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二硫化鉬介導(dǎo)的Plk1基因沉默對(duì)肝癌細(xì)胞的影響

發(fā)布時(shí)間：2017-09-11 10:52

本文關(guān)鍵詞：二硫化鉬介導(dǎo)的Plk1基因沉默對(duì)肝癌細(xì)胞的影響

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【摘要】：目的探討聚乙二醇修飾的二硫化鉬作為基因載體的可行性及介導(dǎo)Plk1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的影響。方法1)采用化學(xué)剝離法合成了二硫化鉬(Mo S2)納米片,再用高分子聚合物聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)、聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)層層修飾為Mo S2-PEG-PEI,并對(duì)合成的二硫化鉬材料進(jìn)行表征研究。2)通過(guò)體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)對(duì)二硫化鉬納米材料進(jìn)行體外毒性實(shí)驗(yàn)。3)用凝膠阻滯電泳實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)二硫化鉬納米材料和小干擾RNA(small interfering RNA,si RNA)的結(jié)合能力。4)以Mo S2-PEG-PEI材料作為si Plk1的載體,對(duì)人肝癌細(xì)胞株(Hep G2細(xì)胞)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞攝取Mo S2-PEG-PEI/si RNA復(fù)合物情況。5)通過(guò)Western blotting以及RT-q PCR實(shí)驗(yàn)研究Mo S2-PEG-PEI介導(dǎo)的si Plk1轉(zhuǎn)染對(duì)肝癌細(xì)胞蛋白及m RNA表達(dá)水平的影響,并通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)觀察肝癌細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果1)單層二硫化鉬納米片進(jìn)行了LA-PEG修飾和加聚PEI支鏈后,所得到的Mo S2-PEG-PEI,具有較好的穩(wěn)定性,并帶有正電荷;Mo S2、Mo S2-PEG的Zeta電位分別為-17.9 and-8.9 m V。Mo S2-PEG聚合帶正電荷的PEI涂層后Zeta電位增加為19.9 m V,帶有更多正電荷2)Mo S2,Mo S2-PEG和Mo S2-PEG-PEI均無(wú)明顯細(xì)胞毒性。3)當(dāng)N/P比在5以上時(shí),凝膠電泳結(jié)果顯示Mo S2-PEG-PEI明顯阻滯si RNA。4)共聚焦顯微鏡顯示Mo S2-PEG-PEI/si RNA成功轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞。5)Western blotting以及RT-q PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明,Mo S2-PEG-PEI/si RNA沉默Hep G2細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)。6)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)顯示,將Mo S2-PEG-PEI作為si Plk1載體轉(zhuǎn)染肝癌Hep G2細(xì)胞,可使肝癌細(xì)胞凋亡。結(jié)論二硫化鉬納米片通過(guò)表面修飾后所得到的Mo S2-PEG-PEI無(wú)明顯的細(xì)胞毒性,具有良好的生物相容性,可以作為si Plk1的載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞,有較高的轉(zhuǎn)染效率,并可下調(diào)肝癌細(xì)胞Plk1蛋白的表達(dá),導(dǎo)致肝癌細(xì)胞的凋亡。因此,Mo S2-PEG-PEI可以作為一種納米載體,用于肝癌腫瘤的基因治療。
【關(guān)鍵詞】：二硫化鉬 非病毒載體 肝癌 基因治療
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：