本文關(guān)鍵詞：LncRNA-MALAT1與Hsa-miR-1互作機(jī)制對(duì)大腸癌放射敏感性的影響研究

  更多相關(guān)文章： LncRNA-MALAT1 大腸癌 hsa-mi R-1 放射敏感性 非編碼RNA

【摘要】：目的1.篩選鑒定大腸癌放射敏感性相關(guān)Lnc RNA及其靶向作用micro RNA。2.初步闡明Lnc RNA-MALAT1與hsa-mi R-1對(duì)大腸癌細(xì)胞放射敏感性的影響機(jī)制。3.探討Lnc RNA-MALAT1與hsa-mi R-1相互作用機(jī)制。方法1.通過對(duì)7株大腸癌細(xì)胞進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn),挑選出放射抵抗與放射敏感細(xì)胞株,采用二代測(cè)序法篩選放射誘導(dǎo)過程中差異表達(dá)的Lnc RNA。對(duì)差異表達(dá)的Lnc RNA進(jìn)行生物信息學(xué)分析。2.使用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)大腸癌細(xì)胞和大腸癌組織標(biāo)本中Lnc RNA-MALAT1及hsa-mi R-1的表達(dá)量。3.利用轉(zhuǎn)染技術(shù)分別下調(diào)和上調(diào)大腸癌細(xì)胞中Lnc RNA-MALAT1和hsa-mi R-1表達(dá)并聯(lián)合照射處理后,通過MTT、生長(zhǎng)克隆、劃痕、凋亡及Western Blot實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞活力、增殖能力、遷移能力、細(xì)胞凋亡率以及MMP-2、MMP-9、E鈣粘蛋白、Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)。4.通過生物信息學(xué)分析,找出Lnc RNA-MALAT1上hsa-mi R-1結(jié)合位點(diǎn),構(gòu)建包含此位點(diǎn)的熒光素酶報(bào)告基因,通過檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因的活力來驗(yàn)證兩者的靶向結(jié)合能力,分別調(diào)控細(xì)胞中Lnc RNA-MALAT1和hsa-mi R-1表達(dá)量,進(jìn)一步驗(yàn)證兩者之間的相互調(diào)控作用。結(jié)果1.通過克隆形成實(shí)驗(yàn),我們?cè)?株大腸癌細(xì)胞中篩選出放射敏感性差異最大的兩株細(xì)胞株,即放射抵抗的CCL244細(xì)胞和放射敏感的HCT116細(xì)胞。2.二代測(cè)序結(jié)果顯示,照射前后兩株細(xì)胞間均差異表達(dá)的lnc RNA有24條(2倍差異以上),通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),其中Lnc RNA-MALAT1有極強(qiáng)的micro RNA結(jié)合能力,hsa-mi R-1為其靶向micro RNA。3.隨著照射劑量增加,照射后時(shí)間延長(zhǎng),CCL244細(xì)胞中Lnc RNA-MALAT1表達(dá)量升高,hsa-mi R-1表達(dá)量減少,并呈照射劑量依賴性和時(shí)間依賴性。4.與癌旁正常大腸組織相比,大腸癌組織中Lnc RNA-MALAT1表達(dá)量升高(P0.05),hsa-mi R-1表達(dá)量降低(P0.001)。5.Lnc RNA-MALAT1下調(diào)聯(lián)合照射處理組及hsa-mi R-1上調(diào)聯(lián)合照射處理組與單純照射處理組相比細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖及遷移能力均明顯受到抑制,MMP-2、MMP-9及Bcl-2表達(dá)均降低,E鈣粘蛋白、Bax表達(dá)及細(xì)胞凋亡率均升高。6.熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明,Lnc RNA-MALAT1 3’端序列中包含有hsa-mi R-1的結(jié)合位點(diǎn);實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)則證實(shí)hsa-mi R-1可以調(diào)控Lnc RNA-MALAT1的表達(dá)。結(jié)論Lnc RNA-MALAT1可調(diào)控大腸癌細(xì)胞放射敏感性;hsa-mi R-1可通過與Lnc RNA-MALAT1 3’端特定區(qū)域結(jié)合,抑制Lnc RNA-MALAT1表達(dá),從而發(fā)揮對(duì)大腸癌細(xì)胞的放射增敏作用。
【關(guān)鍵詞】：LncRNA-MALAT1 大腸癌 hsa-mi R-1 放射敏感性 非編碼RNA
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 材料與方法13-27
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-45
• 第四章 討論45-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 縮略詞表63-64
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論文64-65
• 致謝65-66

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