本文關(guān)鍵詞：線粒體自噬在紅系白血病細胞中的作用

  更多相關(guān)文章： ATG7 經(jīng)典自噬 RAB9A 非經(jīng)典自噬 線粒體自噬

【摘要】：目的:研究紅系白血病細胞中,是否存在非經(jīng)典自噬,以及非經(jīng)典自噬在紅系白血病細胞生長、分化和應(yīng)激反應(yīng)方面的作用,闡明其與經(jīng)典自噬之間的關(guān)系,及其在線粒體降解過程中的作用,為理解白血病細胞的惡性生長優(yōu)勢提供細胞學(xué)新依據(jù)。方法:(1)通過使用CRISPR/Cas9技術(shù),構(gòu)建Atg7敲除的K562細胞系。(2)通過臺盼蘭染色細胞計數(shù)、Annexin V/PI流式染色(Flow Cytometry,FCM)和細胞集落分析K562細胞生長、增殖和分化能力的變化。(3)通過透射電鏡技術(shù)TEM和線粒體染色流式分析Atg7-/-的K562細胞中線粒體、ROS的變化情況,同時確認(rèn)在Atg7缺失的情況下,細胞中是否存在自噬體狀結(jié)構(gòu)。(4)使用線粒體自噬的誘導(dǎo)劑CCCP處理野生型和Atg7-/-K562細胞,通過線粒體流式染色和Western Blot技術(shù)檢測細胞中線粒體數(shù)量的變化情況。(5)通過Western Blot技術(shù)檢測非經(jīng)典自噬的關(guān)鍵蛋白的表達量,分析Atg7-/-K562細胞中非經(jīng)典自噬過程的狀態(tài)。(6)使用非經(jīng)典自噬抑制劑BFA和敲低非經(jīng)典自噬關(guān)鍵基因RAB9A,分析當(dāng)兩種自噬同時受到抑制的情況下,線粒體自噬的發(fā)生情況。(7)使用Comet Assay和Western Blot技術(shù)檢測在細胞在經(jīng)歷電離輻射的情況下,兩種自噬在DNA修復(fù)過程中的作用。結(jié)果:(1)成功使用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Atg7-/-K562細胞系。(2)Atg7的缺失會導(dǎo)致K562生長速度變慢,細胞周期阻滯在G2/M期以及分化潛能降低,但不會改變細胞中線粒體數(shù)量和ROS的水平。(3)在Atg7-/-K562細胞中,能夠觀察到雙層膜包裹的自噬體狀結(jié)構(gòu),同時,Atg7的缺失會導(dǎo)致非經(jīng)典自噬通路的增強。(4)CCCP誘導(dǎo)的線粒體自噬的發(fā)生并不依賴于Atg7。(5)加入非經(jīng)典自噬抑制劑BFA、敲低非經(jīng)典自噬關(guān)鍵基因RAB9A,線粒體自噬不能正常的發(fā)生。(6)同時抑制經(jīng)典自噬和非經(jīng)典自噬,K562細胞在代謝壓力的情況下,表現(xiàn)為細胞凋亡、ROS水平升高。(7)非經(jīng)典自噬可能通過RAD50在DNA修復(fù)過程中發(fā)揮作用。結(jié)論:在紅系白血病細胞系K562中,同時存在經(jīng)典自噬和非經(jīng)典自噬,當(dāng)經(jīng)典自噬被阻斷后,非經(jīng)典自噬起到一定程度的補償作用。但同時,細胞內(nèi)的一些重要事件,如線粒體自噬的發(fā)生主要通過非經(jīng)典自噬。本研究從自噬的視角,理解白血病細胞的生長優(yōu)勢,為白血病的臨床治療提供了數(shù)據(jù)參考。
【關(guān)鍵詞】：ATG7 經(jīng)典自噬 RAB9A 非經(jīng)典自噬 線粒體自噬
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-21
• 一、材料11-13
• 二、方法13-21
• 實驗結(jié)果21-32
• 一、敲除ATG7的K562細胞系構(gòu)建21-22
• 二、ATG7敲除引起K562細胞G_2/M周期阻滯和分化能力減弱22-24
• 三、線粒體自噬的發(fā)生不依賴于ATG724-25
• 四、線粒體降解依賴于非經(jīng)典型自噬25-30
• 五、非經(jīng)典型自噬夠控制ROS水平，降低細胞凋亡率，，促進DNA輻射損傷修復(fù)30-32
• 討論32-34
• 參考文獻34-39
• 綜述：非經(jīng)典自噬及線粒體自噬的研究進展39-47
• 參考文獻43-47
• 碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文47-48
• 附錄48-49
• 中英文縮略詞匯表49-51
• 致謝51-52

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