本文關鍵詞：自噬在維持卵巢癌干細胞特性中的作用

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【摘要】：目的： 觀察卵巢癌干細胞的自噬活性,并明確自噬激活對維持卵巢癌干細胞干性特征的作用。 方法： 1.以漿液性卵巢癌3AO細胞株為親本細胞,通過無血清懸浮培養(yǎng)的方法獲得卵巢癌干細胞。收集卵巢癌干細胞,利用流式細胞術檢測細胞表面標記分子CD24表達,采用qRT-PCR和Western blot技術分別檢測干性標記物Nestin、Oct-4和Nanog的mRNA和蛋白表達。 2.采用Western blot檢測3AO細胞和卵巢癌干細胞自噬相關蛋白Atg5和p62的表達；進一步用BafAl抑制溶酶體降解過程,一方面采用共聚焦熒光顯微鏡觀察轉染GFP-LC3質粒后細胞內GFP-LC3-Ⅱ陽性小泡數量的變化,另一方面,采用Western blot檢測LC3-Ⅱ和P62表達變化,觀察細胞自噬流的大小。 3.通過shRNA干擾自噬基因Atg5,采用自噬抑制劑BafAl和CQ分別抑制卵巢癌干細胞自噬活性,首先用96孔板球囊形成實驗,觀察細胞自我更新能力的變化；再通過流式細胞術檢測細胞表面標記物CD24的變化；最后利用CCK8檢測細胞對紫杉醇的敏感性。 結果： 1.3AO卵巢癌細胞株通過無血清添加生長因子懸浮培養(yǎng)7天左右可以獲得CD24(-)表型為的卵巢癌干細胞,并且高表達干性標記物Nestin. Oct-4和Nanog。 2.和卵巢癌細胞相比,卵巢癌干細胞自噬合成蛋白Atg5表達增加,而自噬降解蛋白p62表達降低；用溶酶體抑制劑BafAl抑制自噬降解后,一方面,卵巢癌和卵巢癌干細胞在共聚焦顯微鏡下GFP-LC3-Ⅱ日性小泡數量均發(fā)生累積,但是卵巢癌干細胞累積效果更明顯；另一方面,抑制自噬降解后,兩種細胞LC3-Ⅱ和p62蛋白表達均增加,但是卵巢癌干細胞增加更顯著。 3.抑制自噬后,卵巢癌干細胞的自我更新能力降低(所形成的球囊直徑變小、數量變少)、CD24(+)表型的細胞比例上升、對紫杉醇的敏感性增加。 結論： 1.卵巢癌干細胞具有更強的自噬活性。 2.自噬激活有助于維持卵巢癌干細胞的干性特性。
【關鍵詞】：卵巢癌 腫瘤干細胞 自噬 自噬流
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 縮略詞9-11
• 前言11-17
• 參考文獻15-17
• 1 儀器設備和試劑17-23
• 2 材料與方法23-32
• 3 結果32-41
• 4 討論41-46
• 5 結論46-47
• 參考文獻47-49
• 綜述49-59
• 參考文獻56-59
• 作者簡歷59

【參考文獻】

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1 Si-Zhao Lu;Duygu Dee Harrison-Findik;;Autophagy and cancer[J];World Journal of Biological Chemistry;2013年03期

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本文編號：731371