本文關(guān)鍵詞：α2，3唾液酸轉(zhuǎn)移酶Ⅲ調(diào)節(jié)卵巢癌細胞對紫杉醇敏感性的研究

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【摘要】：研究目的本課題研究α2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶III(ST3Gal-Ⅲ)在卵巢癌株對紫杉醇敏感性中的作用,探討二者對腫瘤細胞殺傷的協(xié)同效應,為臨床治療復發(fā)性和耐藥性卵巢癌提供新的思路。研究方法1.了解ST3Gal-Ⅲ在卵巢癌細胞株SKOV3和HO8910PM中的表達差異:q RT-PCR檢測HO8910PM、SKOV3細胞株ST3Gal-Ⅲ的基因表達水平,流式細胞術(shù)檢測在ST3Gal-Ⅲ作用下結(jié)合于細胞表面的生物素標記懷槐凝集素MALII的平均熒光強度。2.CCK-8法檢測高、低表達ST3Gal-Ⅲ卵巢癌細胞株對紫杉醇的化療敏感性:CCK-8法檢測不同劑量梯度范圍內(nèi)紫杉醇持續(xù)作用24h,對比HO8910PM、SKOV3的增殖抑制率及半數(shù)抑制濃度(IC50),評估ST3Gal-Ⅲ的表達與卵巢癌細胞株對紫杉醇的化療敏感性的相關(guān)性。3.q RT-PCR檢測ST3Gal-Ⅲsi RNA對高表達ST3Gal-Ⅲ的HO8910-PM細胞株的下調(diào)效率。4.Western Blot檢測先后經(jīng)ST3Gal-Ⅲsi RNA轉(zhuǎn)染、紫杉醇處理后的不同ST3Gal-Ⅲ表達水平的HO8910PM細胞株caspase家族凋亡蛋白的改變,同時聯(lián)合顯色法TUNEL、FACS法檢測各組HO8910PM細胞凋亡效應。探討唾液酸轉(zhuǎn)移酶抑制劑(ST3Gal-Ⅲsi RNA)聯(lián)合紫杉醇對HO8910PM細胞株的毒性差異。5.q RT-PCR檢測紫杉醇對低表達ST3Gal-Ⅲ的SKOV3細胞株的ST3Gal-Ⅲm RNA表達的影響:通過比較不同劑量梯度、作用時間紫杉醇誘導低表達ST3Gal-Ⅲ的SKOV3細胞表面的ST3Gal-Ⅲm RNA表達水平的變化差異,探討紫杉醇對SKOV3細胞株ST3Gal-Ⅲ表達的影響作用和特征規(guī)律。6.q RT-PCR檢測先后經(jīng)紫杉醇、ST3Gal-Ⅲsi RNA處理后的不同處理組的SKOV3細胞ST3Gal-Ⅲ表達。7.Western Blot檢測先后經(jīng)紫杉醇、ST3Gal-Ⅲsi RNA處理后,SKOV3細胞株ST3Gal-Ⅲ表達與caspase家族凋亡蛋白的相關(guān)性,進一步應用顯色法TUNEL、FACS法檢測各組SKOV3細胞凋亡效應。研究不同ST3Gal-Ⅲ表達水平的SKOV3細胞株對紫杉醇化療藥物敏感性的差異,探討ST3Gal-Ⅲ對SKOV3細胞化療敏感性的影響。結(jié)果1.卵巢癌細胞株SKOV3、HO8910PM的ST3Gal-Ⅲ基因表達水平及細胞表面ST3Gal-Ⅲ表達水平均存在明顯差異:q RT-PCR檢測證實ST3Gal-Ⅲm RNA在卵巢癌細胞株SKOV3、HO8910PM中表達存在差異表達(P0.05);流式檢測生物素標記懷槐凝集素MALII結(jié)合細胞表面的α2,3-唾液酸的表達水平存在顯著差異(P0.05);HO8910PM細胞株ST3Gal-Ⅲ表達水平明顯高于SKOV3細胞株。2.高、低表達ST3Gal-Ⅲ卵巢癌細胞株的紫杉醇化療敏感性不同:通過CCK8法檢測不同劑量梯度范圍內(nèi)紫杉醇作用SKOV3、HO8910PM細胞株24h的細胞增殖抑制率,高表達的HO8910PM細胞株的增殖抑制率明顯低于低表達的SKOV3細胞株,HO8910PM細胞株(IC50=395.078nmol/L)的紫杉醇半數(shù)抑制濃度約為SKOV3細胞株的(IC50=130.645nmol/L)的3倍。3.唾液酸轉(zhuǎn)移酶抑制劑能夠有效下調(diào)HO8910PM細胞株ST3Gal-Ⅲ表達:q RT-PCR檢測si RNA組ST3Gal-Ⅲm RNA的相對表達量為對照組的0.239±0.859倍,兩者之間的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000);經(jīng)紫杉醇處理后的PTX+si RNA組ST3Gal-Ⅲm RNA的相對表達量為PTX+non-si RNA組的0.184±0.037倍,兩者之間的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。4.HO8910PM細胞株先后經(jīng)ST3Gal-Ⅲsi RNA轉(zhuǎn)染、紫杉醇聯(lián)合處理后caspase家族凋亡蛋白表達增強,細胞凋亡增加:Western Blot檢測結(jié)果顯示,PTX+si RNA組、si RNA組ST3Gal-Ⅲ蛋白的表達明顯低于對照組、PTX組、PTX-non-si RNA組;PTX+si RNA組caspase凋亡蛋白表達明顯高于其他對照組組。FACS法、顯色法TUNEL檢測各組HO8910PM細胞凋亡情況結(jié)果與上相同。5.紫杉醇上調(diào)SKOV3細胞株ST3Gal-Ⅲ水平:通過不同濃度紫杉醇(0nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L),不同藥物處理時間(24h、48h、72h)作用SKOV3細胞株;q RT-PCR檢測結(jié)果顯示紫杉醇作為細胞周期特異性藥物,對卵巢癌細胞ST3Gal-Ⅲ誘導表達存在一定的時間-劑量相關(guān)性規(guī)律;其中50nmol/L濃度的紫杉醇持續(xù)作用48h時誘導SKOV3細胞株表達上調(diào)效果最為顯著,ST3Gal-Ⅲm RNA表達量約為對照組的3倍。6.q RT-PCR檢測先后經(jīng)紫杉醇、ST3Gal-Ⅲsi RNA處理后的不同處理組的SKOV3細胞株ST3Gal-Ⅲ表達水平:結(jié)果顯示PTX+si RNA組ST3Gal-Ⅲm RNA的相對表達量顯著低于其余處理組;PTX96h組、PTX+non-si RNA組、PTX48h組紫杉醇藥物處理組ST3Gal-Ⅲm RNA的相對表達量均顯著高于對照組的基礎(chǔ)表達。7.Western blot檢測結(jié)果顯示各組不同ST3Gal-Ⅲ表達水平SKOV3細胞凋亡蛋白表達情況,PTX+si RNA凋亡蛋白表達明顯高于對照組、PTX96h、PTX+non-si RNA組。這與FACS法、顯色法TUNEL檢測各組SKOV3細胞凋亡結(jié)果基本一致。結(jié)論1、卵巢癌HO8910PM細胞株表面的ST3Gal-Ⅲ表達水平明顯高于SKOV3細胞株。2、低表達ST3Gal-Ⅲ的SKOV3細胞株對紫杉醇更為敏感,而高表達ST3Gal-Ⅲ的HO8910PM細胞株對紫杉醇更為耐受。3、ST3Gal-Ⅲsi RNA聯(lián)合紫杉醇能夠增強HO8910PM細胞株的化療敏感性。4、低劑量紫杉醇上調(diào)卵巢癌SKOV3細胞株ST3Gal-Ⅲ的表達,增強其對紫杉醇的抵抗作用,下調(diào)已經(jīng)增高的ST3Gal-Ⅲ表達可以減弱對紫杉醇的化療抵抗。5、ST3Gal-Ⅲ降低了卵巢癌細胞對紫杉醇的敏感性,可能通過Caspase途徑保護卵巢癌細胞免于藥物誘導的細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 ST3Gal-Ⅲ α2 3-唾液酸 siRNA 紫杉醇 細胞凋亡 化療敏感性
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-10
• 前言10-15
• 第一部分15-24
• 材料和方法15-19
• 結(jié)果19-22
• 討論22-23
• 結(jié)論23-24
• 第二部分24-39
• 材料和方法24-31
• 結(jié)果31-37
• 討論37-38
• 結(jié)論38-39
• 第三部分39-47
• 材料和方法39-40
• 結(jié)果40-45
• 討論45-46
• 結(jié)論46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻48-51
• 英文縮略詞表51-52
• 碩士研究生期間的科研成果52-53
• 致謝53

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