本文關(guān)鍵詞：IRF8對彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的生長調(diào)控研究

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【摘要】：目的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是成年人中最常見的淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤。DLBCL的高度異質(zhì)性給臨床治療及預(yù)后帶來挑戰(zhàn),因此研究DLBCL的分子病理對于DLBCL的個(gè)性化治療具有重要的臨床意義。干擾素調(diào)節(jié)因子8(interferon regulator factor 8,IRF8)對B細(xì)胞的生長發(fā)育有重要調(diào)節(jié)作用,但I(xiàn)RF8在DLBCL中的功能尚不明確。在我們的前期工作中,通過對數(shù)據(jù)庫的分析發(fā)現(xiàn)IRF8的mRNA表達(dá)水平和DLBCL病人的生存時(shí)間呈顯著負(fù)相關(guān),所以本研究旨在進(jìn)一步探索IRF8對DLBCL的影響,并深入研究其分子機(jī)制,希望為IRF8的臨床應(yīng)用提供更多的理論依據(jù)。方法用分子克隆技術(shù)構(gòu)建IRF8特異性的短發(fā)卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)質(zhì)粒和陰性對照質(zhì)粒,通過慢病毒系統(tǒng)包裝到293T細(xì)胞中,收集病毒液感染DLBCL細(xì)胞(OCI-Ly01和OCI-Ly10),篩選出抗puromysin的DLBCL細(xì)胞株,用實(shí)時(shí)定量聚合酶連鎖反應(yīng)(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法分別檢測IRF8轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平;用MTS檢測細(xì)胞生長,用羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl amino ester,CFSE)檢測細(xì)胞分裂,研究IRF8對DLBCL細(xì)胞增殖的影響;用Western blot方法檢測絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)磷酸化水平,探索IRF8對DLBCL細(xì)胞增殖的影響機(jī)制;用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)研究IRF8對DLBCL細(xì)胞在體腫瘤生長的影響,Western blot方法檢測裸鼠腫瘤組織IRF8的表達(dá)水平和p38 MAPK及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)MAPK的磷酸化水平;通過免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測DLBCL病人組織的IRF8表達(dá)水平,分析IRF8表達(dá)水平和DLBCL病人分子亞型的關(guān)系。結(jié)果IRF8減低表達(dá)可抑制DLBCL細(xì)胞增殖,降低DLBCL細(xì)胞p38和ERK MAPK的磷酸化水平,抑制DLBCL細(xì)胞在體腫瘤的生長,并且IRF8的表達(dá)水平和DLBCL病人的分子亞型有顯著相關(guān)性,生發(fā)中心B細(xì)胞樣(germinal centre B-cell-like,GCB)亞型的DLBCL病人的IRF8表達(dá)水平較低,而非生發(fā)中心B細(xì)胞樣(non germinal centre B-celllike,non-GCB)亞型的DLBCL病人的IRF8表達(dá)水平較高。結(jié)論體外及動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)均證明,IRF8可通過調(diào)節(jié)p38和ERK MAPK的磷酸化水平而抑制DLBCL生長。IRF8可能通過促進(jìn)細(xì)胞增殖在DLBCL的發(fā)病過程中發(fā)揮致癌基因的作用,從而影響DLBCL病人的預(yù)后。
【關(guān)鍵詞】：彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤 干擾素調(diào)節(jié)因子8 增殖 絲裂原活化蛋白激酶
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 1 研究內(nèi)容和技術(shù)路線12-14
• 1.1 研究內(nèi)容12-13
• 1.1.1 構(gòu)建IRF8低表達(dá)的DLBCL細(xì)胞株12
• 1.1.2 研究減低IRF8表達(dá)對DLBCL細(xì)胞增殖的影響12
• 1.1.3 探索IRF8影響DLBCL細(xì)胞增殖的機(jī)制12
• 1.1.4 研究減低IRF8表達(dá)對DLBCL細(xì)胞在體腫瘤生長的影響12
• 1.1.5 研究IRF8表達(dá)水平和DLBCL分子分型的關(guān)系12-13
• 1.2 技術(shù)路線13-14
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法14-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 2.1.1 主要設(shè)備儀器14-15
• 2.1.2 主要試劑及配制15-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-27
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18-20
• 2.2.2 構(gòu)建IRF8低表達(dá)的DLBCL細(xì)胞株20-21
• 2.2.3 RNA提取21-22
• 2.2.4 熒光定量PCR22-23
• 2.2.5 蛋白免疫印跡23
• 2.2.6 檢測細(xì)胞生長23-24
• 2.2.7 檢測細(xì)胞分裂24
• 2.2.8 檢測細(xì)胞周期24
• 2.2.9 動(dòng)物體內(nèi)成瘤24
• 2.2.10 免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry, IHC）24-26
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析26-27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-37
• 3.1 減低IRF8表達(dá)抑制DLBCL細(xì)胞增殖27-30
• 3.2 減低IRF8表達(dá)抑制DLBCL細(xì)胞p38和ERK的磷酸化30-32
• 3.3 減低IRF8表達(dá)抑制DLBCL在體腫瘤生長32-34
• 3.4 IRF8表達(dá)水平和DLBCL分子分型相關(guān)34-37
• 4 討論37-39
• 5 總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 附錄A 縮略詞42-44
• 在學(xué)研究成果44-45
• 致謝45

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本文編號：802975