本文關(guān)鍵詞：PRMT2對MCF-7細(xì)胞侵襲與遷移的影響及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(PRMT2) 人乳腺癌MCF-7細(xì)胞 上皮組織間充質(zhì)化(EMT) Wnt信號通路

【摘要】：目的:明確蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲與遷移的影響,并初步探討其可能的分子機(jī)制。方法:1.觀察PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,Transwell體外侵襲及劃痕損傷實(shí)驗(yàn)觀察PRMT2過表達(dá)對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響。2.蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot,WB)分別檢測PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)及PRMT2穩(wěn)定低表達(dá)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中上皮組織間充質(zhì)化(EMT)相關(guān)蛋白的表達(dá),細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察PRMT2過表達(dá)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中表皮鈣粘素(E-cadherin)胞內(nèi)表達(dá)及定位改變;3.采用高通量抗體芯片技術(shù)對PRMT2過表達(dá)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞進(jìn)行腫瘤信號通路關(guān)鍵位點(diǎn)蛋白檢測,WB進(jìn)行分子機(jī)制的初步研究。結(jié)果:1.形態(tài)學(xué)觀測、Transwell體外侵襲及劃痕損傷實(shí)驗(yàn)表示:PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7出現(xiàn)EMT樣形態(tài)學(xué)改變,促進(jìn)MCF-7發(fā)生體外侵襲轉(zhuǎn)移。2.WB檢測結(jié)果表示:PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)減少E-cadherin的表達(dá),增加Slug的表達(dá);而PRMT2穩(wěn)定低表達(dá)則促進(jìn)E-cadherin的表達(dá),抑制Slug的表達(dá);細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后E-cadherin表達(dá)減少,但未見定位改變。3.抗體芯片檢測結(jié)果提示:PRMT2降低β-catenin的磷酸化水平,WB檢測結(jié)果表示,APC-Axin-GSK-3β復(fù)合物蛋白表達(dá)減少,β-catenin核定位增加。結(jié)論:1.PRMT2增加MCF-7細(xì)胞體外侵襲與遷移能力。2.PRMT2可能通過調(diào)節(jié)β-catenin磷酸化激活Wnt信號通路促進(jìn)MCF-7細(xì)胞發(fā)生侵襲遷移。
【關(guān)鍵詞】：蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2(PRMT2) 人乳腺癌MCF-7細(xì)胞 上皮組織間充質(zhì)化(EMT) Wnt信號通路
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略詞表11-13
• 第1章 前言13-15
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料15-21
• 2.1 細(xì)胞株15
• 2.2 培養(yǎng)基于血清15
• 2.3 主要藥品、試劑和試劑盒15-16
• 2.4 主要試劑配制16-18
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)基16
• 2.4.2 western blot試劑配制16-18
• 2.5 主要儀器和設(shè)備18-21
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理21-22
• 3.2 Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)22-23
• 3.3 劃痕損傷實(shí)驗(yàn)23
• 3.4 Western blot23-25
• 3.4.1 蛋白樣品的抽提23-24
• 3.4.1.1 全細(xì)胞蛋白的抽提23-24
• 3.4.1.2 胞質(zhì)與胞核蛋白的抽提24
• 3.4.2 BCA定量24
• 3.4.3 電泳和轉(zhuǎn)膜24-25
• 3.4.4 封閉和抗體孵育25
• 3.4.5 顯影25
• 3.5 細(xì)胞免疫熒光25-26
• 3.6 抗體芯片檢測26-28
• 3.6.1 樣品蛋白質(zhì)抽提與標(biāo)記26-27
• 3.6.1.1 蛋白質(zhì)抽提26
• 3.6.1.2 蛋白質(zhì)濃度測定26
• 3.6.1.3 蛋白質(zhì)標(biāo)記26-27
• 3.6.2 芯片雜交27-28
• 3.6.2.1 芯片封閉27
• 3.6.2.2 芯片雜交27
• 3.6.2.3 芯片檢測27-28
• 3.6.3 芯片結(jié)果掃描28
• 3.6.4 芯片數(shù)據(jù)整理及報(bào)告分析28
• 3.7 數(shù)據(jù)分析28-29
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-40
• 4.1 PRMT2增加MCF29-31
• 4.1.1 PRMT2過表達(dá)促進(jìn)MCF-7 細(xì)胞產(chǎn)生類似EMT現(xiàn)象的形態(tài)學(xué)改變29
• 4.1.2 PRMT2過表達(dá)促進(jìn)MCF29-31
• 4.1.2.1 PRMT2過表達(dá)促進(jìn)MCF29-31
• 4.1.2.2 PRMT2過表達(dá)促進(jìn)MCF31
• 4.2 PRMT2可上調(diào)MCF31-35
• 4.3 PRMT2可能通過調(diào)節(jié) β-catenin磷酸化激活Wnt信號通路促進(jìn)MCF35-40
• 4.3.1 抗體芯片檢測MCF-7 細(xì)胞中PRMT2調(diào)控的腫瘤信號通路35-37
• 4.3.2 蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)37-40
• 4.3.2.1 WB檢測MCF-7 全細(xì)胞蛋白 β-catenin與p-β-catenin的表達(dá)37-38
• 4.3.2.2 WB檢測MCF-7 細(xì)胞胞質(zhì)與胞核蛋白Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白表達(dá)38-40
• 第5章 討論40-43
• 第6章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 綜述49-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 附錄58-59
• 攻讀學(xué)位期間的科研成果59-61
• 致謝61-62

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 甘露;張志輝;呂美娜;王琳;;細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年29期

2 周麗薇;;細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與防止細(xì)胞污染的方法[J];醫(yī)學(xué)信息(上旬刊);2010年11期

3 高小玲;白明;汪保英;張鐘允;;在研究生中開設(shè)“細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)”課程的教學(xué)方法探索[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2011年12期

4 向若蘭;;《組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》書評[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年12期

5 王晴宇;;全軍微量細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)學(xué)習(xí)班在我院結(jié)業(yè)[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1983年01期

6 趙天德;高福云;余郁;張群喜;;玻片微量細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及細(xì)胞原位計(jì)量法[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào);1988年01期

7 黃珀,鄧勇,郭勇,馮志強(qiáng);腎小管細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年03期

8 李焰;司徒鎮(zhèn)強(qiáng);吳軍正;劉斌;;研究生《細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》教學(xué)實(shí)驗(yàn)課程實(shí)踐與思考[J];西北醫(yī)學(xué)教育;2005年01期

9 王公明;田玉科;田學(xué)愎;陳建平;安珂;楊輝;;用于包裝復(fù)制缺陷性腺病毒的低代次293細(xì)胞的培養(yǎng)[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2006年18期

10 楊斌;;細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在耳鼻咽喉專業(yè)中的應(yīng)用[J];中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2008年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 薛建平;朱艷芳;張愛民;;藥用植物細(xì)胞培養(yǎng)影響因素的研究進(jìn)展[A];中醫(yī)藥理論與應(yīng)用研究——安徽中醫(yī)藥繼承與創(chuàng)新博士科技論壇論文集[C];2008年

2 牛新樂;;細(xì)胞片層技術(shù)在心肌組織修復(fù)中的應(yīng)用[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2011年

3 ;序[A];植物組織培養(yǎng)與脫毒快繁技術(shù)——全國植物組培、脫毒快繁及工廠化生產(chǎn)技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陳文倩;讓細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)走向生產(chǎn)線[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

2 本報(bào)記者 吳潔;精心呵護(hù)細(xì)胞寶貝[N];科技日報(bào);2002年

3 駐京記者　 王丹;我國首個大型哺乳類動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)平臺全線貫通[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張其剛;K-ras基因?qū)氲氖蠓螑盒赞D(zhuǎn)化細(xì)胞粘附能力的改變及臨床意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2000年

2 王婷;扶正解毒含藥血清對鎳致癌干預(yù)作用的細(xì)胞分子機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2010年

3 鄒朝春;甲狀腺激素對仔鼠大腦皮層縫隙連接蛋白表達(dá)的影響[D];浙江大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 王杰;VEGF-A 165對穩(wěn)轉(zhuǎn)TDP-25質(zhì)粒的NSC34細(xì)胞的ALS細(xì)胞模型的影響及作用機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳靜;Bit1靶向性小分子RNA對食管鱗癌（細(xì)胞）侵襲抑制及治療作用[D];鄭州大學(xué);2015年

3 楊心治;PRMT2對MCF-7細(xì)胞侵襲與遷移的影響及機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2015年

4 衛(wèi)元晨;基于微流控芯片對機(jī)械響應(yīng)細(xì)胞的研究[D];沈陽工業(yè)大學(xué);2013年

5 楊貝貝;表達(dá)rhTNFR-Fc的重組CHO細(xì)胞懸浮馴化及培養(yǎng)工藝研究[D];河北科技大學(xué);2014年

6 陳冬波;CD43表達(dá)與造血干細(xì)胞發(fā)育的相關(guān)性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

7 王北;新型維甲酸衍生物由肌球蛋白輕鏈激酶通過p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的遷移[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 張芙蓉;人垂體生長激素腺瘤體外培養(yǎng)及其生物學(xué)特性的研究[D];青島大學(xué);2006年

，

本文編號：738299