本文關(guān)鍵詞：基于NRP-1為靶點(diǎn)分子探針的構(gòu)建及其在腦膠質(zhì)瘤磁共振分子成像中的應(yīng)用

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【摘要】：目的:檢測(cè)不同腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中神經(jīng)纖毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的相對(duì)表達(dá)水平并篩選本實(shí)驗(yàn)理想的實(shí)驗(yàn)對(duì)象;合成以NRP-1為靶點(diǎn)、t Ly P-1為配體、USPIO為核心的新型磁共振分子探針USPIO-PEG-t Ly P-1并檢測(cè)其理化性質(zhì)及生物毒性;檢測(cè)USPIO-PEG-t Ly P-1同腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的特異性結(jié)合能力;觀察USPIO-PEG-t Ly P-1同腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞結(jié)合后在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。方法:1傳代培養(yǎng)人U87、U251、H4及大鼠C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,以HUVEC為陽性對(duì)照、正常大鼠腦組織為陰性對(duì)照,利用RT-PCR及Western-Blot從基因及蛋白水平分別檢測(cè)NRP-1的相對(duì)表達(dá)水平,利用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察NRP-1的亞細(xì)胞定位。2利用質(zhì)譜法驗(yàn)證合成的多肽為試驗(yàn)所需的t Ly P-1(CGNKRTR);電子顯微鏡觀察USPIO的形狀及粒徑;利用碳二亞胺法合成USPIO-PEG-t Ly P-1,并通過動(dòng)態(tài)光散射法檢測(cè)其水合粒徑;觀察USPIO-PEG-t Ly P-1在溶液中的穩(wěn)定性;利用核磁共振T2map序列檢測(cè)USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1的橫向弛豫時(shí)間T2值并計(jì)算其倒數(shù)R2值;利用MTS比色法檢測(cè)USPIO-PEG-t Ly P-1的細(xì)胞毒性。3利用普魯士藍(lán)染色法檢測(cè)不同濃度的USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的結(jié)合能力;利用核磁共振T2map序列檢測(cè)不同濃度的USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞結(jié)合后的橫向弛豫時(shí)間T2值并計(jì)算其倒數(shù)R2值。4利用透射電子顯微鏡觀察USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的結(jié)合情況,并探索USPIO-PEG-t Ly P-1在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)的分布情況。結(jié)果:1在四種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中均有NRP-1的高水平表達(dá),其中浸潤(rùn)能力強(qiáng)、惡性程度相對(duì)較高的U87腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中NRP-1的表達(dá)水平最高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2合成的新型磁共振分子探針USPIO-PEG-t Ly P-1的水合粒徑為43.84 nm,在理化性質(zhì)上符合磁共振分子成像的要求;在磁共振應(yīng)用的有效濃度范圍內(nèi)(?50μg Fe/ml),USPIO-PEG-t Ly P-1無明顯細(xì)胞毒性,對(duì)細(xì)胞存活無顯著影響。3普魯士藍(lán)染色結(jié)果顯示USPIO-PEG-t Ly P-1較USPIO-PEG具有更強(qiáng)的同U87腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞結(jié)合的能力,藍(lán)染顆粒更多、更明顯;體外磁共振成像結(jié)果顯示在相同F(xiàn)e濃度條件下USPIO-PEG-t Ly P-1組U87細(xì)胞的R2值高于USPIO-PEG組U87細(xì)胞的R2值,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4透射電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示USPIO-PEG-t Ly P-1能夠同U87腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞特異性結(jié)合,并主要分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體及溶酶體等細(xì)胞器中。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)合成的以七肽t Ly P-1為配體、USPIO為核心的新型磁共振分子探針USPIO-PEG-t Ly P-1是一種生物安全性好、成像敏感度高的磁共振分子探針。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),分子探針USPIO-PEG-t Ly P-1能夠靶向結(jié)合NRP-1高表達(dá)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系并產(chǎn)生良好的磁共振T2陰性對(duì)比效果,為下一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及今后的臨床試驗(yàn)奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)纖毛蛋白 腦膠質(zhì)瘤 磁共振分子成像 tLyP-1 體外實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R445.2;R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-28
• 結(jié)果28-31
• 附圖31-40
• 附表40-42
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述 基于氧化鐵納米顆粒的神經(jīng)影像技術(shù)在腦膠質(zhì)瘤診治中應(yīng)用的研究進(jìn)展52-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 致謝61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號(hào)：780207