本文關(guān)鍵詞：MUC1對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：目的：本課題采用MUC1表達(dá)陰性的結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116,通過慢病毒轉(zhuǎn)染,獲得穩(wěn)定表達(dá)MUC1的HCT116細(xì)胞株,觀察MUC1對細(xì)胞增殖、侵襲及化療敏感性的影響,為以MUC1為靶點的結(jié)腸癌治療提供實驗室依據(jù)。方法：1.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)MUC1的HCT116細(xì)胞株：(1)MUC1慢病毒載體的構(gòu)建：通過Genebank查詢?nèi)薓UC1基因,選取恰當(dāng)?shù)馁|(zhì)粒,PCR擴(kuò)增目的基因,將目的基因與慢病毒質(zhì)粒雙酶切后構(gòu)建重組質(zhì)粒并鑒定,之后轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,并測定病毒滴度。(2)慢病毒轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞,嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。(3)采用半定量RT-PCR、Western Blot進(jìn)行MUC1表達(dá)的鑒定。2.MUC1對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響：(1)實驗分組：MUC1病毒組和空病毒組。(2)CCK實驗和軟瓊脂克隆形成實驗檢測兩組細(xì)胞的增殖能力。(3) Trans well侵襲實驗檢測兩組細(xì)胞的侵襲能力。3.MUC1對奧沙利鉑敏感性的影響：MTT實驗檢測兩組細(xì)胞對奧沙利鉑的敏感性,流式細(xì)胞儀檢測奧沙鉑處理后兩組細(xì)胞凋亡率,酶底物法檢測奧沙利鉑處理后兩組細(xì)胞Caspas e-3活性水平。結(jié)果：1.獲得穩(wěn)定表達(dá)MUC1的HCT116細(xì)胞株。2.兩組細(xì)胞貼壁生長無差異。MUC1病毒組細(xì)胞軟克隆形成數(shù)與空病毒組相比有明顯差異[(26.0±2.31)vs(5.67±1.45) (P0.05)]。3.MUC1病毒組穿過小室纖維素膜的細(xì)胞數(shù)與空病毒組相比有明顯差異[(27.3±4.41)vs(81.0±8.14) (P0.05)]。4.兩組細(xì)胞奧沙利鉑作用24h后IC50分別為：空病毒組ICso(14.27±0.25) ug/mL, MUC1病毒組IC50(26.03±0.20) ug/mL。奧沙利鉑(5ug/mL)處理細(xì)胞36h后,流式細(xì)胞儀檢測兩組細(xì)胞的凋亡,凋亡率分別為(26.6±1.22),(18.5±1.44)(P0.05)；奧沙利鉑(5ug/mL)處理細(xì)胞36h后,酶底物反應(yīng)法檢測兩組細(xì)胞Caspase-3活性,兩組細(xì)胞Caspase-3(U)分別為：(16.56±0.73),(7.110±0.49)(P0.05)。結(jié)論：轉(zhuǎn)染MUC1后細(xì)胞的軟瓊脂克隆形成能力明顯增高、侵襲能力增強以及對奧沙利鉑的化療敏感性降低。初步探討MUC1耐藥機(jī)制發(fā)現(xiàn)可能與Caspase-3活性相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：MUC1 結(jié)腸癌 增殖 侵襲 化療敏感性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-21
• 2 結(jié)果21-27
• 3 討論27-30
• 全文結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 文獻(xiàn)綜述33-46
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 致謝46-47
• 碩士期間發(fā)表的論文47

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本文編號：807321