本文關鍵詞：HDAC1-siRNA干擾質(zhì)粒對膀胱癌RT112細胞凋亡的影響

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【摘要】：目的：觀察組蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）siRNA對膀胱癌RT112細胞HDAC1基因、PTEN基因及凋亡相關基因Bax、Bcl-2的影響和對其凋亡影響，并對其可能機制進行初步的討論。 方法：體外培養(yǎng)人類膀胱癌RT112細胞，實驗分4組，空白對照、HDAC1-control組、HDAC1-siRNA組和SAHA處理組。設計了2條HDAC1-siRNA序列和1條無關序列，構建HDAC1-siRNA重組質(zhì)粒，分別轉染RT112細胞，選取轉染效率最高的HDAC1-siRNA-2序列進行后面的實驗。流式細胞術檢測各組細胞凋亡率變化，四組處理的細胞分別提取mRNA和蛋白質(zhì)，采用Real-time PCR技術檢測HDAC1、Bax、Bcl-2基因mRNA水平，采用Westernblot技術檢測HDAC1、PTEN、Bax、Bcl-2蛋白的表達水平。 結果：（1）與對照組相比，HDAC1-siRNA和SAHA組在mRNA水平上，HDAC1表達下降，Bcl-2下調(diào)，Bax沒有顯著差異；在蛋白水平上，HDAC1下調(diào)，Bcl-2下調(diào)，PTEN上調(diào)，Bax沒有顯著差異；（2）流式細胞術分析HDAC1-siRNA和SAHA在不同程度上促進RT112細胞凋亡。 結論：1、構建的HDAC1-siRNA重組質(zhì)�？梢栽隗w外干擾RT112細胞HDAC1mRNA和蛋白的表達。 2、HDAC1-siRNA重組質(zhì)�？梢哉T導RT112細胞的凋亡，可能與上調(diào)組蛋白乙�；乃�，促抑癌基因PTEN表達和下調(diào)Bcl-2/Bax的比值有關。
【關鍵詞】：HDAC1-siRNA PTEN SAHA 膀胱癌 細胞凋亡
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 第1章 文獻綜述11-18
• 1.1 膀胱癌概述11-12
• 1.2 組蛋白去乙�；�12-16
• 1.2.1 HDACs 組成和研究進展12-13
• 1.2.2 HDAC 的生物學效應13
• 1.2.3 經(jīng)典 HDAC 家族與癌癥13-14
• 1.2.4 HDAC 抑制劑及在癌癥治療中的應用14-16
• 1.3 細胞凋亡與 Bcl-2 家族16
• 1.4 PTEN 簡述16-17
• 1.5 RNAi 干擾17-18
• 第2章 材料和方法18-39
• 2.1 實驗材料18-26
• 2.1.1 細胞株18
• 2.1.2 主要儀器及試劑18-21
• 2.1.3 主要試劑配制21-26
• 2.2 實驗方法26-39
• 2.2.1 siRNA 重組質(zhì)粒的轉化、提取與鑒定26-29
• 2.2.2 RT112 細胞培養(yǎng)29-30
• 2.2.3 重組質(zhì)粒轉染細胞30-31
• 2.2.4 提取細胞總 RNA31-32
• 2.2.5 RT-PCR 檢測 HDAC1-siRNA 干擾效果32-34
• 2.2.6 Real-time PCR 檢測 siRNA 干擾 RT112 細胞 HDAC1、Bax、Bcl-2 基因 mRNA 的表達情況34-35
• 2.2.7 Western blot 檢測 HDAC1、Bax、Bcl-2、PTEN、GAPDH 蛋白的表達35-37
• 2.2.8 流式細胞術檢測 HDAC1-siRNA 對 RT112 細胞凋亡的影響37-38
• 2.2.9 統(tǒng)計學計算38-39
• 第3章 實驗結果39-47
• 3.1 重組質(zhì)粒的酶切與測序鑒定39-40
• 3.1.1 重組質(zhì)粒的酶切39-40
• 3.1.2 重組質(zhì)粒的測序鑒定40
• 3.2 倒置熒光顯微鏡觀察 HDAC1-siRNA 轉染 RT112 細胞40-41
• 3.3 RT-PCR 結果41-42
• 3.4 Real-time PCR 檢測 mRNA 表達結果42-44
• 3.5 Western Blot 檢測蛋白表達結果44-45
• 3.6 流式細胞術檢測 HDAC1-siRNA 對 RT112 細胞凋亡結果45-47
• 第4章 結論47-48
• 第5章 討論48-50
• 參考文獻50-54
• 作者簡介54-55
• 致謝55

【參考文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 潘麗娜;腫瘤抑制基因PTEN的表觀遺傳調(diào)控及其抗腫瘤機制研究[D];東北師范大學;2009年

2 孫陽;組蛋白去乙�；敢种苿┮种瓢螂啄蚵飞掀ぐ┳饔脵C制的研究[D];復旦大學;2012年

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本文編號：730755