發(fā)布時間：2017-08-19 10:41

  本文關鍵詞：TET2對慢性髓細胞白血病細胞生長的影響

  更多相關文章： TET2 慢性髓細胞白血病 CD34~+ K562 伊馬替尼

【摘要】：目的:研究TET2對慢性髓細胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)細胞生長的影響。方法:(1)使用密度梯度離心法分離CML患者和健康供體的骨髓單個核細胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNCs),采用基因組PCR擴增直接測序方法(PCR amplification and directly sequencing)擴增TET2基因第3-11號外顯子,將PCR產(chǎn)物進行Sanger測序。檢測慢性髓細胞白血病慢性期(chronic phase,CP)和急變期(blastic crisis,BC)患者TET2基因突變情況。(2)使用CD34+細胞免疫磁珠富集試劑盒分離純化骨髓CD34+細胞,通過實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法檢測CML-CP患者及健康供體BMMNCs及CD34+細胞中TET2的mRNA表達水平;(3)利用磷酸鈣沉淀法制備慢病毒,以慢病毒為載體攜帶針對TET2的RNAi轉導至K562細胞中,采用qRT-PCR,Western blot,Dot blot方法驗證TET2的打靶效率;(4)采用細胞生長計數(shù)、集落生成實驗,比較TET2沉默K562細胞和對照細胞的增殖、集落生成能力的差異;(5)使用不同濃度伊馬替尼(Imatinib mesylate,IM)處理TET2沉默K562細胞和對照細胞,研究TET2沉默是否影響K562細胞對IM的敏感性。結果:1.所檢測的20例CML-CP及26例CML-BC患者,其基因組DNA均未檢測到TET2編碼區(qū)外顯子突變。2.TET2基因的mRNA表達在CML-CP患者BMMNCs及CD34+細胞中均較健康供體來源細胞顯著降低(P0.05)。3.使用慢病毒遞送含shNC(包含一段無義的對照shRNA核苷酸系列)(對照組)、shT1(實驗組1)和shT2(實驗組2)(均包含特異性沉默TET2的shRNA系列)質粒至K562細胞,實驗組細胞TET2的mRNA和蛋白表達抑制率均50%,基因組羥甲基化水平顯著下降。對照組細胞無變化。4.TET2沉默K562細胞的增殖及集落生成能力較對照組細胞顯著增強(P0.05)。5.TET2沉默K562細胞對IM的敏感性較對照組細胞顯著降低(P0.05)。結論:1.本研究未檢測到CML-CP及CML-BC患者TET2基因突變。2.CML-CP患者BMMNCs及CD34+細胞中TET2基因表達水平均較正常人明顯降低。3.運用慢病毒載體干擾技術成功沉默K562細胞中TET2基因的表達。4.沉默TET2基因表達能促進K562細胞在體外的增殖和集落形成。5.沉默TET2降低了K562細胞對IM的敏感性。
【關鍵詞】：TET2 慢性髓細胞白血病 CD34~+ K562 伊馬替尼
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.72
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料和方法11-23
• 實驗結果23-29
• 討論29-32
• 結論32-33
• 參考文獻33-38
• 綜述:miR-22對TET2調控的研究進展38-49
• 參考文獻43-49
• 中英文縮略詞匯表49-51
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文51-52
• 致謝52-54

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本文編號：700275