本文關(guān)鍵詞：miRNA-214在胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：背景胃癌是惡性腫瘤死亡最主要的原因之一。胃癌術(shù)后腹膜轉(zhuǎn)移的發(fā)生率在15%-50%甚至更高,成為胃癌死亡最主要的原因。胃癌發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移預(yù)后很差,平均生存時(shí)間在1-1.6月到3.1-9月。對(duì)于胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的患者,雖然有很多種不同的治療方法,如腹腔內(nèi)化療、腹腔內(nèi)溫?zé)峄�、免疫療法、高�?qiáng)度聚焦超聲等,但是治療效果卻并不理想。因此,闡明胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的機(jī)制,尋找抑制胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的新途徑,不僅能更好地改進(jìn)治療措施,更能提高患者的生存率。隨著1993年第一個(gè)micro RNAs(mi RNAs)的發(fā)現(xiàn),人們對(duì)其功能的研究也越來越深入。Mi RNAs被證實(shí)與多種疾病有關(guān),例如糖尿病、高血壓病、艾滋病,及各種腫瘤。大量的研究表明mi RNAs在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、診斷、治療及預(yù)后評(píng)估中起到非常重要的作用。在腫瘤中常以抑癌基因或癌基因的身份存在的,起到調(diào)節(jié)復(fù)雜的生物學(xué)功能的作用,它能夠影響細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移增殖、凋亡及分化。Mi RNAs作為一種新的基因,它是通過與靶基因m RNA3’非翻碼區(qū)(UTRs)完全或部分堿基配對(duì),導(dǎo)致m RNA的降解或抑制m RNA的翻譯。雖然目前已經(jīng)有大量研究表明micro RNA與胃癌之間存在相關(guān)性,但是micro RNA在胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中的作用及其潛在的作用機(jī)制方面的研究較少。在本課題中,我們參考了國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及前期micro RNA高通量芯片分析的研究,初步檢測(cè)到micro RNA-214-3p(mi RNA-214、mi R-214)在胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系GC9811-P與胃癌細(xì)胞系GC9811中存在著差異性表達(dá),并預(yù)測(cè)其發(fā)揮著特殊的生物學(xué)功能。本課題將對(duì)mi RNA-214在胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系的表達(dá)水平、生物學(xué)功能及可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步的研究和探討。目的1.檢測(cè)mi RNA-214在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平。2.研究mi RNA-214在胃癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能。3.探討mi RNA-214在胃癌細(xì)胞系中發(fā)揮功能的機(jī)制。方法1.在相同的條件下復(fù)蘇并培養(yǎng)細(xì)胞GC9811和GC9811-P,待細(xì)胞傳至2-3代后取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞提取小RNA,并檢測(cè)小RNA的OD值在1.8-2.0之間;q RT-PCR的方法驗(yàn)證目的基因mi R-214在細(xì)胞GC9811和GC9811-P中的表達(dá)差異情況,并用2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)值,選U6作為內(nèi)參對(duì)照。2.訂購(gòu)mi RNA-214慢病毒,將空載體病毒和mi RNA-214上調(diào)病毒感染人胃癌細(xì)胞GC9811,分別標(biāo)記為GC9811+LV-NC和GC9811+LV-mi R-214;將空載體病毒和mi RNA-214下調(diào)病毒感染人胃癌細(xì)胞GC9811-P,分別標(biāo)記為GC9811-P+LV-NC和GC9811-P+LV-mi R-214IH,并使用q RT-PCR的方法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果。3.運(yùn)用穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系進(jìn)行transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn),MTT增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)等,研究mi R-214異常表達(dá)后對(duì)胃癌細(xì)胞系GC9811/胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系GC9811-P生物學(xué)功能的影響。4.用生物信息學(xué)分析軟件Target Scan、Mi Randa預(yù)測(cè)mi R-214可能的靶基因,選擇與細(xì)胞侵襲、遷移能力相關(guān)的基因,通過q RT-PCR、Western-blot等方法,對(duì)其預(yù)測(cè)的靶基因編碼蛋白進(jìn)行初步的驗(yàn)證。結(jié)果1.胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞GC9811-P中mi R-214表達(dá)水平明顯升高(10.89±0.25)相對(duì)于胃癌細(xì)胞GC9811(1.00±0.09),P0.01;差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.我們成功構(gòu)建了mi RNA-214穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,q RT-PCR鑒定其表達(dá)效果,結(jié)果顯示能顯著上、下調(diào)mi RNA-214在胃癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平。3.上調(diào)mi RNA-214后,胃癌細(xì)胞GC9811侵襲、遷移和增殖能力明顯增強(qiáng),凋亡能力明顯降低;下調(diào)mi RNA-214后,胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系GC9811-P的細(xì)胞的侵襲、遷移和增殖能力明顯減弱,凋亡能力明顯增高。4.生物信息學(xué)軟件分析得出PTEN為mi RNA-214可能的靶基因;q RT-PCR結(jié)果顯示mi RNA-214不影響PTEN在基因水平的表達(dá);Western-blot初步得出上調(diào)mi RNA-214后,PTEN的表達(dá)量下降,相反下調(diào)mi RNA-214后,PTEN的表達(dá)量增高。結(jié)論1.Micro RNA-214-3P在胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中高表達(dá),提示其在胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中起著癌基因的作用。2.Micro RNA-214-3P促進(jìn)胃癌細(xì)胞系GC9811和胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系GC9811-P的侵襲、遷移及增殖能力,抑制細(xì)胞凋亡。3.PTEN為micro RNA-214-3P的靶基因之一;micro RNA-214-3P不影響PTEN在m RNA水平的表達(dá),而是在轉(zhuǎn)錄后水平抑制PTEN的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 腹膜轉(zhuǎn)移 Micro RNA Mi RNA-214
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 符號(hào)說明11-14
• 前言14-17
• 第一部分：micro RNA2143P在胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中的表達(dá)17-26
• 材料與方法17-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-26
• 第二部分：micro RNA2143P在胃癌細(xì)胞中生物學(xué)功能的驗(yàn)證26-42
• 實(shí)驗(yàn)一：mi RNA-214 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染效果鑒定26-32
• 材料與方法26-29
• 結(jié)果29-32
• 實(shí)驗(yàn)二：mi RNA-214 對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲、遷移、增殖及凋亡影響的觀察32-40
• 材料與方法32-36
• 結(jié)果36-40
• 討論40-42
• 第三部分：micro RNA2143P靶基因生物信息學(xué)預(yù)測(cè)及驗(yàn)證42-55
• 材料與方法42-48
• 結(jié)果48-52
• 討論52-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 文獻(xiàn)綜述64-73
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 致謝73-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文74-75
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷75

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭斌;陳映波;胡yN;王軍業(yè);周志偉;傅劍華;;賁門癌患者臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后變化趨勢(shì)分析[J];癌癥;2010年01期

2 趙麗紅;郭春林;王永福;;聯(lián)合檢測(cè)C反應(yīng)蛋白及幽門螺桿菌在良惡性胃疾患診斷中的意義[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年03期

3 楊麗;朱旭;裴文仲;楊建東;;CXCL12與CXCR4在胃癌中的表達(dá)及其意義[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊;2012年01期

4 張真真;張聲;鄭珂;陳虹;王行富;陳余鵬;;應(yīng)用組織芯片研究Claudin-4在胃腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年03期

5 王長(zhǎng)青;尹永碩;李雷;謝玉波;肖強(qiáng);;轉(zhuǎn)錄因子E2F-1過表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞MGC-803的增殖[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年20期

6 劉輝琦;劉慧;劉杰;王生蘭;;胃癌患者血清P53蛋白與抗體檢測(cè)的比較[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年14期

7 付桂珍;張愛民;;斑貞1號(hào)、川芎嗪聯(lián)合5-氟尿嘧啶對(duì)人胃癌細(xì)胞谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的影響[J];中國(guó)醫(yī)藥科學(xué);2012年04期

8 胡章華;毛紹蓉;;XELOX化療方案用于老年晚期胃癌患者治療的臨床觀察[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年02期

9 吳青松;李思榮;盧欽榮;;胃癌根治術(shù)患者預(yù)后分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年23期

10 王靜文;張書清;;胃癌術(shù)后殘胃復(fù)發(fā)癌的診斷與治療[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2013年11期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 路滟;免疫炎癥基因多態(tài)性與胃癌遺傳易感性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 徐艷s，

本文編號(hào)：786095