二硫化鉬介導的Plk1基因沉默對肝癌細胞的影響

發(fā)布時間：2017-09-11 10:52

本文關鍵詞：二硫化鉬介導的Plk1基因沉默對肝癌細胞的影響

【摘要】：目的探討聚乙二醇修飾的二硫化鉬作為基因載體的可行性及介導Plk1基因對肝癌細胞的影響。方法1)采用化學剝離法合成了二硫化鉬(Mo S2)納米片,再用高分子聚合物聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)、聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)層層修飾為Mo S2-PEG-PEI,并對合成的二硫化鉬材料進行表征研究。2)通過體外細胞毒性試驗對二硫化鉬納米材料進行體外毒性實驗。3)用凝膠阻滯電泳實驗檢驗二硫化鉬納米材料和小干擾RNA(small interfering RNA,si RNA)的結合能力。4)以Mo S2-PEG-PEI材料作為si Plk1的載體,對人肝癌細胞株(Hep G2細胞)進行轉染,通過共聚焦顯微鏡觀察細胞攝取Mo S2-PEG-PEI/si RNA復合物情況。5)通過Western blotting以及RT-q PCR實驗研究Mo S2-PEG-PEI介導的si Plk1轉染對肝癌細胞蛋白及m RNA表達水平的影響,并通過流式細胞技術觀察肝癌細胞的凋亡情況。結果1)單層二硫化鉬納米片進行了LA-PEG修飾和加聚PEI支鏈后,所得到的Mo S2-PEG-PEI,具有較好的穩(wěn)定性,并帶有正電荷;Mo S2、Mo S2-PEG的Zeta電位分別為-17.9 and-8.9 m V。Mo S2-PEG聚合帶正電荷的PEI涂層后Zeta電位增加為19.9 m V,帶有更多正電荷2)Mo S2,Mo S2-PEG和Mo S2-PEG-PEI均無明顯細胞毒性。3)當N/P比在5以上時,凝膠電泳結果顯示Mo S2-PEG-PEI明顯阻滯si RNA。4)共聚焦顯微鏡顯示Mo S2-PEG-PEI/si RNA成功轉染Hep G2細胞。5)Western blotting以及RT-q PCR實驗結果均表明,Mo S2-PEG-PEI/si RNA沉默Hep G2細胞相關蛋白表達。6)流式細胞技術檢測顯示,將Mo S2-PEG-PEI作為si Plk1載體轉染肝癌Hep G2細胞,可使肝癌細胞凋亡。結論二硫化鉬納米片通過表面修飾后所得到的Mo S2-PEG-PEI無明顯的細胞毒性,具有良好的生物相容性,可以作為si Plk1的載體轉染肝癌細胞,有較高的轉染效率,并可下調肝癌細胞Plk1蛋白的表達,導致肝癌細胞的凋亡。因此,Mo S2-PEG-PEI可以作為一種納米載體,用于肝癌腫瘤的基因治療。
【關鍵詞】：二硫化鉬 非病毒載體 肝癌 基因治療
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：