發(fā)布時(shí)間：2017-09-01 19:45

  本文關(guān)鍵詞：4EGI-1對(duì)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,是最為常見(jiàn)的原發(fā)顱內(nèi)腫瘤。根據(jù)WHO對(duì)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的分類膠質(zhì)瘤被分為I-IV級(jí),其中III-IV級(jí)膠質(zhì)瘤屬于惡性,占所有膠質(zhì)瘤的77.5%。研究表明,惡性膠質(zhì)瘤的年發(fā)病增長(zhǎng)率在1.2%左右。惡性膠質(zhì)瘤主要引起顱內(nèi)壓增高及神經(jīng)功能障礙,嚴(yán)重威脅患者生命安全。針對(duì)惡性膠質(zhì)瘤采取的主要治療手段是以手術(shù)切除為主,根據(jù)病理檢查結(jié)果結(jié)合放療、化療等措施的綜合治療。免疫治療、基因治療、分子靶向治療等新的治療方法也正在逐步被應(yīng)用到惡性膠質(zhì)瘤的治療中。盡管影像、麻醉、定向、導(dǎo)航、監(jiān)測(cè)、放化療等技術(shù)設(shè)備以及藥物的發(fā)展,惡性膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍不容樂(lè)觀。數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)腦及CNS惡性腫瘤死亡率為2.91/10萬(wàn),構(gòu)成比為2.39%。因此,尋找有效的手段治療惡性膠質(zhì)瘤有著重要的臨床價(jià)值,會(huì)帶來(lái)良好的社會(huì)效益。真核生物中,翻譯起始因子eIFs在mRNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯、蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程中起到了關(guān)鍵性作用,其中eIF4A、eIF4E、eIF4G共同組成eIF4F復(fù)合物,啟動(dòng)含有5’帽式結(jié)構(gòu)的mRNA翻譯過(guò)程。研究表明,eIF4F復(fù)合物能夠調(diào)節(jié)多種與腫瘤密切相關(guān)的基因的異常表達(dá),具體表現(xiàn)為促進(jìn)增殖、抑制凋亡、誘發(fā)放化療抵抗、加速瘤組織血管化等。eIF4E結(jié)合蛋白4E-BPs的磷酸化水平是決定eIF4F復(fù)合物能否組裝成功的關(guān)鍵:低磷酸化的4E-BPs會(huì)結(jié)合eIF4E,阻止了eIF4G與eIF4E結(jié)合,造成eIF4F復(fù)合物組裝困難;反之,高磷酸化的4E-BPs不結(jié)合eIF4E,eIF4G會(huì)更多的與eIF4E結(jié)合組裝成eIF4F復(fù)合物,進(jìn)而造成eIF4F復(fù)合物增加。線粒體在細(xì)胞內(nèi)代謝、氧化還原平衡和細(xì)胞死亡的調(diào)控方面發(fā)揮了重要的作用。此外,線粒體應(yīng)激反應(yīng)升高和腫瘤的侵襲以及手術(shù)愈后有密切關(guān)系。當(dāng)線粒體應(yīng)激反應(yīng)超過(guò)了細(xì)胞所能承受的范圍將會(huì)觸發(fā)細(xì)胞毒性反應(yīng),從而抑制腫瘤細(xì)胞的演進(jìn)。包括:線粒體膜腫脹和膜上孔道打開(kāi),導(dǎo)致如細(xì)胞色素C等促細(xì)胞凋亡因子的外泄以及ATP合成和供給的下降。通過(guò)誘導(dǎo)線粒體功能異常作為腫瘤治療的目標(biāo)在近年來(lái)取得了越來(lái)越多的關(guān)注。若干因子被證實(shí)能夠通過(guò)影響線粒體的功能,從而抑制腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)和體外的生物學(xué)行為。4EGI-1是一種小分子化合物,能夠模擬4E-BPs的功能,擾亂eIF4G來(lái)源的肽鏈和eIF4E結(jié)合,進(jìn)而形成穩(wěn)固的eIF4E/4EGI-1復(fù)合物,阻斷eIF4F復(fù)合物的形成。研究指出在多種腫瘤細(xì)胞系中,4EGI-1抑制了帽式翻譯進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,這種以eIF4F復(fù)合物為靶點(diǎn)基因治療惡性腫瘤的小分子化合物具有潛在的應(yīng)用前景。然而4EGI-1對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡的作用以及相關(guān)機(jī)制還沒(méi)有被證實(shí)。因此,我們通過(guò)帽式翻譯抑制因子4EGI-1處理U251細(xì)胞,通過(guò)Western blot觀察其對(duì)eIF4F復(fù)合物的影響;通過(guò)TUNEL染色、流式細(xì)胞術(shù)觀察U251細(xì)胞凋亡;通過(guò)MTS細(xì)胞活性測(cè)試檢測(cè)細(xì)胞活力;通過(guò)Rh123染色檢測(cè)線粒體MMP變化;通過(guò)DCFH熒光檢測(cè)ROS的產(chǎn)生;通過(guò)LDH釋放檢測(cè)細(xì)胞毒性;通過(guò)克拉克型氧氣電極檢測(cè)細(xì)胞線粒體復(fù)合物-I的耗氧量和耗氧率;通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)線粒體DNA含量和DNA轉(zhuǎn)錄情況;通過(guò)熒光染色觀察U251細(xì)胞鏡下立體外形變化;通過(guò)Western blot觀察與線粒體動(dòng)態(tài)學(xué)相關(guān)蛋白表達(dá)的改變;通過(guò)si RNA和特異的抑制劑mdivi-1干擾線粒體分裂蛋白表達(dá),觀察U251細(xì)胞的生物學(xué)行為變化,證實(shí)了4EGI-1對(duì)U251細(xì)胞的作用以及與腫瘤細(xì)胞內(nèi)線粒體功能的關(guān)系。我們的結(jié)論是:1.在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞內(nèi),4EGI-1通過(guò)影響eIF4G而非eIF4E以及4E-BPs來(lái)抑制eIF4F復(fù)合物的表達(dá)。2.在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞內(nèi),4EGI-1通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)抑制細(xì)胞增殖并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。3.在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞內(nèi),4EGI-1可以降低線粒體呼吸活動(dòng)但并不影響線粒體生物合成。4.在膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞內(nèi),4EGI-1影響線粒體動(dòng)態(tài)平衡蛋白的表達(dá)從而發(fā)揮腫瘤抑制作用,其中線粒體分裂蛋白Drp-1發(fā)揮了重要作用。
【關(guān)鍵詞】：4EGI-1 人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞 eIF4F復(fù)合物 線粒體功能障礙 基因治療
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-29
• 第一部分 4EGI-1 影響U251細(xì)胞內(nèi)eIF4F復(fù)合物的形成29-36
• 1 材料29-30
• 2 方法30-32
• 3 結(jié)果32-33
• 4 討論33-36
• 第二部分 4EGI-1 影響U251細(xì)胞的增殖、凋亡和氧化呼吸作用36-44
• 1 材料36-37
• 2 方法37-39
• 3 結(jié)果39-41
• 4 討論41-44
• 第三部分 4EGI-1 未改變U251細(xì)胞的線粒體生物合成44-49
• 1 材料44-45
• 2 方法45-46
• 3 結(jié)果46-47
• 4 討論47-49
• 第四部分 4EGI-1 通過(guò)Drp-1 誘發(fā)U251細(xì)胞的線粒體動(dòng)態(tài)學(xué)改變49-57
• 1 材料49-50
• 2 方法50-52
• 3 結(jié)果52-54
• 4 討論54-57
• 小結(jié)57-59
• 參考文獻(xiàn)59-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果76-78
• 致謝78

【相似文獻(xiàn)】

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7 王斌;卞修武;平軼芳;姜建勇;趙林濤;余世滄;王U，

本文編號(hào)：774074