本文關鍵詞：葛仙米對二乙基亞硝胺誘發(fā)小鼠肝臟癌前病變的干預作用研究

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【摘要】：葛仙米作為一種具有悠久歷史的食用藻類,富含多糖與藻膽蛋白。藻多糖及藻膽蛋白具有多種優(yōu)異的生物活性,其抑癌作用尤其受到醫(yī)學和食品界的高度關注。本實驗以DENA為誘癌劑,建立小鼠肝臟癌變不同時期的動物模型,同時喂食葛仙米藻漿進行干預,以觀察葛仙米對DENA導致小鼠肝損傷的保護作用及其肝癌的干預作用。本實驗分為4組,即對照組(腹腔注射生理鹽水,自由飲用無菌蒸餾水);葛仙米組(腹腔注射生理鹽水,自由飲用葛仙米藻漿,代替無菌蒸餾水);誘癌組(腹腔注射DENA,自由飲用無菌蒸餾水)和干預組(腹腔注射DENA,自由飲用葛仙米藻漿,代替無菌蒸餾水)。全部4組小鼠均喂食正常飼料。自誘癌之日起,分別在14 d、28 d、56 d、70 d、84 d處死小鼠,取血清及肝臟組織,通過酶活、蛋白、m RNA水平和組織病理學檢測,探討葛仙米對DENA誘發(fā)小鼠肝臟癌前病變的影響和干預作用,為葛仙米的藥用和食用價值研發(fā)提供科學依據和理論參考。本實驗主要結果如下:(1)喂食葛仙米的小鼠在整個實驗過程中,與對照組相比,體重增長較快,皮毛光滑柔順,行動靈敏,精神狀態(tài)良好;誘癌組小鼠隨著DENA處理時間的延長,后期出現(xiàn)食量減少,體型消瘦,精神萎靡等癥狀;葛仙米干預組小鼠隨著實驗周期的延長,也出現(xiàn)類似誘癌組小鼠的癥狀,但出現(xiàn)時間晚于誘癌組,且程度較輕。臟器指數(shù)結果顯示,誘癌組小鼠及干預組小鼠的肝臟指數(shù)顯著高于對照組與葛仙米組,而干預組小鼠肝臟指數(shù)低于誘癌組小鼠,但差異不大。以上結果說明葛仙米對小鼠有促生長作用,并對DENA導致小鼠的肝損傷有一定程度的保護作用。(2)小鼠血液學指標檢測結果顯示,葛仙米組小鼠血清中,ALT與AST的活性與對照組無顯著差異;誘癌組與干預組小鼠血清中ALT與AST的活性顯著高于對照組,干預組小鼠血清中這2種酶的活性都低于誘癌組。該結果也說明葛仙米在一定程度上減輕了DENA對小鼠肝臟的損傷。(3)通過ELISA檢測血清中AFP的蛋白含量變化,結果顯示,隨著實驗進程的延長,葛仙米組小鼠血清中AFP蛋白含量維持在正常范圍之內,與對照組無顯著差異;誘癌組及干預組小鼠血清中AFP的含量顯著升高但與誘癌組相比升高較為緩慢。(4)通過實時定量PCR技術檢測了小鼠肝臟中AFP、bcl-2、p53、PTEN基因的m RNA水平,結果顯示,干預組小鼠肝臟中AFP、bcl-2、p53的相對表達量均低于誘癌組,而PTEN的相對表達量高于誘癌組。(5)小鼠肝臟組織病理學檢測結果表明,誘癌組小鼠在14~28 d多呈炎性反應,42~56 d出現(xiàn)嗜酸性肝細胞,此后逐漸形成肝細胞增生結節(jié),70 d后肝細胞大片壞死,出現(xiàn)癌變。干預組小鼠誘癌病癥出現(xiàn)較DENA組晚,且程度較淺。結論:喂食葛仙米可明顯促進小鼠的生長發(fā)育;飼料中添加一定量的葛仙米不僅對DENA誘發(fā)小鼠肝臟癌變及其進程具有一定的干預作用,而且對DENA導致小鼠肝毒性和肝損傷具有一定的保護和減緩作用。另外,喂食葛仙米還延遲了DENA誘發(fā)小鼠肝臟癌變的進程,并延長了實驗處理小鼠的生存時間。
【關鍵詞】：葛仙米 DENA 癌前病變 血液學指標 生化指標 組織病理學
【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略語8-12
• 第一章 前言12-26
• 1.1 葛仙米概述12-15
• 1.1.1 葛仙米的生物學和生態(tài)學特征12-13
• 1.1.2 葛仙米的地理分布與食用歷史13
• 1.1.3 葛仙米的營養(yǎng)成分13-14
• 1.1.4 葛仙米的藥用價值14-15
• 1.2 肝癌的生物學概述15-24
• 1.2.1 肝癌的種類16-17
• 1.2.2 肝癌的病因學17-19
• 1.2.3 肝癌的性別差異19-20
• 1.2.4 AFP與肝癌20-21
• 1.2.5 癌基因與肝癌21-22
• 1.2.6 抑癌基因與肝癌22-24
• 1.3 亞硝胺誘發(fā)肝癌模型24-25
• 1.4 本研究的目的意義25-26
• 第二章 材料和方法26-35
• 2.1 實驗材料26
• 2.1.1 實驗動物26
• 2.1.2 誘癌及干預物26
• 2.2 主要設備儀器及試劑26-27
• 2.2.1 主要儀器設備26-27
• 2.2.2 主要試劑27
• 2.2.3 一般試劑27
• 2.3 實驗方法27-34
• 2.3.1 誘癌模型的建立27-28
• 2.3.2 樣品采集及處理28
• 2.3.3 組織病理學觀察28-29
• 2.3.4 肝臟指數(shù)29
• 2.3.5 ALT、AST活性測定29-30
• 2.3.6 AFP蛋白含量的測定30-31
• 2.3.7 總RNA提取31-32
• 2.3.8 熒光定量PCR32-34
• 2.4 統(tǒng)計分析34-35
• 第三章 實驗結果35-46
• 3.1 葛仙米對DENA處理小鼠的生長和肝臟指數(shù)的影響35-38
• 3.1.1 生長35-37
• 3.1.2 小鼠肝臟形態(tài)37
• 3.1.3 肝臟指數(shù)37-38
• 3.2 葛仙米對DENA處理小鼠血清酶活性的影響38-40
• 3.2.1 ALT38-39
• 3.2.2 AST39-40
• 3.3 葛仙米對DENA處理小鼠血清AFP蛋白含量的影響40-41
• 3.4 葛仙米對DENA處理小鼠肝臟AFP、bcl-2、p53、PTEN基因表達的影響41-44
• 3.4.1 AFP41-42
• 3.4.2 bcl-242-43
• 3.4.3 p5343-44
• 3.4.4 PTEN44
• 3.5 組織病理學結果44-46
• 第四章 討論46-50
• 4.1 葛仙米對小鼠生長的影響46
• 4.2 葛仙米對DENA處理小鼠肝功能的影響46-47
• 4.3 葛仙米對DENA處理的小鼠AFP含量及其基因表達的影響47
• 4.4 葛仙米對DENA處理小鼠肝臟bcl-2 基因表達的影響47
• 4.5 葛仙米對DENA處理小鼠肝臟p53基因表達的影響47-48
• 4.6 葛仙米對DENA處理小鼠肝臟PTEN基因表達的影響48
• 4.7 葛仙米的抗氧化作用48
• 4.8 對小鼠肝臟組織病理學的影響48-50
• 第五章 結論50-51
• 參考文獻51-59
• 圖版A59-61
• 圖版B61-63
• 圖版C63-65
• 圖版D65-67
• 圖版E67-69
• 致謝69-70
• 攻讀碩士學位期間的研究成果70-71

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