本文關(guān)鍵詞：GP73對(duì)肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞系增殖和轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究

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【摘要】：目的高爾基體磷酸化蛋白2 (GOLPH2/GP73)是一種在肝癌細(xì)胞中高表達(dá)的高爾基體膜蛋白,作為一種精準(zhǔn)的腫瘤標(biāo)志物,被用于指示肝腫瘤的發(fā)病進(jìn)程。雖已有報(bào)道指出GP73和肝癌增殖有相關(guān)性,但具體機(jī)制仍不清楚。本研究擬闡述GP73參與的肝細(xì)胞肝癌增殖及遷移和侵襲過(guò)程的具體調(diào)控機(jī)制。方法1.利用GP73特異性siRNA沉默HepG2、SMMC-7721以及Huh7細(xì)胞系的GP73基因表達(dá)。2.采用MTS、軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)對(duì)三種肝細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系增殖水平進(jìn)行檢測(cè),并通過(guò)移植瘤抑制實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步在體內(nèi)證明干擾GP73對(duì)腫瘤增殖的影響。3.通過(guò)免疫印跡測(cè)定增殖和細(xì)胞周期信號(hào)相關(guān)通路蛋白,并使用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期。4.通過(guò)Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞免疫熒光和免疫印跡測(cè)定GP73對(duì)腫瘤遷移和侵襲的影響以及對(duì)N-鈣粘蛋白和E-鈣粘蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果1.干擾GP73會(huì)降低肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞體外和體內(nèi)增殖。2.干擾GP73會(huì)降低肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞中p-Rb表達(dá)量。3.干擾GP73對(duì)肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞的細(xì)胞周期無(wú)影響。4.干擾GP73會(huì)降低腫瘤遷移和侵襲能力,并上調(diào)N-鈣粘蛋白和E-鈣粘蛋白的表達(dá)量。結(jié)論GP73可通過(guò)調(diào)控p-Rb、N-鈣粘蛋白和E-鈣粘蛋白的表達(dá)量,促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞遷移和侵襲,從而進(jìn)一步影響細(xì)胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：高爾基體磷酸化蛋白2 肝細(xì)胞肝癌 小干擾RNA 細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移 腫瘤標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞9-15
• 第1章 引言15-19
• 1.1 研究背景15-17
• 1.2 研究目標(biāo)17
• 1.3 主要研究?jī)?nèi)容17-19
• 第2章 材料與方法19-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-34
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-53
• 3.1 GP73在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)量以及干擾效率的驗(yàn)證34-36
• 3.1.1 GP73在肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá)34-35
• 3.1.2 GP73特異性siRNA對(duì)細(xì)胞內(nèi)GP73轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平的抑制35-36
• 3.2 干擾GP73抑制細(xì)胞體外增殖36-39
• 3.2.1 MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明干擾GP73抑制細(xì)胞體外增殖36-37
• 3.2.2 軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明干擾GP73抑制細(xì)胞體外增殖37-39
• 3.3 干擾GP73抑制肝癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤增殖39-43
• 3.3.1 免疫組化結(jié)果表明化學(xué)修飾siRNA對(duì)裸鼠體內(nèi)移植瘤中GP73表達(dá)產(chǎn)生抑制作用39-40
• 3.3.2 活體干擾裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明干擾GP73抑制肝癌細(xì)胞皮下移植瘤增殖40-41
• 3.3.3 相關(guān)形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)指標(biāo)測(cè)定41-43
• 3.4 GP73對(duì)增殖相關(guān)信號(hào)通路和細(xì)胞周期的影響43-46
• 3.4.1 干擾GP73下調(diào)p-Rb的表達(dá)量43-44
• 3.4.2 干擾GP73對(duì)細(xì)胞周期分布無(wú)明顯影響44-46
• 3.5 干擾GP73抑制腫瘤遷移和侵襲并改變EMT相關(guān)分子表達(dá)46-52
• 3.5.1 Transwell實(shí)驗(yàn)表明干擾GP73抑制細(xì)胞體外遷移和侵襲46-48
• 3.5.2 干擾GP73上調(diào)N-cadherin和E-cadherin的表達(dá)量48-52
• 3.6 結(jié)論52-53
• 第4章 討論53-57
• 4.1 GP73對(duì)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響53-55
• 4.2 展望55-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 文獻(xiàn)綜述60-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 作者簡(jiǎn)介及攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果74

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本文編號(hào)：805651