管鱗癌細(xì)胞KYSE 510增殖、遷移和侵襲速度。并檢測其相關(guān)的靶基因LASP1與TAGLN2蛋白水平變化,以探討mi RNA-1對食管鱗癌可能的作用機(jī)制。方法:1設(shè)置實(shí)驗(yàn)組與對照組,KYSE510細(xì)胞中過表達(dá)mi RNA-1的mimics-mi R-1組(轉(zhuǎn)染含mi R-1模擬物的mimics試劑)為實(shí)驗(yàn)組,對照組為mimics-mi R-1 control組(轉(zhuǎn)染不含mi R-1模擬物的mimics模擬試劑,此模擬試劑其他成分與mimics一致);KYSE510細(xì)胞中沉默mi RNA-1表達(dá)的inhibitor-mi R-1組(轉(zhuǎn)染含mi R-1抑制物的inhibitor試劑)為實(shí)驗(yàn)組,對照組為inhibitor-mi R-1 control組(轉(zhuǎn)染不含mi R-1抑制物的inhibitor模擬試劑)。2應(yīng)用MTT細(xì)胞增殖試驗(yàn)觀察mi R-1在KYSE 510細(xì)胞中過表達(dá)/沉默對細(xì)胞增殖的影響。3應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察mi R-1在KYSE 510細(xì)胞過表達(dá)/沉默后對細(xì)胞遷移及侵襲的影響。4應(yīng)用Western blot方法檢測LASP1及TAGLN2蛋白表達(dá)變化,探討mi RNA對食管癌細(xì)胞株KYSE 510的分子作用機(jī)制。結(jié)果:1 MTT細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果1.1實(shí)驗(yàn)組與對照組差異實(shí)驗(yàn)組(mimics-mi R-1組)24h、48h、72h OD值分別為0.894±0.023、1.050±0.013、1.232±0.017低于對照組(mimics-mi R-1 control組)的0.963±0.022、1.163±0.030、1.377±0.024;實(shí)驗(yàn)組(inhibitor-mi R-1組)24h、48h、72h OD值分別為1.114±0.036、1.390±0.062、1.558±0.030高于對照組(inhibitor-mi R-1 control組)的0.968±0.067、1.209±0.027、1.410±0.023,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明mi R-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510過表達(dá)抑制KYSE510增值,mi R-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510表達(dá)沉默促進(jìn)KYSE510增值。2 Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果:2.1遷移實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組(mimics-mi R-1組)Transwell小室遷徙實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為112±24低于對照組(mimics-mi R-1 control組)的230±32;實(shí)驗(yàn)組(inhibitor-mi R-1組)Transwell小室遷徙實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為181±29高于對照組(inhibitor-mi R-1 control組)的130±25,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.2侵襲實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組(mimics-mi R-1組)Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為125±31低于對照組(mimics-mi R-1 control組)的204±42,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);實(shí)驗(yàn)組(inhibitor-mi R-1組)Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為235±36,高于對照組(inhibitor-mi R-1 control組)的116±25,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明mi R-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510過表達(dá)時KYSE510遷移侵襲能力下降,mi R-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510表達(dá)沉默時KYSE510遷移侵襲能力增強(qiáng)。3 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 LASP1蛋白表達(dá)水平變化實(shí)驗(yàn)組(mimics-mi R-1組)LASP1蛋白表達(dá)量為0.498±0.020,低于對照組(mimics-mi R-1 control組)表達(dá)量0.642±0.070;實(shí)驗(yàn)組(inhibitor-mi R-1組)LASP1蛋白表達(dá)量為0.626±0.050,高于對照組(inhibitor-mi R-1 control組)表達(dá)量0.526±0.030,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.2 TAGLN2蛋白表達(dá)水平變化實(shí)驗(yàn)組(mimics-mi R-1組)TAGLN2蛋白表達(dá)量為0.370±0.020,低于對照組(mimics-mi R-1 control組)表達(dá)量0.426±0.030;實(shí)驗(yàn)組(inhibitor-mi R-1組)TAGLN2蛋白表達(dá)量為0.541±0.050,高于對照組(inhibitor-mi R-1 control組)表達(dá)量0.421±0.051,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明mi R-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510過表達(dá)時LASP1、TAGLN2蛋白表達(dá)量降低,mi R-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510表達(dá)沉默時LASP1、TAGLN2蛋白表達(dá)量升高。結(jié)論:1 mi R-1在食管癌細(xì)胞中過表達(dá)時食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)(KYSE510)增殖及遷移侵襲能力降低;mi R-1在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)沉默時食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞(KYSE510)增殖及遷移侵襲能力提高。2 mi R-1可能通過調(diào)節(jié)靶基因LASP1、TAGLN2的表達(dá)水平而完成其分子調(diào)節(jié)機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：MiRNA-1 食管癌 LASP1 TAGLN2 KYSE510
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-24
• 附圖24-27
• 附表27-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述 MiRNA與食管癌35-42
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 致謝42-43
• 個人簡歷43

【參考文獻(xiàn)】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：854773