本文關(guān)鍵詞：冷凍消融對前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子-β及smad通路影響的實驗研究

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【摘要】：研究目的冷凍消融治療在美國已成為局限期前列腺癌的一線治療方法之一,轉(zhuǎn)移性前列腺癌的局部治療目前是一研究熱點,備受關(guān)注。在冷凍消融治療過程中,在最大限度消滅腫瘤的同時又要保護正常組織,很難保證所有癌組織都能達到致死溫度,而是形成亞致死區(qū)(sublethal district)。冷凍消融后殘存腫瘤細(xì)胞及腫瘤微環(huán)境與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TGF-β與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及腫瘤免疫等關(guān)系密切,我們前期研究發(fā)現(xiàn),冷凍消融后血漿TGF-β發(fā)生變化,提示其在前列腺癌微環(huán)境中可能發(fā)揮一定作用。為此,本研究體外實驗?zāi)M冷凍后不同微環(huán)境中細(xì)胞狀態(tài),在細(xì)胞水平探討冷凍對CWR-22RV1前列腺癌細(xì)胞系中TGF-β1的釋放變化、細(xì)胞內(nèi)TGF-β1及smads蛋白表達水平的影響,并在此基礎(chǔ)上進一步探討TGF-β阻斷對冷凍后前列腺癌細(xì)胞侵襲、遷移力影響。研究內(nèi)容TGF-β與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及腫瘤免疫等關(guān)系密切,本實驗?zāi)M前列腺癌冷凍消融治療后亞致死細(xì)胞對不同微環(huán)境的反應(yīng),探討冷凍后亞致死細(xì)胞TGF-β的釋放變化以及冷凍后瘤體內(nèi)細(xì)胞TGF-β1及下游信號因子如smad2、smad3、smad4蛋白表達水平變化,同時探討冷凍與TGF-β中和抗體對冷凍后前列腺癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響。研究方法在本實驗中,將細(xì)胞分為A,B,C,D四組。A組為未處理細(xì)胞,為對照組細(xì)胞。B組為實驗組,經(jīng)-80℃凍融(-80℃環(huán)境中冷凍7分鐘)處理,模擬亞致死細(xì)胞。C組為實驗組,未處理前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入壞死液(將前列腺癌細(xì)胞懸液放入液氮罐中冷凍4分鐘,37℃復(fù)溫后離心取上清,得到壞死液)。D組為實驗組,為亞致死細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入壞死液。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡變化,酶聯(lián)免疫吸附試驗測定對照組及實驗組細(xì)胞培養(yǎng)5小時、10小時、20小時、36小時、48小時上清液中TGF-β1濃度,研究各組TGF-β1的釋放變化;采用蛋白質(zhì)免疫印跡法測定細(xì)胞培養(yǎng)10小時四組細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白的表達水平,探討冷凍后TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白表達水平變化;同時Transwell實驗中增加E組(在D組基礎(chǔ)上添加TGF-β中和抗體)檢測冷凍與TGF-β阻斷對前列腺癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響。研究結(jié)果1.實驗組B組細(xì)胞凋亡率較對照組A組增加(21.83±1.03 vs 11.2±1.57,P0.05),實驗組D組細(xì)胞凋亡率較實驗組B組增加(29.50±0.52 vs 21.83±1.03,P0.05)。2.實驗組與對照組細(xì)胞上清液中TGF-β1濃度的時間變化趨勢大致一致:上清液中TGF-β1濃度從5小時到36小時處于持續(xù)上升趨勢,36小時達高峰之后下降。細(xì)胞釋放的TGF-β1濃度實驗組D組高于對照組A組,實驗組B組低于對照組A組(P0.05)。3.細(xì)胞培養(yǎng)10小時細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白表達水平:實驗組D組TGF-β1、smad2、smad3、smad4表達水平高于對照組A組,實驗組B組TGF-β1、smad2、smad3、smad4表達水平低于對照組A組。4.Transwell侵襲實驗的結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組、E組的穿膜細(xì)胞數(shù)為:89±1.2 vs 65±2.8 vs 115±4.6 vs 132±3.1 vs 48±4.7,P0.05。Transwell遷移實驗結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組、E組的穿孔細(xì)胞數(shù)為100±3.2 vs 60±4.2 vs 126±3.8 vs 158±3.3vs 30±5.1,P0.05。侵襲及遷移力實驗組D組高于對照組A組。實驗組B組侵襲及遷移力低于對照組A組,而實驗組E組的侵襲、遷移力最低。結(jié)論本實驗?zāi)M了前列腺癌冷凍消融治療后亞致死細(xì)胞對不同微環(huán)境的反應(yīng),細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示:亞致死細(xì)胞凋亡率增加,加入壞死液后亞致死細(xì)胞凋亡更加明顯。加入壞死液后亞致死細(xì)胞分泌TGF-β1較對照前列腺癌細(xì)胞增多,細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、smad2、smad3、smad4蛋白表達水平增高,細(xì)胞侵襲遷移能力增強。TGF-β中和抗體可抑制亞致死細(xì)胞侵襲、遷移力。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 冷凍消融 TGF-β 侵襲 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 1 對象和方法16-28
• 1.1 材料和方法16-18
• 1.1.1 主要儀器設(shè)備16
• 1.1.2 實驗試劑16-18
• 1.1.3 腫瘤細(xì)胞系18
• 1.2 實驗方法及步驟18-28
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 1.2.2 模擬實驗19
• 1.2.3 實驗分組19-26
• 1.2.3.1 臺盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞狀態(tài)變化20
• 1.2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)（Annexin V-FITC）檢測細(xì)胞凋亡變化20
• 1.2.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）檢測細(xì)胞上清液中 TGF-β濃度變化20-21
• 1.2.3.4 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）檢測 TGF-β及其通路相關(guān)因子變化21-26
• 1.2.4 Transwell 侵襲實驗檢測細(xì)胞遷移、侵襲變化26-27
• 1.2.5 統(tǒng)計學(xué)方法27-28
• 2 結(jié)果28-37
• 2.1 臺盼藍(lán)染色觀察細(xì)胞狀態(tài)28
• 2.2 細(xì)胞凋亡率變化28-30
• 2.3 腫瘤細(xì)胞 TGF-β1 在不同條件冷凍的釋放變化30-32
• 2.4 細(xì)胞內(nèi) TGF-β1 及 smads 因子在不同條件冷凍的變化32-33
• 2.5 細(xì)胞在不同冷凍條件侵襲、遷移力變化33-37
• 3 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 附錄46-47
• 綜述 轉(zhuǎn)化生長因子-β與腫瘤47-54
• 綜述參考文獻51-54
• 致謝54-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊茂;郭志;王海濤;司同國;邢文閣;于海鵬;;冷凍消融治療前列腺癌合并肺轉(zhuǎn)移長期緩解一例[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2011年27期

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本文編號：724794