本文關(guān)鍵詞：體外多胺微環(huán)境對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116遷移的影響

  更多相關(guān)文章： 結(jié)腸癌 多胺 Akt1 細(xì)胞運(yùn)動(dòng) 增殖

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?多胺是一種長(zhǎng)鏈脂肪族類化合物,天然多胺主要包括腐胺(putrescine,Put)、精胺(spermine,Spm)和精脒(spermidine,Spd)。多胺廣泛存在于自然界,是大多數(shù)生命器官所必需的。生理性多胺在腫瘤組織中的含量相對(duì)于正常組織而言是顯著增高的,并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過模擬人體高、正常(中)和低三種不同多胺微環(huán)境對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移能力及相關(guān)分子機(jī)制的研究。實(shí)驗(yàn)方法:選取人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116作為研究對(duì)象,采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將Akt1基因轉(zhuǎn)染到HCT116細(xì)胞中。將外源性多胺按高多胺濃度(腐胺0.8 nmol/m L、精脒10.0 nmol/m L、精胺5.0 nmol/m L);正常多胺濃度(腐胺0.08 nmol/m L、精脒1.0 nmol/m L、精胺0.5nmol/m L);低多胺濃度(腐胺0.008 nmol/m L、精脒0.1 nmol/m L、精胺0.05 nmol/m L)三組分別加入HCT116細(xì)胞和HCT116-Akt1細(xì)胞中,分別培養(yǎng)15天和30天。每種細(xì)胞另設(shè)陰性對(duì)照。應(yīng)用克隆形成實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)不同多胺濃度對(duì)兩種不同細(xì)胞增殖能力的影響;應(yīng)用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)(未鋪膠)來檢測(cè)不同多胺濃度對(duì)兩種不同細(xì)胞遷移能力的影響;運(yùn)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)不同多胺濃度對(duì)兩種不同細(xì)胞傷口愈合能力的影響;采用蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)Akt1、AKT、鳥氨酸脫羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)、金屬蛋白酶(MMP2)、整合素(Integrinα6)、精脒/精胺乙酰轉(zhuǎn)移酶(spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)等多種蛋白在不同濃度的多胺微環(huán)境下發(fā)生的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:HCT116及HCT116-Akt1細(xì)胞在不同多胺微環(huán)境下顯示了不同的增殖和遷移能力,且隨著多胺濃度的升高其增殖和遷移能力逐漸增強(qiáng),并呈時(shí)間、劑量依賴性。HCT116-Akt1細(xì)胞在相同多胺濃度的情況下其增殖和遷移能力比HCT116細(xì)胞顯著增強(qiáng)。蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明多胺是通過影響Akt1、鳥氨酸脫羧酶(ODC)、精脒/精胺乙酰轉(zhuǎn)移酶(SSAT)、整合素(Integrinα6)等蛋白促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:高多胺微環(huán)境能夠促進(jìn)HCT116細(xì)胞和HCT116-Akt1細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移,且HCT116-Akt1細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力顯著強(qiáng)于HCT116細(xì)胞,提示Akt1在多胺促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移過程中具有重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 多胺 Akt1 細(xì)胞運(yùn)動(dòng) 增殖
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 文獻(xiàn)綜述10-24
• 1 引言10
• 2 多胺的研究現(xiàn)狀10-17
• 2.1 概述10-11
• 2.2 細(xì)胞多胺代謝途徑11-12
• 2.3 多胺的生物學(xué)功能12-14
• 2.4 多胺與腫瘤14-17
• 3 PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究進(jìn)展17-24
• 3.1 PI3K/Akt結(jié)構(gòu)特點(diǎn)17-18
• 3.2 PI3K/Akt通路的激活18-19
• 3.3 Akt的活化與腫瘤的關(guān)系19
• 3.4 Akt介導(dǎo)腫瘤發(fā)生的機(jī)制19-20
• 3.5 Akt的激活與腫瘤的轉(zhuǎn)移20-21
• 3.6 PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的研究21-24
• 第2章 實(shí)驗(yàn)試劑、材料和儀器24-32
• 1 主要試劑及材料24-26
• 1.1 腫瘤細(xì)胞株24
• 1.2 細(xì)胞培養(yǎng)試劑24
• 1.3 磷酸鹽緩沖溶液主要試劑24
• 1.4 蛋白免疫印跡主要試劑24-26
• 1.5 其他主要試劑及材料26
• 2 主要溶液的配制26-30
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)試劑26-27
• 2.2 蛋白免疫印跡試劑27-30
• 2.3 其他試劑的配制30
• 3 實(shí)驗(yàn)儀器30-32
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法與步驟32-40
• 1 細(xì)胞培養(yǎng)32-33
• 1.1 細(xì)胞復(fù)蘇32
• 1.2 細(xì)胞株傳代培養(yǎng)32
• 1.3 多胺微環(huán)境下細(xì)胞的培養(yǎng)32-33
• 2 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)33-36
• 2.1 HCT116細(xì)胞株中Akt1高表達(dá)的驗(yàn)證33-35
• 2.2 HCT116和HCT116-Akt1細(xì)胞株中遷移蛋白的檢測(cè)35-36
• 3 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)36-37
• 3.1 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)36-37
• 3.2 Transwell實(shí)驗(yàn)37
• 4 細(xì)胞單克隆形成實(shí)驗(yàn)37-38
• 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38-40
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-52
• 1 Akt1高表達(dá)HCT116細(xì)胞株的驗(yàn)證40
• 2 體外多胺微環(huán)境對(duì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響40-44
• 2.1 劃痕實(shí)驗(yàn)40-43
• 2.2 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)43-44
• 3 體外多胺微環(huán)境對(duì)細(xì)胞克隆形成能力的影響44-48
• 4 體外多胺微環(huán)境對(duì)有關(guān)轉(zhuǎn)移蛋白的影響48-50
• 5 小結(jié)50-52
• 討論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 附錄60-62
• 致謝62-63

【相似文獻(xiàn)】

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