本文關(guān)鍵詞：冷凍消融對(duì)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β及smad通路影響的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究目的冷凍消融治療在美國(guó)已成為局限期前列腺癌的一線治療方法之一,轉(zhuǎn)移性前列腺癌的局部治療目前是一研究熱點(diǎn),備受關(guān)注。在冷凍消融治療過(guò)程中,在最大限度消滅腫瘤的同時(shí)又要保護(hù)正常組織,很難保證所有癌組織都能達(dá)到致死溫度,而是形成亞致死區(qū)(sublethal district)。冷凍消融后殘存腫瘤細(xì)胞及腫瘤微環(huán)境與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TGF-β與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及腫瘤免疫等關(guān)系密切,我們前期研究發(fā)現(xiàn),冷凍消融后血漿TGF-β發(fā)生變化,提示其在前列腺癌微環(huán)境中可能發(fā)揮一定作用。為此,本研究體外實(shí)驗(yàn)?zāi)M冷凍后不同微環(huán)境中細(xì)胞狀態(tài),在細(xì)胞水平探討冷凍對(duì)CWR-22RV1前列腺癌細(xì)胞系中TGF-β1的釋放變化、細(xì)胞內(nèi)TGF-β1及smads蛋白表達(dá)水平的影響,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討TGF-β阻斷對(duì)冷凍后前列腺癌細(xì)胞侵襲、遷移力影響。研究?jī)?nèi)容TGF-β與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及腫瘤免疫等關(guān)系密切,本實(shí)驗(yàn)?zāi)M前列腺癌冷凍消融治療后亞致死細(xì)胞對(duì)不同微環(huán)境的反應(yīng),探討冷凍后亞致死細(xì)胞TGF-β的釋放變化以及冷凍后瘤體內(nèi)細(xì)胞TGF-β1及下游信號(hào)因子如smad2、smad3、smad4蛋白表達(dá)水平變化,同時(shí)探討冷凍與TGF-β中和抗體對(duì)冷凍后前列腺癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響。研究方法在本實(shí)驗(yàn)中,將細(xì)胞分為A,B,C,D四組。A組為未處理細(xì)胞,為對(duì)照組細(xì)胞。B組為實(shí)驗(yàn)組,經(jīng)-80℃凍融(-80℃環(huán)境中冷凍7分鐘)處理,模擬亞致死細(xì)胞。C組為實(shí)驗(yàn)組,未處理前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入壞死液(將前列腺癌細(xì)胞懸液放入液氮罐中冷凍4分鐘,37℃復(fù)溫后離心取上清,得到壞死液)。D組為實(shí)驗(yàn)組,為亞致死細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入壞死液。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)5小時(shí)、10小時(shí)、20小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)上清液中TGF-β1濃度,研究各組TGF-β1的釋放變化;采用蛋白質(zhì)免疫印跡法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)10小時(shí)四組細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白的表達(dá)水平,探討冷凍后TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白表達(dá)水平變化;同時(shí)Transwell實(shí)驗(yàn)中增加E組(在D組基礎(chǔ)上添加TGF-β中和抗體)檢測(cè)冷凍與TGF-β阻斷對(duì)前列腺癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響。研究結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)組B組細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組A組增加(21.83±1.03 vs 11.2±1.57,P0.05),實(shí)驗(yàn)組D組細(xì)胞凋亡率較實(shí)驗(yàn)組B組增加(29.50±0.52 vs 21.83±1.03,P0.05)。2.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞上清液中TGF-β1濃度的時(shí)間變化趨勢(shì)大致一致:上清液中TGF-β1濃度從5小時(shí)到36小時(shí)處于持續(xù)上升趨勢(shì),36小時(shí)達(dá)高峰之后下降。細(xì)胞釋放的TGF-β1濃度實(shí)驗(yàn)組D組高于對(duì)照組A組,實(shí)驗(yàn)組B組低于對(duì)照組A組(P0.05)。3.細(xì)胞培養(yǎng)10小時(shí)細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白表達(dá)水平:實(shí)驗(yàn)組D組TGF-β1、smad2、smad3、smad4表達(dá)水平高于對(duì)照組A組,實(shí)驗(yàn)組B組TGF-β1、smad2、smad3、smad4表達(dá)水平低于對(duì)照組A組。4.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組、E組的穿膜細(xì)胞數(shù)為:89±1.2 vs 65±2.8 vs 115±4.6 vs 132±3.1 vs 48±4.7,P0.05。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組、E組的穿孔細(xì)胞數(shù)為100±3.2 vs 60±4.2 vs 126±3.8 vs 158±3.3vs 30±5.1,P0.05。侵襲及遷移力實(shí)驗(yàn)組D組高于對(duì)照組A組。實(shí)驗(yàn)組B組侵襲及遷移力低于對(duì)照組A組,而實(shí)驗(yàn)組E組的侵襲、遷移力最低。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)?zāi)M了前列腺癌冷凍消融治療后亞致死細(xì)胞對(duì)不同微環(huán)境的反應(yīng),細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示:亞致死細(xì)胞凋亡率增加,加入壞死液后亞致死細(xì)胞凋亡更加明顯。加入壞死液后亞致死細(xì)胞分泌TGF-β1較對(duì)照前列腺癌細(xì)胞增多,細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白表達(dá)水平增高,細(xì)胞侵襲遷移能力增強(qiáng)。TGF-β中和抗體可抑制亞致死細(xì)胞侵襲、遷移力。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 冷凍消融 TGF-β 侵襲 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 1 對(duì)象和方法16-28
• 1.1 材料和方法16-18
• 1.1.1 主要儀器設(shè)備16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑16-18
• 1.1.3 腫瘤細(xì)胞系18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟18-28
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 1.2.2 模擬實(shí)驗(yàn)19
• 1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組19-26
• 1.2.3.1 臺(tái)盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞狀態(tài)變化20
• 1.2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)（Annexin V-FITC）檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化20
• 1.2.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞上清液中 TGF-β濃度變化20-21
• 1.2.3.4 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）檢測(cè) TGF-β及其通路相關(guān)因子變化21-26
• 1.2.4 Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移、侵襲變化26-27
• 1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法27-28
• 2 結(jié)果28-37
• 2.1 臺(tái)盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞狀態(tài)28
• 2.2 細(xì)胞凋亡率變化28-30
• 2.3 腫瘤細(xì)胞 TGF-β1 在不同條件冷凍的釋放變化30-32
• 2.4 細(xì)胞內(nèi) TGF-β1 及 smads 因子在不同條件冷凍的變化32-33
• 2.5 細(xì)胞在不同冷凍條件侵襲、遷移力變化33-37
• 3 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明45-46
• 附錄46-47
• 綜述 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β與腫瘤47-54
• 綜述參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54-55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊茂;郭志;王海濤;司同國(guó);邢文閣;于海鵬;;冷凍消融治療前列腺癌合并肺轉(zhuǎn)移長(zhǎng)期緩解一例[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2011年27期

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本文編號(hào)：724794