本文關(guān)鍵詞：RBM4α對(duì)雌激素受體α的調(diào)控機(jī)理

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【摘要】：乳腺癌是一種發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。近年來(lái),乳腺癌已成為危害我們廣大女性朋友的重大疾病之一,它給女性帶來(lái)了極大的困擾和痛苦。一半以上的乳腺癌是雌激素受體(estrogen receptor, ER)陽(yáng)性的。ERa是調(diào)控ER陽(yáng)性的乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵性因子。ERa作為轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮作用,與其他相關(guān)的輔調(diào)節(jié)因子密不可分。這些輔調(diào)節(jié)因子一般可與ERa直接或間接的相互作用,調(diào)控ERa在細(xì)胞中的定位、ERa的表達(dá)等等。RNA結(jié)合蛋白4a (RNA binding motif protein 4a, RBM4a)是一種新近發(fā)現(xiàn)的抑癌蛋白,可以通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因前體mRNA(pre-mRNA)的可變剪接發(fā)揮抑制作用。RBM4a是RBPs家族蛋白,其家族成員RBM39可以與ERa發(fā)生相互作用,調(diào)節(jié)ERa的轉(zhuǎn)錄活性。RBPs家族結(jié)構(gòu)具有很高的保守性,所以我的研究著手于RBM4a與ERa相互作用的檢測(cè),探究其中的生物學(xué)意義。本論文的主要內(nèi)容包括：(1)在HEK-293T細(xì)胞和MCF7細(xì)胞中,我們通過(guò)免疫熒光、哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交以及免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn),研究了RBM4a和ERa之間的相互作用。結(jié)果表明,在細(xì)胞核內(nèi)RBM4a和ERa發(fā)生相互作用。(2)在Hela細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中,我們通過(guò)蛋白質(zhì)印記實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了RBM4a;對(duì)ERa蛋白水平的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,RBM4a以劑量依賴(lài)的方式下調(diào)ERα的蛋白水平,還發(fā)現(xiàn)RBM4a能夠縮短ERa的半衰期。最終我們檢測(cè)到RBM4a是通過(guò)促進(jìn)ERa的泛素化降解降低了其蛋白水平。(3)在Hela細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中,我們通過(guò)報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和RT-PCR實(shí)驗(yàn),研究了RBM4α對(duì)ERα的轉(zhuǎn)錄活性及其靶基因mRNA水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在雌激素(estrogens, E2)存在的情況下,RBM4a能夠抑制ERa的轉(zhuǎn)錄活性,并下調(diào)ERa下游靶基因Cyclin D1和GREB1的mRNA水平。進(jìn)一步通過(guò)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了RBM4a對(duì)乳腺癌細(xì)胞功能的影響。結(jié)果表明,RBM4能夠抑制ERa依賴(lài)的細(xì)胞增殖的能力。本論文首次將RBM4a與ERa聯(lián)系在一起,確定RBM4a是ERa的一個(gè)負(fù)調(diào)控因子,能夠抑制ERa介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞的增殖。這為進(jìn)一步了解乳腺癌的發(fā)生發(fā)展提供理論依據(jù),為治療ERa介導(dǎo)的乳腺癌提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 ERα RBM4α
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-10
• 1 文獻(xiàn)綜述10-20
• 1.1 RBM4α的概述10-14
• 1.1.1 RBM4α的發(fā)現(xiàn)10
• 1.1.2 RBM4α的基本結(jié)構(gòu)10-11
• 1.1.3 RBM4α的研究進(jìn)展11-14
• 1.2 雌激素受體α概述14-18
• 1.2.1 ERα簡(jiǎn)介14-15
• 1.2.2 雌激素受體信號(hào)通路15-17
• 1.2.3 ER與乳腺癌17-18
• 1.3 本論文的選題依據(jù)和研究?jī)?nèi)容18-20
• 1.3.1 選題依據(jù)18-19
• 1.3.2 研究?jī)?nèi)容19-20
• 2 RBM4α與ERα之間的相互作用20-36
• 2.1 引言20
• 2.2 儀器與試劑20-23
• 2.2.1 儀器20-21
• 2.2.2 試劑和耗材21-22
• 2.2.3 溶液的配制22-23
• 2.2.4 菌種、細(xì)胞及質(zhì)粒23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-31
• 2.3.1 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備23-24
• 2.3.2 質(zhì)粒的構(gòu)建24-25
• 2.3.3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與提取25-26
• 2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)26
• 2.3.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染26-27
• 2.3.6 免疫熒光(IF)27
• 2.3.7 免疫共沉淀(Co-IP)27-28
• 2.3.8 蛋白質(zhì)印跡(Western blotting,WB)28-30
• 2.3.9 考馬斯亮藍(lán)(Bradfold)法測(cè)蛋白濃度30
• 2.3.10 哺乳動(dòng)物雙雜交30-31
• 2.4 結(jié)果與討論31-35
• 2.4.1 IF檢測(cè)RBM4α與ERα的共定位31-32
• 2.4.2 哺乳動(dòng)物雙雜交檢測(cè)RBM4α與ERα之間的相互作用32-34
• 2.4.3 Co-IP檢測(cè)RBM4α與ERα之間的相互作用34-35
• 2.5 小結(jié)35-36
• 3 RBM4α對(duì)ERα蛋白水平的影響36-43
• 3.1 引言36
• 3.2 儀器與試劑36-37
• 3.2.1 儀器36
• 3.2.2 試劑和耗材36
• 3.2.3 溶液的配制36
• 3.2.4 菌種、細(xì)胞及質(zhì)粒36-37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法37
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)37
• 3.3.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染37
• 3.3.3 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)37
• 3.3.4 蛋白質(zhì)印跡(Western blotting,WB)37
• 3.3.5 考馬斯亮藍(lán)(Bradfold)法測(cè)蛋白濃度37
• 3.4 結(jié)果與討論37-42
• 3.4.1 RBM4α對(duì)ERα表達(dá)的影響37-39
• 3.4.2 RBM4α對(duì)ERα穩(wěn)定性的影響39-40
• 3.4.3 RBM4α對(duì)ERα蛋白降解的影響40-42
• 3.5 小結(jié)42-43
• 4 RBM4α對(duì)ERα功能的調(diào)控43-56
• 4.1 引言43
• 4.2 儀器與試劑43-44
• 4.2.1 儀器43
• 4.2.2 試劑和耗材43-44
• 4.2.3 溶液的配制44
• 4.2.4 菌種、細(xì)胞及質(zhì)粒44
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法44-49
• 4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)44
• 4.3.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染44
• 4.3.3 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)44-45
• 4.3.4 RNA提取及檢測(cè)45-46
• 4.3.5 反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)46-48
• 4.3.6 瓊脂糖凝膠電泳(Agarose gel electrophoresis)48
• 4.3.7 平板克隆形成48-49
• 4.3.8 MTT比色法49
• 4.4 結(jié)果與討論49-55
• 4.4.1 RBM4α對(duì)ERα轉(zhuǎn)錄活性的影響49-51
• 4.4.2 RBM4α對(duì)ERα下游靶基因mRNA水平的影響51-53
• 4.4.3 RBM4α對(duì)ERα促乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響53-55
• 4.5 小結(jié)55-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況61-62
• 致謝62-63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 許兆偉;趙鋒;伍會(huì)健;;ERα輔調(diào)節(jié)因子在乳腺癌中的雙重調(diào)控作用[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2014年10期

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本文編號(hào)：757458