本文關(guān)鍵詞：肝素酶參與肝癌門(mén)靜脈瘤栓形成的組織學(xué)證據(jù)研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 肝素酶 侵襲轉(zhuǎn)移 門(mén)靜脈癌栓/瘤栓 肝素鈉

【摘要】：目的:探尋肝素酶(HPSE)介導(dǎo)肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移及門(mén)靜脈瘤栓形成的組織學(xué)證據(jù)。方法:1)通過(guò)熒光定量RT-PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞HCCLM3、Hep G2以及正常的肝細(xì)胞株LO-2細(xì)胞中HPSE m RNA及蛋白的表達(dá)量。并通過(guò)免疫組化染色顯色HCCLM3、Hep G2中的HPSE蛋白。2)建立裸鼠皮下肝癌模型,研究HCCLM3、Hep G2肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力。3)建立裸鼠皮下肝癌模型,隨機(jī)分生理鹽水注射組和肝素鈉注射組。探討肝素鈉(劑量為500IU,1次/隔3天)對(duì)HCCLM3、Hep G2肝癌細(xì)胞的增殖及侵襲能力的影響。4)建立裸鼠門(mén)靜脈瘤栓模型,探討HCCLM3、Hep G2肝癌細(xì)胞的門(mén)靜脈瘤栓形成能力及特性。5)建立裸鼠門(mén)靜脈瘤栓模型,隨機(jī)分生理鹽水注射組和肝素鈉注射組,并探討肝素鈉(劑量為500IU,1次/隔3天)對(duì)HCCLM3、Hep G2肝癌細(xì)胞的門(mén)靜脈瘤栓形成能力、侵襲轉(zhuǎn)移特性的影響。結(jié)果:1 HCCLM3、Hep G2中HPSE m RNA及蛋白表達(dá)明顯高于正常肝細(xì)胞株LO-2(P0.05),高侵襲、轉(zhuǎn)移性的HCCLM3最高。2)皮下接種癌細(xì)胞(HCCLM3或Hep G2,細(xì)胞濃度為1×106/100μL)300μL一次的裸鼠,飼養(yǎng)一周后見(jiàn)皮下腫瘤形成,以肝素鈉(劑量為500IU,1次/隔3天)注射,5周后見(jiàn)皮下腫瘤全部壞死或僅見(jiàn)局部淤血團(tuán)塊;同樣方法接種成瘤后以和肝素鈉等量的生理鹽水注射,5周后可見(jiàn)接種癌細(xì)胞(HCCLM3、Hep G2)的裸鼠皮下均有明顯的腫瘤生成。以HCCLM3(細(xì)胞濃度為1×106/100μL)300μL接種形成的皮下瘤塊(體積2.275±0.447cm3,重量1.771±0.326g)明顯大于Hep G2(細(xì)胞濃度為1×106/100μL)300μL接種形成的皮下瘤塊(體積0.631±0.142cm3,重量0.375±0.074g),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3)以HCCLM3細(xì)胞懸液(細(xì)胞濃度為1×106/100μL)300μL裸鼠下腹部腹腔接種一次,5周后腹腔成瘤率100%,肝臟均能見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶,門(mén)脈癌栓形成率為40%。以肝癌細(xì)胞Hep G2懸液(細(xì)胞濃度為1×106/100μL)300μL裸鼠下腹部腹腔接種一次,5周后腹腔成瘤率100%,肝臟肝癌轉(zhuǎn)移率為40%,門(mén)脈癌栓形成率為0%,但可以找到正在侵襲門(mén)脈血管壁的癌細(xì)胞。4)以肝癌細(xì)胞HCCLM3(細(xì)胞濃度為1×106/100μL)300μL腹腔接種裸鼠一次。1周后,皮下注射肝素鈉(濃度為500IU,1次/隔3天)。5周后,5周后,腹腔僅見(jiàn)少量的腹腔網(wǎng)膜有微瘤塊形成,肝臟未見(jiàn)瘤塊形成;也未找到肝臟癌灶及門(mén)靜脈瘤栓證據(jù)。以1×106/100μL Hep G2 300μL接種腹腔的裸鼠未見(jiàn)腹腔、轉(zhuǎn)移瘤塊形成及門(mén)脈癌栓形成。結(jié)論:1)肝癌細(xì)胞株HCCLM3具有高表達(dá)HPSE基因及蛋白的特性。2)裸鼠皮下成瘤模型中成瘤率及存活率較高,可用于相關(guān)腫瘤的增殖侵襲研究。3)肝素鈉可明顯抑制高HPSE表達(dá)肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲活性。4)下腹腔注射一定濃度和劑量的肝癌細(xì)胞可建立裸鼠肝臟轉(zhuǎn)移瘤及門(mén)靜脈癌栓模型。5)肝素鈉能明顯抑制高HPSE表達(dá)肝癌細(xì)胞的肝臟轉(zhuǎn)移瘤及門(mén)靜脈癌栓形成。提示HPSE在肝癌組織中的高表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞的增殖、經(jīng)門(mén)靜脈侵襲、轉(zhuǎn)移等相關(guān),值得進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 肝素酶 侵襲轉(zhuǎn)移 門(mén)靜脈癌栓/瘤栓 肝素鈉
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-16
• 研究?jī)?nèi)容與方法16-37
• 1. 研究?jī)?nèi)容16-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料17-22
• 2.1 肝癌細(xì)胞來(lái)源17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑17-18
• 2.3 相關(guān)試劑配制18-21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)主要儀器21-22
• 3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟22-37
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)22-24
• 3.2 肝素酶mRNA表達(dá)的熒光定量RT-PCR檢測(cè)24-27
• 3.3 肝素酶蛋白的Western blot檢測(cè)27-33
• 3.4 肝癌細(xì)胞HPSE蛋白的免疫組化驗(yàn)證33-34
• 3.5 裸鼠皮下肝癌模型的建立及驗(yàn)證34
• 3.6 肝素鈉對(duì)皮下肝癌增殖、侵襲能力的影響34-35
• 3.7 裸鼠肝癌門(mén)靜脈瘤栓模型的建立及驗(yàn)證35-36
• 3.8 肝素鈉對(duì)裸鼠肝癌門(mén)靜脈瘤栓形成的影響36-37
• 結(jié)果37-44
• 1 肝癌細(xì)胞HPSE mRNA表達(dá)的熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果37-38
• 2 肝癌細(xì)胞HPSE蛋白表達(dá)的Western blot檢測(cè)結(jié)果38-39
• 3 裸鼠皮下肝癌模型的建立及肝素的效應(yīng)觀察39-41
• 4 裸鼠肝癌門(mén)靜脈瘤栓模型的建立及肝素的效應(yīng)觀察41-44
• 討論44-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 綜述56-67
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 附錄67-73
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果73-74
• 致謝74

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