本文關(guān)鍵詞：甲基蓮心堿抑制人卵巢癌細(xì)胞生長的分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 甲基蓮心堿 自噬 p38 MAPK JNK 卵巢癌細(xì)胞

【摘要】：卵巢癌是一種多發(fā)的的婦科惡性腫瘤,由于卵巢癌早期癥狀不明顯,約70%的患者在確診時(shí)已為晚期,且復(fù)發(fā)率與耐藥性高,導(dǎo)致卵巢癌致死率非常高,居?jì)D科腫瘤之首,患者的5年生存率僅30%,對女性健康造成了嚴(yán)重威脅。當(dāng)前,臨床上大多采取手術(shù)結(jié)合鉑類、紫杉醇等手段對卵巢癌進(jìn)行治療。但是,目前使用的抗腫瘤藥物的毒、副作用較大,而且腫瘤細(xì)胞容易產(chǎn)生藥物抗性,因此,從自然界天然存在的化合物中尋找高效、低毒的抗腫瘤藥物對卵巢癌的臨床治療具有重大意義。甲基蓮心堿是提取自蓮子心的一種雙芐基異喹啉類生物堿。具有抗炎、抗氧化以及化療增敏等多種藥理功效,而且可以抵抗腫瘤細(xì)胞的耐藥性。近年來研究表明,甲基蓮心堿可通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞自噬及細(xì)胞凋亡抑制多種腫瘤細(xì)胞的體外增殖。自噬是細(xì)胞內(nèi)損傷或有害成分降解和再循環(huán)的關(guān)鍵機(jī)制之一,能夠調(diào)節(jié)新陳代謝及維持能量平衡。研究發(fā)現(xiàn),自噬具有雙重作用,不同細(xì)胞及不同刺激條件下,自噬發(fā)揮著促進(jìn)細(xì)胞存活或者促進(jìn)細(xì)胞死亡的雙重作用。一方面,自噬通過增強(qiáng)細(xì)胞的自我保護(hù)活動從而幫助細(xì)胞度過危機(jī),避免死亡；然而,過度的自噬不可逆轉(zhuǎn)最終引發(fā)細(xì)胞死亡。據(jù)報(bào)道,多種抗腫瘤因子通過誘導(dǎo)自噬而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。本課題組先前的結(jié)果表明,甲基蓮心堿可以顯著抑制人乳腺癌及成骨肉瘤細(xì)胞增殖,但是,甲基蓮心堿是否能抑制人卵巢癌細(xì)胞的生長及其可能的分子機(jī)制尚未見報(bào)道。探究甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞是否具有生長抑制作用及其具體的分子機(jī)理,對進(jìn)一步了解甲基蓮心堿的抗腫瘤機(jī)理和卵巢癌治療具有重要價(jià)值。為了探究甲基蓮心堿是否可以抑制人卵巢癌細(xì)胞的增殖及其作用機(jī)制,我們開展了以下研究工作：1. 甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞及正常輸卵管上皮細(xì)胞的生長抑制作用為了明確甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞及正常輸卵管上皮細(xì)胞的生長抑制作用,我們選取人卵巢癌細(xì)胞A2780、H08910、SKOV3與正常輸卵管上皮細(xì)胞FTE187進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過噻唑藍(lán)比色法和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)分析甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞及FTE187細(xì)胞的生長抑制效果。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：甲基蓮心堿對多種人卵巢癌細(xì)胞均具有顯著的生長抑制作用并具有濃度與時(shí)間依賴性。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明卵巢癌細(xì)胞的克隆形成能力隨著甲基蓮心堿作用濃度的增加逐漸降低,與對照組相比有顯著差異,該結(jié)果進(jìn)一步證明了甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞的生長抑制效果。甲基蓮心堿對正常輸卵管上皮細(xì)胞FTE187的毒性顯著低于卵巢癌細(xì)胞。2.甲基蓮心堿誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞周期阻滯及機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯是許多抗腫瘤藥物抑制腫瘤生長的機(jī)制之一。為此,我們采用流式細(xì)胞儀及Western Blotting等手段探究甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞周期的作用及其分子機(jī)制。(1)甲基蓮心堿處理A2780細(xì)胞后檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)： G1期細(xì)胞所占百分比隨著甲基蓮心堿濃度的增加而逐漸升高,從55.1%(對照)分別增加到56.6%(5 μ M)和79.5(10 μM),S期細(xì)胞所占的百分比則隨著甲基蓮心堿濃度的增加而逐漸降低,分別為30.97%(對照),31.96%(5 u M)17.92%(10 μ M)。(2)Western Blotting測定甲基蓮心堿作用于A2780細(xì)胞后G1期阻滯相關(guān)蛋白的表達(dá)情況顯示：甲基蓮心堿處理A2780細(xì)胞后p21與p27的表達(dá)顯著升高,而cyclinDl的表達(dá)明顯降低,cyclinE表達(dá)則沒有明顯變化。這說明甲基蓮心堿通過增強(qiáng)p21與p27的表達(dá)而抑制cyclinDl的表達(dá)導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞A2780 G1期阻滯,與cyclinE無關(guān)。3.甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞自噬和凋亡的作用及其分子機(jī)制誘導(dǎo)自噬及凋亡是抗腫瘤藥物抑制腫瘤生長的又一機(jī)制。為明確甲基蓮心堿是否能夠誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞自噬及相應(yīng)的分子機(jī)制,我們首先采用GFP-LC3單熒光體系示蹤法及透射電鏡觀察法對甲基蓮心堿處理后卵巢癌細(xì)胞的自噬情況進(jìn)行檢測；然后通過Western Blotting檢測了AKT、p38 MAPK、JNK1/2、mTOR信號通路及自噬相關(guān)基因的LC3 Ⅱ、Atg7等蛋白的變化；此外,采用Annexin V-PI雙染法檢測甲基蓮心堿處理后卵巢癌細(xì)胞A2780的凋亡情況。(1)甲基蓮心堿能夠?qū)е侣殉舶┘?xì)胞自噬。GFP-LC3單熒光體系示蹤法及Western Blotting檢測甲基蓮心堿對卵巢癌細(xì)胞A2780自噬的影響。結(jié)果顯示：甲基蓮心堿能夠誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞A2780發(fā)生自噬,且自噬小體聚集數(shù)量及自噬相關(guān)蛋白Atg7、LC3 Ⅱ的表達(dá)水平隨藥物劑量的增大而升高。(2)甲基蓮心堿誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞自噬與mTOR信號通路相關(guān)。Western Blotting檢測p70S6K、4EBP1的磷酸化水平,結(jié)果顯示：p-p70S6K、p4EBP1表達(dá)水平隨藥物濃度的升高而降低,且呈濃度和時(shí)間依賴性。提示甲基蓮心堿誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞自噬與mTOR信號通路相關(guān)。(3)甲基蓮心堿誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞自噬依賴于p38 MAPK和JNK1/2信號通路的激活。Western Blotting檢測甲基蓮心堿處理后p38 MAPK、JNK及AKT等信號通路的變化情況。結(jié)果顯示：10μM甲基蓮心堿能夠明顯激活p38 MAPK和JNK1/2通路,AKT通路則沒有顯著變化。這提示p38 MAPK和JNK1/2可能參與甲基蓮心堿誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬的發(fā)生過程。為了探究p38 MAPK與JNK1/2信號通路在甲基蓮心堿誘導(dǎo)的自噬中是否發(fā)揮作用,分別用p38 MAPK抑制劑SB203580和JNK1/2抑制劑SP600125抑制A2780細(xì)胞p38 MAPK激酶活性和JNK1/2激酶活性后,檢測自噬相關(guān)蛋白LC3 Ⅱ的表達(dá)水平。結(jié)果表明：相對于對照組,SB203580和SP600125均能顯著抑制甲基蓮心堿誘導(dǎo)的LC3 Ⅱ的積累,這提示甲基蓮心堿誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞自噬依賴于p38 MAPK和JNK1/2的激活。(4)Annexin V-PI雙染法測定甲基蓮心堿處理A2780后的凋亡情況。結(jié)果表明：隨著甲基蓮心堿濃度的增加,細(xì)胞的凋亡率逐漸升高,且具有濃度依賴性。綜上所述,我們研究發(fā)現(xiàn),甲基蓮心堿可以明顯抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖而對正常細(xì)胞毒性較��；甲基蓮心堿通過增強(qiáng)p21、p27的表達(dá)及抑制cyclinDl的表達(dá)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞G1期阻滯；更為重要的是,我們發(fā)現(xiàn)甲基蓮心堿可誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡,除了mTOR通路的失活,甲基蓮心堿引發(fā)的卵巢癌細(xì)胞自噬也依賴于p38 MAPK和JNK1/2通路的激活。
【關(guān)鍵詞】：甲基蓮心堿 自噬 p38 MAPK JNK 卵巢癌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 符號說明14-16
• 前言16-20
• 材料和方法20-37
• 結(jié)果37-52
• 討論52-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64-65
• 碩士期間發(fā)表論文和參與課題情況65-66
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表66

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王嘉陵,農(nóng)藝,江明性;蓮心堿抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用的研究[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1992年05期

2 許磊,姚崇舜,陳濟(jì)民;蓮心堿的研究概況[J];中草藥;2000年12期

3 壽國香,周軍,安彥,劉冰;蓮心堿及蓮心堿高氯酸鹽初步穩(wěn)定性考察及蓮子心不同部位中蓮心堿的含量測定[J];中草藥;2002年07期

4 黃先菊,羅順德,楊健;蓮心堿對離體豬冠狀動脈條收縮性能的影響[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2002年03期

5 朱兵,雷鵬,劉韶,李新中;拮新康膠囊中甲基蓮心堿的含量測定研究[J];湖南中醫(yī)雜志;2005年03期

6 余萬桂;張道明;劉蓮;黃先菊;賀尚榮;鄧德明;;蓮心堿對大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用[J];長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版);2006年09期

7 黃穎;趙立波;李帥;劉萍;胡本容;王嘉陵;向繼洲;;甲基蓮心堿在大鼠肝臟中的代謝產(chǎn)物及其途徑[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2007年10期

8 張會杰;熊玉卿;;甲基蓮心堿小鼠腦內(nèi)分布的研究[J];中國藥師;2010年01期

9 童國新;李曉春;王寧夫;來蕾;冷建杭;;甲基蓮心堿對人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞增殖及表型調(diào)節(jié)的影響[J];中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2011年05期

10 李琴;商晶;;甲基蓮心堿的藥理作用研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2012年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王艷強(qiáng);姜忠義;吳洪;;膜法用于提純蓮心堿實(shí)驗(yàn)研究[A];第九屆全國化學(xué)工藝學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

2 周雅君;向繼洲;劉慧;馬嶸;明章銀;;甲基蓮心堿對血小板聚集的抑制及解聚作用[A];中國藥理學(xué)會第十一次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2011年

3 陳俊;陳方;劉繼紅;王濤;楊俊;;甲基蓮心堿對新西蘭白兔陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

4 馮友梅;馮霞;周潔;陳娟;鄭偉;袁萍;劉琳;;甲基蓮心堿對動脈粥樣硬化相關(guān)病變的影響及其機(jī)制研究[A];2004全國血脂分析及其臨床應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會、第七屆全國脂蛋白學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

5 王雅琴;陳少隆;陽韜;陳永平;林鐲;;甲基蓮心堿對肝星狀細(xì)胞抑制增殖及促凋亡作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十六次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

6 宋金春;李娟;葉鵬;;正交試驗(yàn)法優(yōu)選蓮子心中甲基蓮心堿提取工藝的研究[A];2010年全國中藥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 劉繼紅;陳俊;肖恒軍;王濤;陳智;孫成亮;劉波;葉章群;;甲基蓮心堿、葛根素和人參皂苷Rb1對離體兔陰莖海綿體平滑肌松馳作用[A];21世紀(jì)男科學(xué)——中華醫(yī)學(xué)會第五次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

8 馮霞;;甲基蓮心堿對動脈粥樣硬化相關(guān)病變的影響及其機(jī)制研究[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第七屆第十四次學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2003年

9 林秀梅;謝兆霞;秦群;;甲基蓮心堿、紅霉素對K562/A02細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 王雅琴;陳永平;陳黎黎;宋梅;陳少隆;林鐲;沈宇娟;劉真真;戴春蕾;;甲基蓮心堿對TGF-β1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞增殖及gremlin表達(dá)的影響[A];2012年浙江省醫(yī)學(xué)會肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會暨浙江省感染科醫(yī)師學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 黃先菊 羅順德;蓮心堿舒主動脈作用與鈣離子拮抗有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

2 空軍總醫(yī)院營養(yǎng)科主任 劉東莉;有些食物可助睡眠[N];保健時(shí)報(bào);2008年

3 張亮;食有道 整夜安眠[N];保健時(shí)報(bào);2005年

4 石太能;有助睡眠的食物[N];檢察日報(bào);2000年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 李曉春;甲基蓮心堿對人血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞生長的影響及機(jī)制初探[D];浙江大學(xué);2010年

2 李桂林;甲基蓮心堿對糖尿病血管內(nèi)皮細(xì)胞和交感神經(jīng)節(jié)損傷的作用及機(jī)理研究[D];南昌大學(xué);2011年

3 劉招艦;小檗堿和甲基蓮心堿對人成骨肉瘤細(xì)胞的生長抑制作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2009年

4 張錫宇;甲基蓮心堿誘導(dǎo)人成骨肉瘤細(xì)胞G1期停滯的分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

5 秦群;甲基蓮心堿逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞對STI571耐藥及機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2011年

6 田野;五個(gè)雙芐基異喹啉生物堿與BCRP的相互作用以及CYP3A5對其代謝激活作用[D];浙江大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張志新;異蓮心堿，，蓮心堿和甲基蓮心堿的抗癡呆作用[D];華中科技大學(xué);2010年

2 許立美;甲基蓮心堿抑制人卵巢癌細(xì)胞生長的分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

3 沈琦;甲基蓮心堿和類似物體外轉(zhuǎn)運(yùn)及其反應(yīng)性代謝物的細(xì)胞毒性研究[D];浙江大學(xué);2014年

4 閆亓;蓮心堿對膀胱癌細(xì)胞增殖的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2014年

5 周靜;蓮心堿抑制自噬降解及調(diào)節(jié)線粒體分裂增敏乳腺癌化療的分子機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 許磊;蓮心堿的藥物動力學(xué)及生物藥劑學(xué)研究[D];沈陽藥科大學(xué);2001年

7 阮歌;甲基蓮心堿增強(qiáng)吡柔比星抗腫瘤作用的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

8 李世強(qiáng);蓮心堿與葉綠素膜分離的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津大學(xué);2004年

9 徐燕輝;蓮心堿與葉綠素吸附—膜分離的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津大學(xué);2006年

10 張會杰;甲基蓮心堿的中樞轉(zhuǎn)運(yùn)與P-糖蛋白的調(diào)節(jié)作用[D];江西醫(yī)學(xué)院;2004年

本文編號：816445