發(fā)布時(shí)間：2017-09-07 22:10

  本文關(guān)鍵詞：Wnt通路腫瘤抑制基因去甲基化在黑樹莓多酚防治結(jié)直腸癌中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 結(jié)直腸癌 黑樹莓多酚 甲基化 SFRP2 WIF1

【摘要】：結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一,在所有癌癥中結(jié)直腸癌的全球病發(fā)率位居第三。腫瘤的發(fā)生已被普遍認(rèn)為是由于遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)層面上的改變而引起的。DNA甲基化是最普遍研究的表觀修飾現(xiàn)象,并且通過修飾CpG二核苷酸阻止轉(zhuǎn)錄復(fù)合物結(jié)合到DNA上,進(jìn)而沉默功能基因。并且DNA甲基化是可逆過程,可以通過作用于DNA甲基化的可逆過程逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌腫瘤抑制基因啟動子高甲基化狀態(tài)。目前認(rèn)為靶向蛋白分子藥物的開發(fā)是對結(jié)直腸癌治療的新研究方向。黑樹莓(BRB)是富含鞣花酸、花青素等酚酸類成分的天然水果。前期研究發(fā)現(xiàn),BRB凍干粉對于結(jié)直腸腫瘤具有良好的預(yù)防作用。本研究主要應(yīng)用現(xiàn)代分離方法制備純化獲得BRB多酚,將其分別處理AOM+DSS誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌腫瘤小鼠動物模型及人類結(jié)直腸癌細(xì)胞,考察Wnt相關(guān)腫瘤抑制基因的表觀遺傳異常逆轉(zhuǎn)在其腫瘤預(yù)防中的重要作用及對人類結(jié)直腸細(xì)胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移的信號通路調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明：(1)在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,黑樹莓多酚逆轉(zhuǎn)Wnt通路腫瘤抑制基因WIF1、SFRP2的高甲基化狀態(tài),并上調(diào)其蛋白水平進(jìn)而下調(diào)Wnt通路關(guān)鍵因子β-catenin的蛋白水平。與此同時(shí),黑樹莓多酚下調(diào)調(diào)控甲基化的DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶DNMT1、 DNMT3A、 DNMT3B的表達(dá)。因此,結(jié)果顯示黑樹莓多酚防治結(jié)直腸癌的表觀遺傳機(jī)制是通過降低DNMTs的蛋白表達(dá)抑制腫瘤抑制基因DNA甲基化過程,阻止功能基因SFRP2、 WIF1沉默。通過其高表達(dá)抑制Wnt/β-catenin信號通路進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖達(dá)到結(jié)直腸癌防治作用。(2)在體外實(shí)驗(yàn)中,結(jié)果顯示,黑樹莓多酚抑制人類結(jié)直腸癌細(xì)胞LoVo、 HCT-116的增殖。逆轉(zhuǎn)Wnt通路腫瘤抑制基因WIF1、SFRP2的高甲基化狀態(tài),并上調(diào)其蛋白水平進(jìn)而下調(diào)Wnt通路關(guān)鍵因子β-catenin的蛋白水平進(jìn)而抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。黑樹莓多酚下調(diào)細(xì)胞周期蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶,上調(diào)抗凋亡蛋白、鈣黏蛋白表達(dá)進(jìn)而抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)移促進(jìn)其凋亡。綜上所述,黑樹莓多酚抑制結(jié)腸癌作用機(jī)制之一是通過下調(diào)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的蛋白水平逆轉(zhuǎn)腫瘤抑制基因SFRP2、WIF1啟動子區(qū)域的高甲基化狀態(tài),使SFRP2、WIF1蛋白水平升高抑制降低β-catenin蛋白表達(dá)進(jìn)而抑制Wnt/β-catenin信號通路最終達(dá)到降低結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的作用。此外,黑樹莓多酚通過作用于凋亡、轉(zhuǎn)移等其他信號通路關(guān)鍵蛋白發(fā)揮降低結(jié)腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移的活性�；谏鲜龅膶�(shí)驗(yàn)結(jié)果,黑樹莓多酚的腫瘤預(yù)防作用及機(jī)制的研究具有重要的意義,黑樹莓多酚作為一種新型制劑在防治結(jié)直腸癌的原發(fā)上具有很大的潛能,從長遠(yuǎn)來看,具有更好的臨床應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 黑樹莓多酚 甲基化 SFRP2 WIF1
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 引言13-22
• 0.1 結(jié)直腸癌13-14
• 0.2 黑樹莓多酚14-15
• 0.3 表觀遺傳與腫瘤15-17
• 0.4 天然化合物與腫瘤表觀遺傳學(xué)17-20
• 0.5 研究目的及意義20-22
• 第1章 黑樹莓多酚對結(jié)腸癌細(xì)胞存活和生長的影響22-27
• 1.1 引言22
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 1.2.1 細(xì)胞株、生化試劑和耗材22
• 1.2.2 主要儀器設(shè)備22-23
• 1.2.3 試劑的配制23
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟23-25
• 1.3.1 HCT-116和LoVo細(xì)胞的培養(yǎng)23-25
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論25-26
• 1.5 結(jié)論26-27
• 第2章 黑樹莓多酚抑制結(jié)腸癌的表觀機(jī)制研究27-44
• 2.1 引言27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料27-31
• 2.2.1 細(xì)胞系、動物模型、生化試劑和耗材27-29
• 2.2.2 主要儀器設(shè)備29
• 2.2.3 試劑的配制29-31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟31-38
• 2.3.1 潰瘍性結(jié)腸炎癌變小鼠模型建立31-32
• 2.3.2 小鼠腸上皮細(xì)胞的獲取32
• 2.3.3 HCT-116和LoVo細(xì)胞的處理和收集32
• 2.3.4 腸上皮細(xì)胞及體外培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA的提取32-33
• 2.3.5 甲基化特異性PCR(MSP)33-35
• 2.3.6 腸上皮細(xì)胞及體外培養(yǎng)細(xì)胞總蛋白質(zhì)的提取35
• 2.3.7 細(xì)胞總蛋白質(zhì)濃度的測定(BCA法)35-36
• 2.3.8 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)36-38
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論38-43
• 2.4.1 黑樹莓多酚上調(diào)結(jié)腸癌腫瘤小鼠腸上皮細(xì)胞SFRP2表達(dá)38
• 2.4.2 黑樹莓多酚上調(diào)HCT-116和LoVo結(jié)腸癌細(xì)胞SFRP2、WIF1表達(dá)38-39
• 2.4.3 黑樹莓多酚下調(diào)結(jié)腸癌腫瘤小鼠腸上皮細(xì)胞Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵因子39-40
• 2.4.4 黑樹莓多酚下調(diào)LoVo和HCT-116結(jié)腸癌細(xì)胞Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵因子40
• 2.4.5 黑樹莓多酚下調(diào)結(jié)腸癌腫瘤小鼠腸上皮細(xì)胞SFRP2啟動子甲基化水平40-41
• 2.4.6 黑樹莓多酚下調(diào)HCT-116和LoVo細(xì)胞SFRP2、WIF1啟動子甲基化水平41-42
• 2.4.7 黑樹莓多酚下調(diào)結(jié)腸癌腫瘤小鼠腸上皮細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)42-43
• 2.5 結(jié)論43-44
• 第3章 黑樹莓多酚抑制結(jié)腸癌生長、轉(zhuǎn)移和凋亡作用的潛在機(jī)制研究44-49
• 3.1 引言44
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料44-45
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法45
• 3.3.1 HCT-116和LoVo細(xì)胞的處理和收集45
• 3.3.2 體外培養(yǎng)細(xì)胞總蛋白質(zhì)的提取45
• 3.3.3 細(xì)胞總蛋白質(zhì)濃度的測定(BCA法)45
• 3.3.4 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)45
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論45-48
• 3.4.1 黑樹莓多酚對HCT-116和LoVo細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響45-46
• 3.4.2 黑樹莓多酚對HCT-116和LoVo細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響46-47
• 3.4.3 黑樹莓多酚對HCT-116和LoVo細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響47-48
• 3.5 結(jié)論48-49
• 第4章 結(jié)論與展望49-51
• 致謝51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及參加科研情況59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 汪建平;;重視結(jié)直腸癌流行病學(xué)研究[J];中國實(shí)用外科雜志;2013年08期

2 朱春榮;李大鵬;熊峰;朱彥博;宋樂冬;陶敏;;貝伐珠單抗聯(lián)合FOLFIRI方案治療晚期轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的臨床觀察[J];中國腫瘤臨床;2012年19期

3 代珍;鄭榮壽;鄒小農(nóng);張思維;曾紅梅;李霓;陳萬青;;中國結(jié)直腸癌發(fā)病趨勢分析和預(yù)測[J];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2012年07期

4 ;Curcumin,a potent anti-tumor reagent,is a novel histone deacetylase inhibitor regulating B-NHL cell line Raji proliferation[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年05期

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本文編號：810173