發(fā)布時(shí)間：2017-09-08 16:46

  本文關(guān)鍵詞：云南宣威肺癌相關(guān)LncRNAs的初步篩選及表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： 云南宣威肺癌 長鏈非編碼RNA 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

【摘要】：背景和目的：在我國,云南宣威是肺癌的高發(fā)區(qū),以非小細(xì)胞肺癌為主。有資料顯示：在云南宣威,男性肺癌的平均死亡率為98.10/10萬,女性肺癌的平均死亡率為83.28/10萬。肺癌的發(fā)生一般是城市高于農(nóng)村,而在云南宣威,不吸煙的女性肺癌死亡率也很高,能達(dá)到120/10萬,且最高的能達(dá)到400/10萬,是中國其它地區(qū)的20倍,居世界之首。造成宣威肺癌高死亡率的主要原因是患者確診時(shí)已處于癌癥晚期階段,腫瘤細(xì)胞已發(fā)生了侵襲和轉(zhuǎn)移,缺乏有效的治療措施。因此,對宣威肺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究尤為重要。本課題首先對LncRNAs的結(jié)構(gòu)、功能、機(jī)制進(jìn)行分析,然后應(yīng)用LncRNAs芯片對云南宣威肺癌組織中差異表達(dá)的LncRNAs進(jìn)行篩選分析,接著應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證基因芯片篩選的結(jié)果,了解其在云南宣威肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為進(jìn)一步深入研究宣威肺癌的發(fā)病機(jī)制,為早期診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)。研究方法：1.利用LncRNAs芯片(AGI_LncRNAs+mRNA_4×180k)篩選5對云南宣威肺癌癌組織及癌旁正常組織中表達(dá)差異的LncRNAs和mRNA,認(rèn)為差異水平≥2的是有意義的,篩選出有差異表達(dá)的基因；2.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-PCR)對篩選出的關(guān)鍵LncRNAs分子的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證,并探討其在宣威肺癌組織中的表達(dá)水平與癌旁正常組織中的相關(guān)性；3.對患者臨床病例資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,研究篩選出的關(guān)鍵LncRNAs分子的表達(dá)差異水平與患者的性別、年齡、吸煙、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和組織學(xué)類型等相關(guān)性。結(jié)果：1.以LncRNAs芯片結(jié)果為基礎(chǔ),在云南宣威肺癌中獲得了1544個(gè)異常表達(dá)的LncRNAs和1997個(gè)mRNA,根據(jù)差異倍數(shù)≥2和原始信號值≥50,篩選出367個(gè)異常表達(dá)的LncRNAs,其中表達(dá)上調(diào)的有133個(gè),表達(dá)下調(diào)的有234個(gè)；篩選出1038個(gè)異常表達(dá)的LncRNAs,其中表達(dá)上調(diào)的有269個(gè),表達(dá)下調(diào)的有769個(gè)。2.根據(jù)LncRNAs和mRNA共表達(dá)分析,再結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),篩選出6個(gè)具有研究價(jià)值的LncRNAs分子,其中表達(dá)上調(diào)的有SGOL1-AS1、SNHG4和PVT1：表達(dá)下調(diào)的有FENDRR、H19和PWRN1。3.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real-time quantitative PCR, RT-PCR)技術(shù)檢測篩選出的6個(gè)LncRNAs在云南宣威肺癌癌組織及癌旁組織中的表達(dá),結(jié)果顯示在宣威肺癌組織中SGOL1-AS1、SNHG4、PVT1表達(dá)上調(diào),FENDRR、H19、PWRN1表達(dá)下調(diào),與芯片結(jié)果相符,說明芯片結(jié)果可靠。4. SGOL1-AS1、SNHG4、PVT1、FENDRR、H19等與患者臨床病理特征無明顯相關(guān)性,而PWRN1與患者腫塊大小有一定的相關(guān)性。結(jié)論：1.利用LncRNAs芯片發(fā)現(xiàn)云南宣威肺癌組織中確實(shí)存在大量表達(dá)上調(diào)或者下調(diào)的LncRNAs。2.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-PCR)技術(shù)對其中的六個(gè)LncRNAs進(jìn)行驗(yàn)證,該結(jié)果與基因芯片結(jié)果一致,為進(jìn)一步研究LncRNAs與云南宣威肺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供了基礎(chǔ)。3.對患者臨床病例資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示6個(gè)LncRNAs分子的表達(dá)差異水平與患者的性別、年齡、吸煙、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)類型無相關(guān)性。而PWRN1的表達(dá)差異水平與患者腫塊大小有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：云南宣威肺癌 長鏈非編碼RNA 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-18
• 第一部分18-33
• 1、實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2、實(shí)驗(yàn)方法20-23
• 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-30
• 4、討論30-33
• 第二部分33-56
• 1、實(shí)驗(yàn)材料33-35
• 2、實(shí)驗(yàn)方法35-42
• 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-52
• 4、討論52-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 文獻(xiàn)綜述65-76
• 參考文獻(xiàn)73-76
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況76-77
• 附件77-79
• 致謝79

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 董志偉;喬友林;李連弟;王國清;張思維;孟祥柱;李紀(jì)賓;;中國癌癥高發(fā)現(xiàn)場報(bào)告[J];中國腫瘤;2009年01期

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本文編號：815152