發(fā)布時(shí)間：2017-09-06 03:28

  本文關(guān)鍵詞：Si-RNA下調(diào)胃癌細(xì)胞中MYH-9的表達(dá)對(duì)其侵襲轉(zhuǎn)移的影響

  更多相關(guān)文章： 胃癌 MYH-9 慢病毒載體 RT-PCR Western blot

【摘要】：目的:檢測(cè)利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)特異性地抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞中MYH-9的表達(dá)對(duì)細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,探討在胃癌治療中將MYH-9作為基因治療靶點(diǎn)的價(jià)值。方法:利用RNAi技術(shù)將Lenti-MYH9轉(zhuǎn)染到胃癌SGC-7901細(xì)胞中,Western Blotting法檢測(cè)MYH-9蛋白的表達(dá),RT-PCR法檢測(cè)MYH-9 mRNA的表達(dá);運(yùn)用細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MYH-9 si RNA下調(diào)胃癌SGC-7901細(xì)胞中MYH-9的表達(dá)對(duì)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果:與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較,Lenti-MYH9可以高效抑制SGC-7901細(xì)胞MYH-9基因的表達(dá),在mRNA水平其表達(dá)抑制率分別為88.9%(t=31.73,P0.001)和89.8%(t=33.21,P0.001);在蛋白質(zhì)水平其表達(dá)抑制率分別為52.9%(t=11.01,P0.001)和60.1%(t=15.53,P0.001)。在遷移實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)為81.5±7.26個(gè),顯著低于陰性對(duì)照組185±7.33個(gè)(t=47.29,P0.001)和空白對(duì)照組189±3.46個(gè)(t=46.40,P0.001)。在侵襲實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)為49.5±13.8個(gè),顯著低于陰性對(duì)照組112±4.34個(gè)(t=15.53,P0.001)和空白對(duì)照組116±5.57個(gè)(t=28.12,P0.001)。結(jié)論:Lenti-MYH9轉(zhuǎn)染SGC-7901胃癌細(xì)胞,可顯著降低mRNA和蛋白的表達(dá),對(duì)胃癌細(xì)胞的侵襲及遷移有明顯的抑制作用MYH-9可能成為胃癌基因治療的新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 MYH-9 慢病毒載體 RT-PCR Western blot
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 中英文縮略表7-8
• 第1章 引言8-10
• 1.1 胃癌的研究現(xiàn)狀及發(fā)病機(jī)制8
• 1.2 MYH9與胃癌的關(guān)系8-10
• 第2章 材料與方法10-21
• 2.1 材料10-11
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞10
• 2.1.2 主要試劑10-11
• 2.1.3 主要儀器11
• 2.2 儀器處理及試劑配制11-12
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法12-20
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)12
• 2.3.2 細(xì)胞傳代12
• 2.3.3 細(xì)胞凍存12
• 2.3.4 細(xì)胞復(fù)蘇12-13
• 2.3.5 細(xì)胞計(jì)數(shù)13
• 2.3.6 慢病毒載體對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901 的轉(zhuǎn)染13-15
• 2.3.7 RT-PCR檢測(cè)m RNA15-17
• 2.3.8 慢病毒轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901 細(xì)胞及Western blot檢測(cè)17-19
• 2.3.9 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Lenti-MYH9對(duì)SGC7901細(xì)胞遷移能力的影響19-20
• 2.3.10 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Lenti-MYH9對(duì)SGC7901細(xì)胞侵襲能力的影響20
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20-21
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-27
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及最適MOI值測(cè)定21
• 3.2 RT-PCR篩選慢病毒沉默MYH-9基因結(jié)果21-23
• 3.3 MYH-9基因蛋白水平的測(cè)定23-24
• 3.4 SGC-7901細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)24-25
• 3.5 SGC-7901細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)25-27
• 第4章 討論27-29
• 第5章 結(jié)論與展望29-30
• 5.1 結(jié)論29
• 5.2 進(jìn)一步工作的方向29-30
• 致謝30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果34-35
• 綜述35-40
• 參考文獻(xiàn)38-40

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本文編號(hào)：801915