本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-320d通過調(diào)控靶基因CDK6抑制彌漫大B細胞淋巴瘤細胞增殖

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【摘要】：目的:本文主要探討Hsa-mi R-320d(人微小非編碼RNA-320d)對彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)細胞增殖的影響及分子機制。方法:1.構(gòu)建mi R-320d過表達和抑制的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染DLBCL細胞株OCI-LY1,CCK-8法檢測細胞增殖率。2.利用生物信息學(xué)軟件Target Scan、mi Randa、mi RDB篩選預(yù)測可能與mi R-320d特異性結(jié)合的靶基因并合成其特異干擾序列。3.提取OCI-LY1細胞、mi R-320d過表達細胞總RNA,應(yīng)用熒光實時定量PCR技術(shù)檢測CDK6基因m RNA表達水平;提取OCI-LY1細胞、mi R-320d過表達及對照組細胞總蛋白,用Western blotting技術(shù)檢測CDK6蛋白表達水平。4.DLBCL細胞中,分別轉(zhuǎn)染3'UTR-NC+mi RNA-NC,3'UTR-NC+mi RNA-320d mimic;CDK6 3'UTR+mi RNA-NC,CDK6 3'UTR+mi RNA-320d mimic;CDK63'UTR-MU+mi RNA-NC、CDK6 3'UTR-MU+mi RNA-320d mimic。用雙熒光素酶報告基因測定試劑法檢測酶活性,判斷mi R-320d是否與CDK6的3’UTR特異性結(jié)合。5.構(gòu)建CDK6干擾的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染DLBCL細胞株OCI-LY1,CCK-8法觀察細胞增殖率,Annexin V/FITC法檢測其對細胞凋亡的影響。結(jié)果:1.成功篩選并預(yù)測出hsa-mi R-320d可能與CDK6 3’UTR特異性結(jié)合,并成功構(gòu)建mi R-320d過表達和抑制以及CDK6干擾的慢病毒載體。2.與對照組相比,mi R-320d過表達組DLBCL細胞增殖能力減弱(P0.05);CDK6抑制組與對照組相比,DLBCL細胞增殖能力減弱(P0.05)。與對照組相比,尚未發(fā)現(xiàn)mi R-320d過表達組與CDK6干擾組對DLBCL細胞凋亡率有影響(P0.05)。3.mi R-320d過表達組中CDK6 m RNA相對表達值為0.21±0.04,對照組中CDK6m RNA相對表達值為1.0±0.22,說明轉(zhuǎn)染mi R-320d后,可以抑制DLBCL細胞中CDK6 m RNA的表達,而轉(zhuǎn)染通用載體后,DLBCL細胞中CDK6 m RNA的表達無顯著變化。mi R-320d過表達組中CDK6蛋白表達的相對灰度值低于對照組中的相對灰度值。表明mi R-320d可以抑制DLBCL細胞中CDK6蛋白的表達。4.實驗組的相對熒光素酶活性值為0.37±0.01,對照組值為1±0.06。說明mi R-320d與CDK6 3’UTR特異性結(jié)合。結(jié)論:mi R-320d過表達可以抑制DLBCL細胞增殖能力,其作用機制與mi R-320d抑制CDK6表達進而影響細胞增殖有關(guān),本研究為彌漫大B細胞淋巴瘤基因治療提供新的思路和方法。
【關(guān)鍵詞】：彌漫大B細胞淋巴瘤 microRNA-320d CDK6 增殖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用縮寫詞中英文對照表11-12
• 前言12-15
• 1 材料與方法15-31
• 1.1 實驗材料15-17
• 1.2 實驗方法17-31
• 2 實驗結(jié)果31-38
• 2.1 miR-320d過表達慢病毒載體轉(zhuǎn)染OCI-LY1 細胞轉(zhuǎn)染效率31
• 2.2 CDK6-shRNA轉(zhuǎn)染OCI-LY1 細胞轉(zhuǎn)染效率31-32
• 2.3 轉(zhuǎn)染mi R-320d過表達慢病毒載體或CDK6-shRNA慢病毒載體后對彌漫大B細胞淋巴瘤細胞增殖能力的影響32-33
• 2.4 轉(zhuǎn)染mi R-320d后對彌漫大B細胞淋巴瘤細胞OCI-LY1 凋亡能力的影響33-34
• 2.5 轉(zhuǎn)染CDK6-shRNA后對彌漫大B細胞淋巴瘤細胞OCI-LY1 細胞凋亡能力的影響34-35
• 2.6 轉(zhuǎn)染mi R-320d過表達慢病毒載體后CDK6 在彌漫大B細胞淋巴瘤細胞中的表達35-36
• 2.7 構(gòu)建雙熒光素酶報告基因驗證mi R-320d與CDK63’UTR區(qū)特異性結(jié)合36-38
• 3 討論38-41
• 4 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-48
• 綜述48-60
• 參考文獻55-60
• 致謝60-61
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果61-62
• 個人簡歷62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蔣會勇;李慧靈;胡海;何瀅;趙彤;;彌漫性大B細胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl-2基因擴增的檢測[J];中華病理學(xué)雜志;2007年02期

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本文編號：852788