本文關(guān)鍵詞：TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及對細(xì)胞增殖和周期的影響

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【摘要】：背景：腎透明細(xì)胞癌臨床常見,惡性度較高,尤其是晚期轉(zhuǎn)移性患者,外科手術(shù)、放療、化療均不敏感,成為治療的難點(diǎn)。腎透明細(xì)胞癌中存在很多基因突變,近年來尋找切實有效的分子靶點(diǎn),開展分子靶向治療及早期診斷顯示出更大的臨床優(yōu)勢。TFAP2α是一種轉(zhuǎn)錄因子,在很多腫瘤類型中表達(dá)異常,被認(rèn)為與腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制有著密切關(guān)系。但Tl AP2α在腎透明細(xì)胞癌中的研究報道很少見到。目的：本實驗旨在研究TFAP2α在人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞、組織中的表達(dá),探討腫瘤組織中TFAP2α水平與臨床資料的相關(guān)性;并在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中,通過下調(diào)或上調(diào)TFAP2α的表達(dá),檢測其對腫瘤細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響,從而探索TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物學(xué)意義。方法：1.PCR及Western-blot檢測腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系(769-P、Caki-2、786-O、Caki-1、ACHN、A498、SN12-PM6)與正常腎小管上皮細(xì)胞系(HKC、HK2)中TFAP2α的表達(dá)水平差異;免疫組織化學(xué)方法檢測12例腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織及對應(yīng)瘤旁組織中TFAP2α表達(dá),PCR法檢測49例腎透明細(xì)胞癌腫瘤組織和相應(yīng)瘤旁組織中TFAP2α表達(dá)水平差異,并分析與臨床資料的相關(guān)性。2.運(yùn)用RNA干擾技術(shù),在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O中,轉(zhuǎn)染siRNA下調(diào)TFAP2α的表達(dá)，檢測786-O細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化。3.構(gòu)建pLV-EGFP(2A)-TFAP2α質(zhì)粒,上調(diào)TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和Caki-2的表達(dá),檢測786-O、Caki-2細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化。結(jié)果：1.在細(xì)胞系中,腎透明細(xì)胞癌較正常腎小管上皮細(xì)胞中TFAP2α的mRNA水平、蛋白水平均顯著降低(P0.05)。在組織中,免疫組化顯示TFAP2α在胞核及胞質(zhì)均有表達(dá)，以胞核為主：腫瘤組織中弱表達(dá),對應(yīng)瘤旁組織中表達(dá)相對較強(qiáng);腫瘤組織mRNA平均表達(dá)顯著低于瘤旁組織(P0.05);TFAP2α的mRNA水平在不同性別、年齡、BMI指數(shù)、及T分期等組間的表達(dá)均無統(tǒng)計學(xué)意義(PO.05),但與腎透明細(xì)胞癌Fuhrman分級呈負(fù)相關(guān)(P0.05),Fuhrman分級越高,TFAP2α表達(dá)水平越低。2.成功轉(zhuǎn)染siRNA-TFAP2α下調(diào)腎透明細(xì)胞癌TFAP2α表達(dá),MTS及平板克隆實驗顯示下調(diào)TFAP2a后細(xì)胞增殖率明顯增高(P0.05),流式細(xì)胞術(shù)顯示siRNA組G0/G1期細(xì)胞比例顯著降低,S期細(xì)胞比例顯著升高(P0.05),而G2/M期比例無顯著差異(P0.05),細(xì)胞快速進(jìn)入S期而促進(jìn)細(xì)胞增殖。3.成功構(gòu)建pLV-EGFP(2A)-TFAP2α質(zhì)粒上調(diào)腎透明細(xì)胞癌TFAP2 α表達(dá)，MTS及平板克隆實驗顯示上調(diào)TFAP2a后細(xì)胞增殖率明顯降低(P0.05),流式細(xì)胞術(shù)顯示質(zhì)粒組G0/G1期細(xì)胞比例顯著升高,S期細(xì)胞比例均顯著降低(P0.05),而G2/M期比例無顯著差異(P0.05),阻滯于G1/S期而抑制細(xì)胞增殖。結(jié)論：TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌中異常低表達(dá),與其惡性分化程度存在相關(guān)性;TFAP2α影響癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期變化,提示可能在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因作用。
【關(guān)鍵詞】：TFAP2α 腎透明細(xì)胞癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 TFAP2α在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系和組織中的表達(dá)11-19
• 1. 材料與方法11-15
• 2. 結(jié)果15-18
• 3. 小結(jié)18-19
• 第二部分 siRNA下調(diào)TFAP2α表達(dá)對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系增殖能力的影響19-24
• 1. 材料與方法19-21
• 2. 結(jié)果21-23
• 3. 小結(jié)23-24
• 第三部分 構(gòu)建質(zhì)粒上調(diào)TFAP2α表達(dá)及對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系增殖能力的影響24-32
• 1. 材料與方法24-28
• 2. 結(jié)果28-31
• 3. 小結(jié)31-32
• 討論及結(jié)論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 文獻(xiàn)綜述37-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 英文略縮詞表46-47
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文47-48
• 致謝48

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本文編號：824840