本文關(guān)鍵詞：NEDD9在肝癌組織中的表達(dá)、功能及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的：探討NEDD9在人肝癌組織中的表達(dá)情況,分析其與肝癌臨床病理特征的相關(guān)關(guān)系,明確肝癌中NEDD9異常表達(dá)的臨床意義。在5株肝癌細(xì)胞株中,采用WB及qRT-PCR檢測NEDD9的表達(dá)情況,選取Hep-G2、MHCC-97-H,采用NEDD9特異性siRNA,研究NEDD9基因沉默后對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響。方法：收集廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肝膽外科2010年至2012年外科手術(shù)切除并經(jīng)過病理證實(shí)的肝細(xì)胞癌組織及臨近的非癌組織標(biāo)本112例。提取肝癌及鄰近非癌組織總RNA,采用qRT-PCR檢測NEDD9在肝癌組織及鄰近非癌組織中mRNA的表達(dá),采用Westernblot檢測各肝癌細(xì)胞株中NEDD9蛋白表達(dá)情況,比較肝癌組織與鄰近非癌組織、肝癌細(xì)胞株與永生化肝細(xì)胞株中NEDD9的表達(dá)。并利用免疫組化學(xué)方法檢測112例肝癌及鄰近非癌組織標(biāo)本中NEDD9蛋白的表達(dá),將其分為低表達(dá)組(0-5分)及高表達(dá)組(6-12分),分析NEDD9高低表達(dá)組與肝癌臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。選取Hep-G2、MHCC-97-H2株肝癌細(xì)胞株,米用RNA干擾技術(shù)默NEDD9,研究NEDD9基因沉默后對肝癌細(xì)胞生長、凋亡、遷移和侵襲的影響。結(jié)果：(1)NEDD9在不同肝癌細(xì)胞系中表達(dá)量不同,除SK-hep-1細(xì)胞系外,在Hep-G2、MHCC-97-H、SSMC-7721、Huh7細(xì)胞系中,表達(dá)量均高于HL7702(p0.05)。在隨機(jī)選取的4對樣本組織中,NEDD9在肝癌組織明顯高于非癌組織(p0.05)。qRT-PCR結(jié)果顯示：在肝癌組織中,NEDD9 mRNA表達(dá)量明顯高于非癌組織(P=0.0020.05),且在肝癌組織中42.9%(48/112)NEDD9 mRNA表達(dá)量上調(diào)2倍以上。(2) NEDD9的表達(dá)與甲胎蛋白(AFP,P=0.029)、BCL C分期(P=0.036)、腫瘤大小(p=0.041)和組織學(xué)分級(p=0.002)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.228、0.288、0.232、0.311(P0.05),與年齡、性別、乙型肝炎、Child-Pugh分級,腫瘤數(shù)目,腫瘤包膜和癌栓無關(guān)。同時(shí)NEDD9的表達(dá)量與DFS和OS相關(guān),進(jìn)一步采用COX分析,NEDD9高表達(dá)組(6-12分)與低表達(dá)組(0-5分)相比,DFS(P=0.040.05)及OS(P0.001)均縮短。COX單變量分析結(jié)果表明,癌栓、腫瘤大小、BCLC分期、血清AFP、組織學(xué)分級和NEDD9的表達(dá)量與肝癌預(yù)后密切相關(guān)。COX多因素分析表明,腫瘤大小(P=0.012),BCLC分期(P=0.040)和NEDD9(P0.001)的表達(dá)量是肝癌預(yù)后的獨(dú)立因素。(3)NEDD9-siRNA沉默后,肝癌細(xì)胞株MHCC97-H、HepG2 NEDD9的mRNA及蛋白表達(dá)量下調(diào),最高下調(diào)為1/20。沉默后MHCC97-H、HepG2的增殖、遷移及侵襲均受到抑制,誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。其中對增殖的抑制在72h最大,其抑制率為63士2%(P0.01)。細(xì)胞遷移(332VS207,P0.01)及侵襲(205VS121,P0.01)個(gè)數(shù)明顯減少。轉(zhuǎn)染48h后,促進(jìn)肝癌細(xì)胞系凋亡(34%vs2%,P0.01)。結(jié)論：在肝癌患者中,NEDD9普遍高表達(dá),其高表達(dá)與肝癌BCLC分期、組織分化程度、腫瘤大小相關(guān),高表達(dá)組預(yù)后較低表達(dá)組差。在選取的肝癌細(xì)胞系中,NEDD9沉默后,肝癌細(xì)胞株增殖、遷移和侵襲能力下降,并誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。NEDD9可能成為治療肝癌的新靶點(diǎn)及判斷預(yù)后的指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 預(yù)后 NEDD9 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 個(gè)人簡歷3-5
• 縮略詞中英文對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 NEDD9在肝癌中的表達(dá)及其臨床意義13-37
• 1. 材料與方法13-25
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-34
• 3. 討論34-36
• 4. 結(jié)論36-37
• 第二部分 NEDD9對肝癌細(xì)胞系生物學(xué)功能的影響37-48
• 1. 材料與方法37-41
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 3. 討論45-47
• 4. 結(jié)論47-48
• 研究不足之處48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 附錄54-57
• 綜述57-76
• 參考文獻(xiàn)67-76
• 致謝76-77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文77

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本文編號：846967