本文關(guān)鍵詞：共刺激分子B7-H4在人乳腺癌組織中的表達(dá)及在三陰性乳腺癌細(xì)胞中的功能研究

  更多相關(guān)文章： TNBC B7-H4 MDA-MB-453 sh RNA p65

【摘要】：目的:乳腺癌是當(dāng)前女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,其發(fā)病率呈快速上升趨勢(shì)。三陰性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)是指雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)和人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(human epidermal growth factor receptors-2,Her-2)均呈陰性的一種特殊類型乳腺癌,占所有乳腺癌的10.0%~20.8%,是預(yù)后最差的一個(gè)亞型。它具有發(fā)病早、預(yù)后差、易早期復(fù)發(fā)、死亡率高、極易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)。共刺激分子B7同源體4(B7 homolog 4,B7-H4)表達(dá)于多種惡性腫瘤,可抑制T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞周期阻滯,從而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。B7-H4表達(dá)水平與多種腫瘤患者的臨床病理特征及不良預(yù)后密切相關(guān),可能成為腫瘤免疫治療的靶向分子。本研究通過(guò)探討B(tài)7-H4分子與TNBC臨床病理特征的關(guān)系,以及對(duì)TNBC細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲等生物學(xué)特性的影響,分析B7-H4分子在TNBC發(fā)生及發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制。方法:1利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)B7-H4分子在Luminal A、Luminal B、Her-2和TNBC組織中蛋白水平的表達(dá),并分析其表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。2構(gòu)建沉默B7-H4的sh RNA表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染TNBC細(xì)胞MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468,同時(shí)用control-sh RNA做陰性對(duì)照,轉(zhuǎn)染48h后收集細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)生物學(xué)特性方面的檢測(cè)。3利用熒光顯微鏡和Western-blot方法檢測(cè)control-sh RNA和B7-H4-sh RNA在MDA-MB-231,MDA-MB-453、MDA-MB-468細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率,篩選一株細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。4 MTT法檢測(cè)下調(diào)B7-H4分子表達(dá)后對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞體外增殖的影響并繪制生長(zhǎng)曲線。5利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下B7-H4分子表達(dá)后對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響。6采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)下調(diào)B7-H4分子表達(dá)后對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞凋亡情況。7利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot方法檢測(cè)下調(diào)B7-H4分子表達(dá)后對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號(hào)通路中p65亞基m RNA和蛋白水平表達(dá)的影響。結(jié)果:1免疫組織化學(xué)分析結(jié)果顯示在111例乳腺癌組織中,B7-H4的陽(yáng)性率為73.9%(82/111),主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿和胞膜。根據(jù)乳腺癌的分子表型進(jìn)行分類為:Luminal A型、Luminal B型、Her-2型和三陰型,結(jié)果顯示B7-H4在TNBC組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為90.2%(37/41),明顯高于Luminal A型:66.7%(14/21),Luminal B型:68.0%(17/25)和Her-2型:58.3%(14/24)。B7-H4在TNBC組陽(yáng)性率明顯高于Luminal A型、Luminal B型、Her-2型,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.0167)。在41例TNBC組織中,B7-H4的高表達(dá)多見(jiàn)于浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌型,與其他類型相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);B7-H4在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的TNBC患者組織中陽(yáng)性表達(dá)率比率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P0.05);且B7-H4的表達(dá)與雄性激素受體(androgen receptor,AR)的陰性表達(dá)顯著高于AR陽(yáng)性患者(P0.05)。研究未發(fā)現(xiàn)B7-H4的表達(dá)與TNBC患者其他臨床病理特征,如年齡、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67的表達(dá)存在相關(guān)性(P0.05)。對(duì)TNBC組進(jìn)行生存分析,結(jié)果顯示,B7-H4陽(yáng)性表達(dá)組5年無(wú)病生存率(disease free survival,DFS)為59.5%明顯低于陰性組75.0%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)結(jié)果利用熒光顯微鏡觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效果,并用Western-blot方法檢測(cè)得到轉(zhuǎn)染效率分別為:①M(fèi)DA-MB-231細(xì)胞:control-sh RNA和B7-H4-sh RNA的B7-H4與內(nèi)參灰度比值分別為0.236±0.180和0.180±0.018,B7-H4-sh RNA轉(zhuǎn)染效率為23.6±0.03%(P0.01)。②MDA-MB-453細(xì)胞:control-sh RNA和B7-H4-sh RNA的B7-H4與內(nèi)參灰度比值分別為0.871±0.190和0.217±0.006,B7-H4-sh RNA轉(zhuǎn)染效率為75.1±0.80%(P0.01)。③MDA-MB-468細(xì)胞:control-sh RNA和B7-H4-sh RNA的B7-H4與內(nèi)參灰度比值分別為0.691±0.018和0.358±0.061,B7-H4-sh RNA轉(zhuǎn)染效率為48.2±8.00%。結(jié)果提示,MDA-MB-453細(xì)胞B7-H4蛋白高表達(dá),且B7-H4-sh RNA對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率明顯高于其他兩株細(xì)胞,(P0.01),因此適合進(jìn)行后續(xù)生物學(xué)功能試驗(yàn)。3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果MTT分析結(jié)果顯示,將control-sh RNA組和B7-H4-sh RNA組MDA-MB-453細(xì)胞分別接種于96孔板24h、48h、72h后,control-sh RNA組細(xì)胞檢測(cè)的吸光度值分別為0.326±0.093,0.612±0.123,1.115±0.111;B7-H4-sh RNA組細(xì)胞檢測(cè)的吸光度值分別為0.282±0.072,0.372±0.100,0.693±0.099。檢驗(yàn)結(jié)果分析,接種24h后,細(xì)胞增殖無(wú)明顯差異,而接種48h和72h后,B7-H4-sh RNA比control-sh RNA細(xì)胞增殖明顯降低,(P0.01,P0.01,P0.01)。B7-H4-sh RNA在24h、48h、72h的增殖抑制率分別為12.8±4.1%、39.9±4.9%和38.0±2.8%。4細(xì)胞侵襲和遷移的檢測(cè)結(jié)果倒置顯微鏡下觀察MDA-MB-453細(xì)胞穿過(guò)Transwell小室侵襲至下室數(shù)量:control-sh RNA組和B7-H4-sh RNA組分別為(200.3±8.0)和(93.7±6.0)個(gè)/高倍視野(×100),B7-H4-sh RNA組明顯少于control-sh RNA組(P0.01);倒置顯微鏡下觀察MDA-MB-453細(xì)胞穿過(guò)Transwell小室遷移至下室數(shù)量:control-sh RNA組和B7-H4-sh RNA組分別為(295.0±8.7)和(147.3±3.5)個(gè)/高倍視野(×100),B7-H4-sh RNA組明顯少于control-sh RNA組(P0.01),結(jié)果說(shuō)明下調(diào)B7-H4的表達(dá)可抑制MDA-MB-453細(xì)胞的侵襲和遷移能力。5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,MDA-MB-453細(xì)胞轉(zhuǎn)染B7-H4-sh RNA后,細(xì)胞凋亡率與control-sh RNA組相比顯著增加,50.9±4.0%的MDA-MB-453細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期(P0.05)。說(shuō)明通過(guò)下調(diào)B7-H4可促進(jìn)TNBC細(xì)胞的凋亡,并調(diào)控細(xì)胞周期使其停滯于G0/G1期。6實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)結(jié)果利用Real-time PCR方法檢測(cè)p65基因在MDA-MB-453細(xì)胞m RNA水平上的表達(dá),結(jié)果顯示B7-H4-sh RNA組p65表達(dá)量明顯低于control-sh RNA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而且Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示p65和B7-H4 m RNA表達(dá)呈正相關(guān)(P0.01)。利用Western-blot方法檢測(cè)p65分子在MDA-MB-453細(xì)胞中蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示B7-H4-sh RNA組p65表達(dá)量明顯低于control-sh RNA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且B7-H4與p65表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論:B7-H4分子在不同乳腺癌亞型組織中均有表達(dá),其中在TNBC中陽(yáng)性表達(dá)率最高。B7-H4的表達(dá)與TNBC病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AR的陰性表達(dá)及與不良預(yù)后存在相關(guān)性。下調(diào)B7-H4分子的表達(dá)后,TNBC細(xì)胞體外增殖、侵襲和遷移的能力均減弱,并誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡,同時(shí)抑制NF-κB途徑主要發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能的亞基p65的表達(dá)。因此,B7-H4可能有望成為TNBC靶向治療的新指標(biāo)。6實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)結(jié)果
【關(guān)鍵詞】：TNBC B7-H4 MDA-MB-453 sh RNA p65
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 引言14-16
• 第一部分 共刺激分子 B7-H4 在人三陰性乳腺癌組織中的 表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系16-34
• 前言16-17
• 材料與方法17-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-26
• 附表26-29
• 討論29-31
• 小結(jié)31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 第二部分 探討 B7-H4 對(duì)人三陰性乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響34-65
• 前言34-35
• 材料與方法35-47
• 結(jié)果47-49
• 附圖49-59
• 附表59-61
• 討論61-63
• 小結(jié)63
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 結(jié)論65-66
• 綜述 共刺激分子B7-H4 在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展66-81
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 致謝81-82
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷82

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳德志,王永安;人乳腺癌組織中環(huán)氧化酶-2基因的表達(dá)及其意義[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年07期

2 李艷萍;史福軍;汪艷麗;;主要組織相容性復(fù)合體在人乳腺癌組織的表達(dá)[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2005年04期

3 文冬生;人乳腺癌組織中淋巴細(xì)胞亞群的鑒別及其意義[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));1983年02期

4 涂剛,姚榛祥,董蒲江;核因子κB在人乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義[J];中國(guó)普通外科雜志;2003年05期

5 林小紅;孫淑明;吳麗娥;;缺氧誘導(dǎo)因子-1α及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在人乳腺癌組織中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年02期

6 于舸,呂淑華,許家林,張存洲,張春平;衰減全反射紅外光譜用于人乳腺癌組織的研究[J];光子學(xué)報(bào);2005年03期

7 王杉,梁斌,喬新民,嚴(yán)飛飛,崔志榮;細(xì)胞周期素H和細(xì)胞周期素依賴性激酶7在人乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義[J];中華普通外科雜志;2002年10期

8 王殊,王杉,張嘉慶,喬新民,楊德啟,佟富中,葉穎江,崔志榮;雌激素受體亞型在人乳腺癌的表達(dá)及意義[J];中華外科雜志;2004年13期

9 洪杉;王玲;馬晶;張雅芳;;人乳腺癌組織淋巴管的超微結(jié)構(gòu)[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2007年01期

10 高益芝;吳祥德;楊集祥;;人乳腺癌組織中6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性及同工酶的分析[J];天津醫(yī)藥腫瘤學(xué)附刊;1983年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊麗娟;;Th17細(xì)胞在人乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[A];河北省免疫學(xué)會(huì)第六次免疫學(xué)大會(huì)資料匯編[C];2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 王薇;共刺激分子B7-H4在人乳腺癌組織中的表達(dá)及在三陰性乳腺癌細(xì)胞中的功能研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 彭博文;人乳腺癌組織資源庫(kù)的初步構(gòu)建[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

3 郭玉芳;人乳腺癌組織活化型MMP-2的分布、意義及活化機(jī)制的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2005年

4 李宏;候選抑癌基因OPCML在人乳腺癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)及意義[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2013年

5 雒偉偉;轉(zhuǎn)錄因子FOXD1在人乳腺癌組織不同時(shí)期的表達(dá)差異和功能分析[D];吉林大學(xué);2009年

6 孫會(huì)群;人乳腺癌組織中VEGF/VEGI表達(dá)指數(shù)與臨床病理特征的關(guān)系[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

7 屈淑賢;人乳腺癌組織中D2-40標(biāo)記的微淋巴管密度與VEGF-A、VEGF-C表達(dá)關(guān)系的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

8 張采欣;人乳腺癌組織中Cathepsin-D、MMP-2和MMP-9的表達(dá)及DNA倍體分析的研究[D];青島大學(xué);2004年

，

本文編號(hào)：828215