本文關鍵詞：氧化損傷對口腔鱗癌細胞scc-25生長與抑制的調(diào)控機制研究

  更多相關文章： 過氧化氫 氧化應激 口腔鱗癌細胞 炎癥 超螺旋敏感定量PCR(ss-qPCR)

【摘要】：目的外源性的氧化刺激作用下誘導口腔鱗癌細胞中mtDNA損傷、修復、拷貝數(shù)的動態(tài)變化過程;研究DNA損傷與細胞活性以及mtDNA損傷與核DNA損傷相關性的研究;探索口腔鱗癌的致病機理和防治方法。方法選用口腔鱗癌中發(fā)病率較高,惡性程度較強的口腔鱗狀細胞癌SCC-25細胞株為實驗模型,選用皮膚纖維原細胞株BJ作為對照實驗模型,以四個濃度H2O2(120μM-960μM),六個時間點(15min,1h,2h,24h,48h,72h)誘導細胞出現(xiàn)氧化損傷反應,通過ss-q PCR方法測定mtDNA損傷、修復和拷貝數(shù)降解的動態(tài)過程;MTT方法測定細胞活性與生長抑制;γH2AX方法測定細胞核DNA雙鏈斷裂情況;建星凝膠電泳實驗進行口腔癌細胞核DNA單鏈及雙鏈斷裂情況。結果通過ss-qPCR方法檢測兩種細胞中mtDNA損傷,修復的動態(tài)變化發(fā)現(xiàn),SCC-25細胞,在低水平的氧化應激作用下,會出現(xiàn)氧化損傷與修復的反應,拷貝數(shù)不會發(fā)生改變;高水平的刺激下,則形成不可逆的損傷,隨著時間一直持續(xù),拷貝數(shù)也顯著降低。對于正常細胞BJ而言,低水平的氧化刺激,并沒有引起細胞的損傷修復機制,隨著刺激水平的提高,才表現(xiàn)出損傷,及一定程度的修復功能。比較可見,癌細胞對氧化刺激更為敏感,反應更為強烈。同時,兩種細胞的MTT實驗檢測,癌細胞的LC50濃度僅為對照細胞的0.5倍,這與癌細胞在受到較低濃度刺激時就表現(xiàn)出的氧化損傷相對應。當對癌細胞中核DNA進行斷裂檢測發(fā)現(xiàn),氧化刺激下,同樣會引發(fā)核DNA的斷裂,而且兩種斷裂趨勢相同,說明mtDNA可以作為核DNA斷裂的一種敏感指示劑。結論我們通過新的技術手段,首次檢測出口腔癌在外源性刺激下的mtDNA損傷修復的動態(tài)變化過程。這樣的一個動態(tài)過程將為癌癥的早期診斷以及早期預防提供新的思路。同時,由外源性自由基誘發(fā)的口腔癌細胞與正常細胞之間的差異性反應,這也將為癌癥特異性的針對性治療提供新思路。通過流式細胞術及堿性凝膠電泳實驗實驗首次證明,mtDNA氧化損傷與核DNA氧化損傷具有相同的反應趨勢,提示mtDNA可以作為核DNA氧化損傷的敏感指示劑。
【關鍵詞】：過氧化氫 氧化應激 口腔鱗癌細胞 炎癥 超螺旋敏感定量PCR(ss-qPCR)
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語8-9
• 前言9-12
• 實驗材料與方法12-18
• 實驗結果18-38
• 討論38-40
• 結論40-41
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄46-60
• 一、文獻綜述 氧化損傷在人類癌癥中的研究進展46-57
• 參考文獻52-57
• 二、在學期間科研成績57-58
• 三、致謝58-59
• 四、個人簡介59-60

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本文編號：831650