本文關(guān)鍵詞：miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲的調(diào)控機制及胃癌臨床預(yù)后相關(guān)因素的研究

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【摘要】：目的:侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征之一,直接影響晚期腫瘤患者的臨床治療效果及患者預(yù)后生存情況。越來越多的證據(jù)表明micro RNA(mi RNA)與胃癌的遷移侵襲密切相關(guān)。Fra-1是轉(zhuǎn)錄因子AP-1(Activator Protein 1)的一個調(diào)節(jié)亞基。AP-1通過與靶基因啟動子上的TPA反應(yīng)元件結(jié)合,調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄,從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。Fra-1是ras激活的AP-1復(fù)合物中的主要成分。多種惡性腫瘤如、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等中高表達(dá),并且與這些腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等一系列病理過程有關(guān)。在本實驗室中我們檢測遷移侵襲性不同的胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BCG-823中mi R-34a的表達(dá)情況,研究mi R-34a對胃癌細(xì)胞遷移、侵襲及增殖方面的影響,并初步探討其分子調(diào)控機制。方法:運用實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaetion,RT-PCR)法分析mi R-34a在遷移侵襲性不同的胃癌細(xì)胞株SGC-7901,BCG-823中的表達(dá)情況。劃痕遷移實驗、Transwell侵襲實驗和CCK8實驗分別檢測mi R-34a對SGC-7901,BCG-823細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖能力的影響。采用生物信息學(xué)預(yù)測及熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞Cmi R-34a對靶基因Fos蛋白相關(guān)抗原-1(Fos Related Atigen-1,Fra-1)的靶向調(diào)控作用。Western blotting檢測Fra-1,金屬基質(zhì)蛋白酶-9(matrix metalloproteinases 9,MMP9),Cyclin D1蛋白的水平。結(jié)果:mi R-34a在遷移侵襲性強的胃癌細(xì)胞株SGC-7901中的表達(dá)水平明顯低于遷移侵襲能力較弱的BCG-823。轉(zhuǎn)染mi R-34a后,兩種胃癌細(xì)胞SGC-7901,BCG-823穿過Trasnwell小室的細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞遷移力明顯小于轉(zhuǎn)染陰性對照組,說明mi R-34a可抑制胃癌細(xì)胞遷移及侵襲能力。CCK8實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染mi R-34a后兩種胃癌細(xì)胞株的吸光值都明顯低于轉(zhuǎn)染陰性對照組,提示其增殖能力受到抑制。熒光素酶報告基因及Western blotting實驗結(jié)果表明,mi R-34a能夠直接靶向調(diào)節(jié)Fra-1,降低胃癌中Fra-1的表達(dá)。轉(zhuǎn)染的mi R-34a還可使胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BCG-823中遷移侵襲及周期相關(guān)蛋白MMP9,Cyclin D1表達(dá)量下降。結(jié)論:高表達(dá)的mi R-34a可通過靶向調(diào)控Fra-l的表達(dá),并影響下游侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白分子MMP9、Cyclin D1的表達(dá)從而抑制胃癌細(xì)胞遷移、侵襲及增殖能力。目的:隨著全球生活方式的改變和經(jīng)濟的發(fā)展,胃癌的發(fā)病率逐年增高,而生存率沒有較大變化,胃癌患者預(yù)后仍然較差。近來,淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞比(lymphocyte to monocyte ratio,LMR)已被報道與某些癌癥的臨床預(yù)后相關(guān),但在胃癌中缺少相關(guān)的研究。本文探討II/III期胃癌患者術(shù)前外周血LMR對患者術(shù)后預(yù)后的評估意義。方法:選取2008年2月至2008年12月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行根治性切除術(shù)的胃癌患者426例,檢測外周血淋巴細(xì)胞計數(shù)、單核細(xì)胞計數(shù),通過淋巴細(xì)胞計數(shù)與單細(xì)胞計數(shù)的比值獲得LMR。根據(jù)受試者工作特征(ROC)曲線,獲得LMR最佳截斷值。采用卡方檢驗評估LMR與各臨床特征之間的關(guān)系。采用Kaplan-Meier法計算生存率并用log-rank法進(jìn)行單因素分析。采用COX比例風(fēng)險模型進(jìn)行多因素分析。結(jié)果:腫瘤負(fù)荷較小者LMR較高(P0.001)。預(yù)后相關(guān)臨床病例因素的單因素分析結(jié)果提示:在總生存期(overall survival,OS)方面,較低的LMR,升高的單核細(xì)胞(P=0.01),較大的腫瘤負(fù)荷(P0.001),血管/神經(jīng)浸潤(P0.001),切緣陽性(P=0.042),TNM分期為III期(P0.001)及未進(jìn)行輔助化療(P=0.045)是影響患者總生存期的不良預(yù)后因素。同樣在無復(fù)發(fā)生存期(recurrence-free survival,RFS)中,低LMR(P=0.001),高單核細(xì)胞數(shù)(P=0.016),較大腫瘤負(fù)荷(P=0.007),血管神經(jīng)/浸潤(P0.001),切緣陽性(P=0.002),TNM分期為III期(P0.001)患者,是影響預(yù)后的高風(fēng)險因素。多因素COX風(fēng)險比例函數(shù)模型分析結(jié)果顯示高LMR與無病生存期存在臨界相關(guān)(HR=0.775;95%CI:0.592-1.01;P=0.06)。而在總生存期(OS)方面,LMR(HR=0.688;95%CI:0.521-0.908;P=0.008)可作為影響預(yù)后的獨立性因素。亞組分析顯示,升高的LMR除在III期患者RFS中產(chǎn)生臨界意義(P=0.052),在TNM分期為II期或III期以及無論是否進(jìn)行輔助化療的患者中均為指示良好預(yù)后的指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 miR-34a 遷移 侵襲 Fra-1 淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞比 胃癌 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 第一部分 miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲能力的調(diào)控及機制研究5-50
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-8
• 前言8-13
• 參考文獻(xiàn)10-13
• 第一節(jié) miR-34a在胃癌細(xì)胞株SGC-7901和BCG-823中的表達(dá)材料與方法的表達(dá)13-23
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-20
• 討論20-22
• 結(jié)論22-23
• 第二節(jié) miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲及增殖能力的調(diào)控23-31
• 材料與方法23-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 第三節(jié) miR-34a對胃癌細(xì)胞遷移侵襲調(diào)控的分子機制31-41
• 材料與方法31-36
• 結(jié)果36-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41
• 參考文獻(xiàn)41-49
• 全文總結(jié)49-50
• 第二部分II / III期胃癌患者術(shù)前淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞比（LMR）與預(yù)后的關(guān)系50-69
• 中文摘要50-51
• 英文摘要51-52
• 前言52
• 材料與方法52-53
• 結(jié)果53-60
• 討論60-62
• 結(jié)論62
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 文獻(xiàn)綜述69-81
• 參考文獻(xiàn)76-81
• 英文縮略詞表81-82
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83

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1 王洪一;郭洪;李娟;白云;;mir-34a的表達(dá)調(diào)控及其與腫瘤發(fā)生的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年07期

2 鞏雅寧;劉為青;董堅;;miR-34a對腫瘤發(fā)生發(fā)展調(diào)控作用的最近研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年06期

3 王萍;馬騰;劉云會;趙麗妮;馬s，

本文編號：848572