本文關(guān)鍵詞：二氯乙酸鹽和二甲雙胍單獨(dú)及聯(lián)合殺傷宮頸癌細(xì)胞作用及機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景及目的:近年來宮頸癌發(fā)病率居高不下,宮頸癌治療效果仍不滿意,尤其是對(duì)于晚期及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的病人;針對(duì)于此類病人主要是給予化療及放療,其中以鉑類為基礎(chǔ)的化療方案毒副作用較大,且效果欠佳,亟需新的治療方法。近年來研究發(fā)現(xiàn),腫瘤是一種代謝異常性疾病,通過調(diào)節(jié)代謝抗腫瘤已成為腫瘤治療的研究熱點(diǎn)。同樣,通過調(diào)節(jié)代謝而抗宮頸癌的研究,近年也倍受關(guān)注。在諸多通過調(diào)節(jié)代謝而抗腫瘤的藥物中,二氯乙酸鹽(dichloroacetate,DCA,通常指二氯乙酸鈉)與二甲雙胍(metformin,Met)顯示出良好的抗腫瘤前景。研究發(fā)現(xiàn)DCA對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均具有殺傷作用,對(duì)正常細(xì)胞無損害。DCA作用機(jī)制主要是通過抑制丙酮酸脫氫酶激酶,使丙酮酸脫氫酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)活性升高,促進(jìn)糖代謝中間產(chǎn)物進(jìn)入線粒體三羧酸循環(huán),增強(qiáng)有氧氧化,抑制糖酵解和乳酸生成。DCA這種作用可以逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞中線粒體功能紊亂,激活線粒體依賴的細(xì)胞凋亡,從而殺傷腫瘤細(xì)胞;同時(shí)減少乳酸堆積,破壞腫瘤細(xì)胞賴以生存的微環(huán)境,從而抑制腫瘤細(xì)胞的生存。二甲雙胍(Met)是治療2型糖尿病的一線藥物。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可抑制糖尿病患者腫瘤發(fā)病率,關(guān)于其抗腫瘤作用研究受到關(guān)注。諸多研究表明,Met可殺傷包括宮頸癌細(xì)胞在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞;Met在與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用后,不僅可以增強(qiáng)化療效果,同時(shí),還可顯著地減少化療藥物劑量及毒副作用,為腫瘤患者帶來了新的希望。但是,Met在發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的同時(shí),誘導(dǎo)了乳酸堆積,乳酸堆積削弱了Met抗癌效應(yīng)。若能克服該副作用,將有助于增強(qiáng)Met的抗癌效果。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞通過改變細(xì)胞的分化進(jìn)程,以利于腫瘤細(xì)胞生存、生長(zhǎng)以及獲得治療抵抗;而抗凋亡基因的過表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡具有明顯抑制作用。B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)家族是調(diào)控線粒體凋亡途徑的關(guān)鍵蛋白家族,而人類腫瘤髓細(xì)胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是Bcl-2家族重要抗凋亡成員之一,在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要的抗凋亡作用。多項(xiàng)研究已經(jīng)證明,Mcl-1在多種惡性腫瘤組織中廣泛高表達(dá),其中亦包括宮頸癌組織。研究發(fā)現(xiàn)通過靶向降低Mcl-1的表達(dá)水平后,可以顯著增加腫瘤組織對(duì)化療藥物的敏感性,改善腫瘤治療的效果。在結(jié)腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)DCA通過降低Mcl-1的蛋白表達(dá)水平抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。故Mcl-1被作為腫瘤治療的一個(gè)重要靶標(biāo)。本研究選取宮頸癌He La細(xì)胞株為模型,主要目的是探討DCA、Met單獨(dú)及聯(lián)合殺傷宮頸癌He La細(xì)胞作用及可能機(jī)制,為宮頸癌的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容:第一部分DCA殺傷宮頸癌細(xì)胞作用及機(jī)制研究1.檢測(cè)DCA對(duì)He La細(xì)胞增殖、凋亡的影響;2.檢測(cè)DCA對(duì)He La細(xì)胞Mcl-1的表達(dá);3.檢測(cè)DCA對(duì)He La細(xì)胞乳酸生成的影響;第二部分Met殺傷He La細(xì)胞作用研究1.檢測(cè)Met對(duì)He La細(xì)胞增殖、凋亡的影響;2檢測(cè)Met對(duì)He La細(xì)胞乳酸生成的影響.第三部分DCA與Met聯(lián)用殺傷宮頸癌細(xì)胞作用及機(jī)制研究1.檢測(cè)DCA與Met聯(lián)用對(duì)He La增殖、凋亡的影響;2.檢測(cè)DCA與Met聯(lián)用對(duì)He La的Mcl-1的表達(dá);3.檢測(cè)DCA、Met、DCA+Met對(duì)He La乳酸生成的影響;主要研究方法1.宮頸癌He La細(xì)胞體外及傳代培養(yǎng);2.CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;3.流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;4.Western blot和q PCR檢測(cè)蛋白和Mcl-1 m RNA水平;5.乳酸試劑盒檢測(cè)細(xì)胞乳酸水平。主要研究結(jié)果第一部分1.與對(duì)照組比,DCA組He La細(xì)胞存活率明顯降低(P0.01),凋亡率明顯增加(P0.01);2.DCA組He La細(xì)胞Mcl-1蛋白的表達(dá)水平明顯下降;3.MG132可以抑制DCA下調(diào)He La細(xì)胞中Mcl-1蛋白表達(dá)的水平,CHX對(duì)DCA下調(diào)Mcl-1蛋白表達(dá)的無明顯影響;4.與對(duì)照組比,DCA組He La細(xì)胞乳酸生成水平降低(P0.05)。第二部分1.與對(duì)照組比,Met組He La細(xì)胞存活率降低(P0.05),凋亡率增加(P0.05);2.與對(duì)照組比,Met組He La細(xì)胞乳酸生成水平增加(P0.05)。第三部分1.與DCA或Met單藥相比,DCA與Met聯(lián)用組He La細(xì)胞存活率明顯降低(P0.01),凋亡率明顯增加(P0.01);2.與DCA或Met單藥相比,DCA與Met聯(lián)用組He La細(xì)胞Mcl-1蛋白的表達(dá)水平明顯下降;3.DCA與Met聯(lián)用對(duì)He La細(xì)胞中Mcl-1蛋白的下調(diào)作用不能被CHX抑制,可以被MG132抑制;4.與對(duì)照組比,DCA與Met聯(lián)用組He La細(xì)胞乳酸生成無明顯差異(P0.05);與Met組比,DCA與Met聯(lián)用組He La細(xì)胞乳酸生成明顯降低(P0.05)。結(jié)論1.DCA可以抑制He La細(xì)胞增殖,促進(jìn)He La細(xì)胞凋亡,可能與其促進(jìn)蛋白酶體活性降解Mcl-1蛋白及抑制乳酸生成有關(guān);2.Met可以抑制He La細(xì)胞增殖,促進(jìn)He La細(xì)胞凋亡;同時(shí)誘導(dǎo)He La細(xì)胞乳酸生成;3.與DCA或Met單藥相比,DCA與Met聯(lián)用顯著抑制He La細(xì)胞增殖,促進(jìn)He La細(xì)胞凋亡,可能與兩藥聯(lián)用促進(jìn)蛋白酶體活性降解Mcl-1蛋白及DCA抑制Met誘導(dǎo)乳酸生成有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 二甲雙胍 蛋白酶體 細(xì)胞凋亡 二氯乙酸鹽 Mcl-1
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 二氯乙酸鹽殺傷宮頸癌細(xì)胞作用及可能機(jī)制研究14-25
• 2.1 材料與方法14-19
• 2.2 結(jié)果19-22
• 2.3 討論22-24
• 2.4 小結(jié)24-25
• 第三章 二甲雙胍殺傷宮頸癌細(xì)胞作用研究25-30
• 3.1 材料與方法25-26
• 3.2 結(jié)果26-28
• 3.3 討論28-29
• 3.4 小結(jié)29-30
• 第四章 二氯乙酸鹽與二甲雙胍聯(lián)用殺傷宮頸癌細(xì)胞作用及機(jī)制研究30-38
• 4.1 材料與方法30-32
• 4.2 結(jié)果32-36
• 4.3 討論36-37
• 4.4 小結(jié)37-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述 宮頸癌研究進(jìn)展43-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況52-53
• 致謝53

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3 潘惠艷;趙群;詹陽(yáng);趙麗紅;張衛(wèi)華;吳玉梅;;電壓門控鈉離子通道表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖侵襲轉(zhuǎn)移作用的研究[J];中國(guó)腫瘤臨床;2012年04期

4 馮理達(dá);錢菊卿;陳淑琴;張s，

本文編號(hào)：707223