本文關(guān)鍵詞：放療聯(lián)合5-ALA-PDT對常氧與乏氧人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的殺傷作用

  更多相關(guān)文章： 主體詞放療 光動(dòng)力療法 5-氨基酮戊酸 SKOV3細(xì)胞 乏氧 活性氧 凋亡

【摘要】：放療是治療惡性腫瘤的三大主要手段之一,即電離輻射通過直接或間接作用,造成蛋白質(zhì)、DNA等生物大分子的損傷,以殺死癌細(xì)胞。但因某些癌細(xì)胞系對射線不敏感,實(shí)體瘤中存在著一定數(shù)量的乏氧細(xì)胞,射線因穿透力太強(qiáng)而在某些瘤體部位能量積累不夠以及長期多次照射導(dǎo)致骨髓抑制、白細(xì)胞減少及惡心嘔吐等多種原因,嚴(yán)重影響了放療對某些腫瘤的治療效果及患者的順應(yīng)性。為了改善放療的療效,減弱放療導(dǎo)致的某些嚴(yán)重的副反應(yīng),臨床上將放療與某些技術(shù)聯(lián)用,以增強(qiáng)對癌細(xì)胞的殺傷作用,并降低射線劑量,以期減少長期多次照射導(dǎo)致的嚴(yán)重副反應(yīng)。光動(dòng)力(PDT)是借助光敏劑能夠吸收特定波長光的能量,并傳遞給周圍的O2,以產(chǎn)生性質(zhì)非常活潑的單線態(tài)氧(1O2)及活性氧(ROS),破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能,從而殺死癌細(xì)胞。PDT有多種優(yōu)點(diǎn):具有組織特異性和相對選擇性,毒性低;冷光化學(xué)反應(yīng),與其他腫瘤治療技術(shù)相輔相成;可重復(fù)用藥,無藥物耐受性;創(chuàng)傷小,見效快;抗癌譜廣,對各種癌癥都有一定的療效;光源局部照射,順應(yīng)性好。但PDT外部光源穿透力弱,深部腫瘤作用有限,且高劑量光敏劑能導(dǎo)致光毒性副作用,病人避光時(shí)間長。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合放療與PDT兩種技術(shù)的優(yōu)勢,進(jìn)行聯(lián)用,并以人卵巢癌SKOV3作為細(xì)胞模型,分別設(shè)置常氧組和乏氧組,研究兩種技術(shù)聯(lián)用對常氧與乏氧條件下SKOV3細(xì)胞的殺傷作用是協(xié)同作用,還是簡單的加和作用,并研究聯(lián)用的機(jī)制,以期為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。具體研究內(nèi)容如下:(一)5-ALA-PDT致SKOV3細(xì)胞損傷模型的建立采用發(fā)光二極管(LED)結(jié)合BP635窄帶紅色濾光片為PDT光源,5-氨基酮戊酸(5-ALA)為光敏劑,MTT法檢測細(xì)胞存活率。結(jié)果顯示:5-ALA從0.1~0.7 m M都無明顯的細(xì)胞毒作用(P0.05);單純紅光對細(xì)胞增殖基本無影響(P0.05);5-ALA0.1 m M,5-ALA-PDT隨著藥物濃度及紅光能量功率密度的增加,細(xì)胞存活率呈明顯的下降趨勢,且呈濃度和紅光能量功率密度依賴性;隨者培養(yǎng)時(shí)間的延長,細(xì)胞存活率明顯降低,24 h后進(jìn)入平臺(tái)期,變化緩慢。說明5-ALA-PDT致SKOV3細(xì)胞損傷模型建立成功。(二)SKOV3細(xì)胞乏氧模型的建立用培養(yǎng)袋結(jié)合厭氧產(chǎn)氣袋處理SKOV3細(xì)胞12 h,用MTT法代替克隆形成法計(jì)算細(xì)胞存活分?jǐn)?shù),求得氧增比(OER)為2.61,介于2.5~3.0之間,達(dá)到乏氧條件,認(rèn)為乏氧模型建立成功。(三)放療聯(lián)合5-ALA-PDT對常氧與乏氧人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的殺傷作用各組按不同處理后48 h,用MTT法檢測細(xì)胞存活率。常氧與乏氧下0.1~0.7 m M濃度范圍內(nèi),5-ALA無細(xì)胞毒性與放射增敏性(P0.05);5-ALA0.1 m M,隨著藥物濃度與紅光功率密度的增加,細(xì)胞存活率呈明顯的下降趨勢;X射線與5-ALA-PDT聯(lián)用,Rax Rb/Rc比值分別為2.13、1.49,且常氧下聯(lián)用與順序無關(guān)(P0.05),乏氧下有關(guān)(P0.01)。提示常氧與乏氧下X射線與5-ALA-PDT聯(lián)用都是協(xié)同作用,但乏氧下聯(lián)用效果弱于常氧,且先X射線照射后5-ALA-PDT可能會(huì)是一個(gè)更好的聯(lián)用方式。(四)放療聯(lián)合5-ALA-PDT對常氧與乏氧人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的殺傷作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)分為常氧組與乏氧組,兩組又各設(shè)正常對照組(N)、單純藥物組(0.3 m M)、放射加藥組(0.3 m M+6 Gy)、光動(dòng)力組(0.3 m M+0.5 J/cm2)及聯(lián)合組(6 Gy+0.3 m M-0.5 J/cm2),采用熒光顯微鏡觀察5-ALA轉(zhuǎn)化為Pp IX的熒光強(qiáng)度,倒置顯微鏡結(jié)合臺(tái)盼藍(lán)單染法檢測細(xì)胞膜破損率,熒光顯微鏡結(jié)合Hoechst 33342單染法檢測細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞儀結(jié)合試劑盒檢測ROS含量。加入0.3 m M 5-ALA 4 h后,無熒光的5-ALA被SKOV3細(xì)胞攝取后轉(zhuǎn)化生成有紅色熒光的Pp IX,主要集中在細(xì)胞膜附近,常氧下的熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于乏氧。各組處理24 h或48 h后,常氧與乏氧下正常對照組和單純藥物組細(xì)胞膜破損率都無差異(P0.05),且隨著時(shí)間的延長亦不顯著(P0.05);放射加藥組細(xì)胞膜破損率常氧高于乏氧(P0.01),隨著時(shí)間的延長細(xì)胞膜破裂增多(P0.01);光動(dòng)力組細(xì)胞膜破損率常氧高于乏氧(P0.01),隨著時(shí)間的延長,常氧不顯著(P0.05),乏氧細(xì)胞膜破裂增多(P0.05);聯(lián)合組細(xì)胞膜破損率常氧高于乏氧(P0.01),隨著時(shí)間的延長細(xì)胞膜破裂增多(P0.01);同時(shí)間點(diǎn)同組內(nèi)聯(lián)合組細(xì)胞膜破損率比單純放射加藥組、光動(dòng)力組都要高(P0.01)。各組處理24 h或48 h后,常氧與乏氧下正常對照組和單純藥物組細(xì)胞凋亡率都沒有差異(P0.05),且隨著時(shí)間的延長亦不顯著(P0.05);放射加藥組細(xì)胞凋亡率常氧低于乏氧(P0.01),隨著時(shí)間的延長凋亡率越高(P0.05);光動(dòng)力組細(xì)胞凋亡率24 h常氧低于乏氧(P0.05),48 h不顯著(P0.05),隨著時(shí)間的延長,常氧凋亡率越高(P0.01),乏氧不顯著(P0.05);聯(lián)合組細(xì)胞凋亡率24 h常氧低于乏氧(P0.01),48 h不顯著(P0.05),隨著時(shí)間的延長凋亡率越低(P0.01);同時(shí)間點(diǎn)同組內(nèi)聯(lián)合組24 h細(xì)胞凋亡率比單純放射加藥組、光動(dòng)力組都要高,而48 h卻都要低(P0.05)。各組處理0 h、12 h或24 h后,同時(shí)間點(diǎn)常氧和乏氧正常對照組與單純藥物組比較,ROS含量不顯著(P0.05),同組別常氧與乏氧對應(yīng)比較亦無差異(P0.05);放射加藥組ROS含量常氧低于乏氧(P0.05),隨著時(shí)間的延長常氧ROS含量越高,而乏氧先升高后降低(P0.01),12 h含量最高;光動(dòng)力組ROS含量0 h常氧與乏氧相比,無顯著性差異(P0.05),而12 h與24 h常氧顯著低于乏氧(P0.05),隨著時(shí)間的延長,常氧與乏氧ROS含量先升高后降低(P0.01),12 h含量最高;聯(lián)合組ROS含量常氧低于乏氧(P0.01),隨著時(shí)間的延長ROS含量先升高后降低(P0.01),12 h含量最高;同時(shí)間點(diǎn)同組內(nèi)聯(lián)合組ROS含量都比單純放射加藥組、光動(dòng)力組都要高(P0.05)。結(jié)果表明:常氧下放療與5-ALA-PDT聯(lián)用表現(xiàn)出協(xié)同作用,可能與產(chǎn)生的ROS導(dǎo)致細(xì)胞膜破損進(jìn)而細(xì)胞大量壞死有關(guān);而乏氧下表現(xiàn)出協(xié)同作用可能與ROS導(dǎo)致細(xì)胞大量凋亡有密切聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】：主體詞放療 光動(dòng)力療法 5-氨基酮戊酸 SKOV3細(xì)胞 乏氧 活性氧 凋亡
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 摘要6-10
• Abstract10-15
• 縮略詞表（Abbreviations List）15-16
• 前言16-20
• 第一章 5-ALA-PDT致SKOV3細(xì)胞損傷模型的建立20-27
• 1 材料與方法20-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23
• 2 結(jié)果23-25
• 2.1 不同 5-ALA濃度及紅光能量密度對SKOV3細(xì)胞存活率的影響23-24
• 2.2 不同紅光能量密度及培養(yǎng)時(shí)間對SKOV3細(xì)胞存活率的影響24-25
• 3 討論25-27
• 第二章 SKOV3細(xì)胞乏氧模型的建立27-34
• 1 材料與方法27-29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理29
• 2 結(jié)果29-32
• 2.1 不同劑量X射線照射對常氧與乏氧SKOV3細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響29-31
• 2.2 不同劑量X射線照射對常氧與乏氧SKOV3細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)的影響31-32
• 3 討論32-34
• 第三章 放療聯(lián)合 5-ALA-PDT對常氧與乏氧人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的殺傷效應(yīng)34-44
• 1 材料與方法34-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理37-38
• 2 結(jié)果38-41
• 2.1 5-ALA對常氧與乏氧SKOV3細(xì)胞毒性與放射敏感性的影響38
• 2.2 5-ALA-PDT對常氧與乏氧SKOV3細(xì)胞存活率的影響38-39
• 2.3 聯(lián)用對常氧與乏氧SKOV3細(xì)胞存活率的影響39-40
• 2.4 聯(lián)用順序?qū)ΤＱ跖c乏氧SKOV3細(xì)胞存活率的影響40-41
• 3 討論41-44
• 第四章 放療聯(lián)合 5-ALA-PDT對常氧與乏氧人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的殺傷作用機(jī)制44-56
• 1 材料與方法44-48
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料44-45
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法45-48
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理48
• 2 結(jié)果48-53
• 2.1 常氧與乏氧對 5-ALA轉(zhuǎn)化為PpIX的影響48
• 2.2 聯(lián)用對SKOV3細(xì)胞膜破損率的影響48-50
• 2.3 聯(lián)用對SKOV3細(xì)胞凋亡的影響50-51
• 2.4 聯(lián)用對SKOV3細(xì)胞內(nèi)ROS總含量的影響51-53
• 3 討論53-56
• 結(jié)語56-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 附錄 綜述63-75
• 參考文獻(xiàn)70-75
• 研究生期間發(fā)表論文75-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號(hào)：776250