發(fā)布時(shí)間：2017-09-06 19:13

  本文關(guān)鍵詞：宣威肺腺癌干細(xì)胞生物學(xué)特性的鑒定

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【摘要】：[目的]對(duì)前期流式細(xì)胞術(shù)分選并克隆化培養(yǎng)的SPs細(xì)胞進(jìn)行肺腺癌干細(xì)胞生物學(xué)特性的鑒定,同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)與“干性”之間有無關(guān)系。[方法]將前期分選出并克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞亞群分組：血清培養(yǎng)的細(xì)胞中SPs組包括長梭形的SPs-C11細(xì)胞與不規(guī)則多邊形的SPs-E8細(xì)胞;SPcm組包括不規(guī)則多邊形的SPcm-G10細(xì)胞與長梭形的SPcm-B10細(xì)胞。SPs-E8-tu為無血清組。對(duì)SPs亞群細(xì)胞進(jìn)行肺腺癌干細(xì)胞生物學(xué)特性的鑒定,分為體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩部分進(jìn)行。體外實(shí)驗(yàn)包括：1.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)蛋白分子,了解“干性”蛋白表達(dá)情況；2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各型細(xì)胞對(duì)BrdU的潴留能力,了解其分裂方式；3.采用免疫熒光法檢測(cè)肺干細(xì)胞蛋白SCGB1A1、proSP-C的表達(dá)情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)包括：4.檢測(cè)各型細(xì)胞對(duì)免疫缺陷小鼠的致瘤能力,以呈濃度梯度的細(xì)胞量接種于NOD/SCID小鼠皮下,觀察成瘤情況及致瘤的最小細(xì)胞數(shù)。5、SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。[結(jié)果]1.將細(xì)胞用熒光素標(biāo)記的抗體染色后,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析,血清培養(yǎng)的兩組細(xì)胞間各分子的表達(dá)情況均有不同,SPs-C11在Nanog, hTERT, CD34, CD221水平的表達(dá)明顯高于SPcm-B10細(xì)胞,兩兩比較均有顯著性差異,P0.01。SPs-E8在hTERT, CD221水平的表達(dá)明顯高于SPcm-G10, P0.01;但在其余2種蛋白的表達(dá)上無顯著性差異,P0.05。2. BrdU實(shí)驗(yàn)：兩組血清培養(yǎng)的細(xì)胞亞群中,SPs與SPcm細(xì)胞均為陰性表達(dá)。3.免疫熒光實(shí)驗(yàn)：在血清培養(yǎng)條件下,SPs-C11細(xì)胞肺干細(xì)胞分子標(biāo)記SCGB1A1、proSP-C的表達(dá)高于SPcm-B10,但 SPs-E8、SPcm-G10均為陰性表達(dá)；而無血清培養(yǎng)的SPs-E8-tu細(xì)胞表達(dá)的比例與強(qiáng)度又較血清培養(yǎng)下的SPs-C11明顯增高。4.裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)：血清培養(yǎng)的兩組細(xì)胞分別以1×107、2×107接種,SPs-C11與SPcm-B10的最小致瘤量均為1×107,但SPs-C11形成的腫瘤大于SPcm-B10;無血清培養(yǎng)的SPs-E8-tu細(xì)胞則以0.5×106接種,形成17×12×8mm3的巨大腫瘤組織。觀察至12周,除SPs-E8和SPcm-G10未能在接種部位出現(xiàn)包塊外,其余細(xì)胞均成功致瘤。處死小鼠取瘤,發(fā)現(xiàn)腫瘤形狀不規(guī)則,呈結(jié)節(jié)樣。病理顯示為肺腺癌。[結(jié)論]1.SPs細(xì)胞較SPcm細(xì)胞保留了較多的干細(xì)胞生物學(xué)特性,尤其是長梭形的SPs-C11亞群細(xì)胞,其高表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)蛋白Nanog、hTERT、CD34、CD221;但隨著傳代次數(shù)的增加,血清培養(yǎng)條件下SPs與SPcm均不同程度發(fā)生分化。2.細(xì)胞形態(tài)與“干性”無關(guān)。3.無血清培養(yǎng)條件較血清培養(yǎng)可較好的維持肺腺癌干細(xì)胞生物學(xué)特征。4.篩選到一株富含宣威肺腺癌干細(xì)胞的細(xì)胞亞群SPs-E8-tu。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤干細(xì)胞 宣威肺腺癌 分子標(biāo)志物 異種移植致瘤性
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略語表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 結(jié)果25-34
• 討論34-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述146-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 綜述250-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 碩士期間發(fā)表的文章60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 AN Songzhu Michael;DING Qiang;ZHANG Jie;XIE JingYi;LI LingSong;;Targeting stem cell signaling pathways for drug discovery:advances in the Notch and Wnt pathways[J];Science China(Life Sciences);2014年06期

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本文編號(hào)：804936