本文關(guān)鍵詞：醋酸棉酚對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞ER基因甲基化及ER、PR、c-fos基因mRNA表達(dá)的影響

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【摘要】：[目的]觀察體外應(yīng)用醋酸棉酚(GAA)對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,檢測(cè)GAA對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞ER基因甲基化水平及ER、PR、c-fos基因的mRNA表達(dá)的影響,為通過(guò)改變ER基因的甲基化狀態(tài)治療腫瘤提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。[方法]1、常規(guī)培養(yǎng)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞,用不同濃度GAA處理細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察處理前后人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；2、通過(guò)CCK-8法檢測(cè)不同濃度的GAA對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,并計(jì)算GAA作用的IC50值；3、通過(guò)甲基化特異性PCR(MS-PCR)及重亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序法(BS-PCR)檢測(cè)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞在GAA作用48h后ER基因甲基化狀態(tài)的改變情況;4、通過(guò)QPCR檢測(cè)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞在GAA作用48h后ER、PR、c-fos基因mRNA的表達(dá)變化。[結(jié)果]1、加入不同濃度的GAA后,在倒置顯微鏡下見人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞體積縮小,與周圍的細(xì)胞脫離,胞體縮小變圓,后期細(xì)胞死亡,破裂成碎片狀且隨GAA濃度的增高、作用時(shí)間的延長(zhǎng),現(xiàn)象更加明顯;2、CCK-8法檢測(cè)顯示,GAA作用24h-72h后,藥物對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用,在一定劑量范圍內(nèi)具有濃度及時(shí)間依賴性。測(cè)得24h、48h、72h的ICso值分別為12.56μmol/L、5.87μmol/L、4.00μmol/L;3、以終濃度2.5μmol/L,5.0μmol/L,10.0μmol/L的GAA分別作用于人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞48h,MS-PCR檢測(cè)顯示GAA對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的ER基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的高甲基化狀態(tài)產(chǎn)生部分逆轉(zhuǎn)作用；BS-PCR檢測(cè)顯示逆轉(zhuǎn)作用在10.0umol/LGAA濃度時(shí)達(dá)到最大程度,2.5μmol/L GAA處理48h后ER基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島1號(hào)點(diǎn)位發(fā)生10%的去甲基化,5.0μmol/L GAA處理48h后ER基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島1號(hào)點(diǎn)位發(fā)生40%的去甲基化,10.0μmol/L GAA處理48h后ER基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島1、2、4號(hào)點(diǎn)位均發(fā)生去甲基化,去甲基化的程度分別是60%、10%、40%。4、QPCR檢測(cè)顯示,2.5μmol/L,5.0μmol/L,10.Oμmol/L的GAA分別作用48h后,與對(duì)照組相比較,ER、PR、c-fos基因的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05)。[結(jié)論]1、GAA能抑制人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的生長(zhǎng),在一定的范圍內(nèi),GAA對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的抑制具有濃度及時(shí)間的依賴性；2、一定濃度的GAA能夠使人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞系ER基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化程度降低；3、一定濃度的GAA能夠使人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞系ER、PR、c-fos基因的mRNA表達(dá)水平增高。
【關(guān)鍵詞】：人舌鱗癌 醋酸棉酚 雌激素受體 甲基化
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.86
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 材料與方法14-37
• 結(jié)果37-53
• 討論53-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 綜述65-71
• 參考文獻(xiàn)69-71
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果71-72
• 致謝72

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1 楊樂;醋酸棉酚對(duì)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞ER基因甲基化及ER、PR、c-fos基因mRNA表達(dá)的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：758177