本文關鍵詞：膠質(zhì)瘤干細胞誘發(fā)腫瘤免疫炎性微環(huán)境相關動物模型的研究

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【摘要】：背景與目的:腫瘤微環(huán)境是指腫瘤細胞與宿主組織和細胞之間形成的相生相克的微生態(tài)環(huán)境。盡管近年有關腫瘤微環(huán)境的研究進展迅速,但所得數(shù)據(jù)受倫理學限止,仍然主要來源于實驗動物模型而非人體,因此搭建模擬性高的實驗動物模型平臺還是腫瘤學研究者十分關注的重要問題。就腫瘤免疫炎性微環(huán)境而言,建立人腫瘤動物模型的要求比建立普通動物模型的要求更高,必須能確切地反映出那些被腫瘤細胞重構的腫瘤組織和腫瘤邊緣的宿主源性免疫炎性細胞的來龍去脈,最好還要搞清楚這些細胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的相生相克作用�；谏鲜鲈�,本文旨在本課題組早先建立表達紅色熒光蛋白(RFP)的人腦膠質(zhì)瘤干細胞和表達綠色熒光蛋白(GFP)的裸小鼠(RFP+/GFP+雙色熒光示蹤)模型的基礎上,進一步探討膠質(zhì)瘤干細胞誘發(fā)腫瘤免疫炎性微環(huán)境的相關問題,尤其是高壓氧如何改變腫瘤微環(huán)境的一些情況。材料與方法:接種用的人腦膠質(zhì)瘤干細胞SU3和轉(zhuǎn)RFP基因的SU3-RFP,表達綠色熒光蛋白的NC和Balbc裸小鼠,接種腫瘤細胞用的套管針和維持SPF級的高壓氧治療系統(tǒng)-HBOT/IVC都是本課題組研制的。接種腫瘤細胞的方法,根據(jù)接種部位的不同而有差別,若是腦內(nèi)原位接種,則借助立體定向儀,經(jīng)鉆顱孔緩慢注射;若是皮下接種,則用套管針將腫瘤組織塊或用青霉素皮試注射器將腫瘤細胞混懸液注入前肢腋下或足掌;若是肝臟接種,則須右肋緣切開,將腫瘤細胞通過微量泵緩慢注入肝組織內(nèi);若是腹腔接種,用青霉素皮試注射器將腫瘤細胞直接推注入腹腔即可。至于接種腫瘤細胞的量,根據(jù)接種部位和實驗需要觀察的指標而定,若是皮下接種腫瘤組織塊,一般用1-3 mm3,細胞混懸液為106-107個細胞/0.5 ml培養(yǎng)液;若是腦和肝內(nèi)接種,一般用細胞混懸液105個細胞/10-15μl培養(yǎng)液。至于腫瘤免疫炎性微環(huán)境觀察,都需取移植瘤,必要時還要包括腫瘤邊緣組織做冰凍切片和常規(guī)石蠟切片后在白光和熒光顯微鏡下觀察表達GFP的細胞分布,通過ipps6.0軟件量化分析其表達。若要鑒定在腫瘤及邊緣組織顯示gfp細胞中的免疫炎性細胞比例,則必須要用免疫組織化學方法檢測這些細胞固有的標志蛋白。當然,也可通過組織消化后的混懸液用流式細胞儀進行測定比例,或采用分離收集培養(yǎng)等方法隨實驗目的不同而加以選擇。為了觀察高壓氧對腫瘤的影響,將皮下接種su3的裸小鼠放置在hbot/ivc裝置內(nèi)進行高壓氧治療,每天一次,每次100分鐘,連續(xù)21天,而單獨化療藥acnu組小鼠給予腹腔注射acnu30mg/kg,每周一次,共3次,實驗結(jié)束時取出腫瘤組織后進行稱重。用微電極測定腫瘤組織內(nèi)的氧含量。結(jié)果與分析:在腦內(nèi)移植瘤組織中,光鏡下可見腫瘤組織出血、壞死和血管增生,腫瘤細胞呈侵襲性生長的惡性表型。在熒光顯微鏡下,能清楚地可見發(fā)紅色熒光的腫瘤細胞、發(fā)綠色熒光的宿主細胞和rfp/gfp雙陽性的黃色細胞,在腫瘤壞死灶中和腫瘤邊緣見有大量綠色的炎性細胞浸潤。在皮下移植瘤組織中,可見腫瘤微環(huán)境相關蛋白和宿主髓源性抑制細胞(myeloid-derivedsuppressorcells,mdsc)的標記物包括hif-1α、tnf-α、ki67、cd68和cd11b的高表達,在移植瘤間質(zhì)中,也可見有較多的gfp+、cd68+和cd11b+細胞。移植瘤經(jīng)高壓氧治療后,腫瘤重量減輕,尤其與化療藥acnu合用的腫瘤重量更輕。在腹腔移植瘤組織的病理切片上,熒光顯微鏡下可見腫瘤結(jié)節(jié)中包含了rfp+紅色細胞、gfp+綠色細胞及rfp+/gfp+的黃色細胞。在將腫瘤結(jié)節(jié)再培養(yǎng)后,gfp+細胞可惡性轉(zhuǎn)化為高表達cd68的癌細胞。在足掌移植瘤近心端的腫瘤邊緣組織,光鏡下可見到腫瘤細胞核深染,異形性明顯,核分裂常見,細胞排列密集,而在熒光鏡下清晰地可見移植瘤組織中存在來源于循環(huán)血液的免疫炎性細胞。在肝移植瘤組織中,光鏡下可見su3細胞在異位的肝組織內(nèi)排列密集,核大、深染,并向周圍正常肝組織侵襲生長。熒光鏡下可見有綠色宿主細胞與紅色腫瘤細胞的交織存在,其中包括腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associatedmacrophages,tam)。共聚焦顯微鏡下可進一步清楚地看到這兩類細胞發(fā)生融合或吞噬的黃色細胞。經(jīng)流式細胞儀檢測到的紅、綠和黃色細胞分別為73.65%、19.56%和6.79%。這些黃色細胞單克隆化后獲得具有無限增殖能力的b4、b9和b10細胞,b4細胞可表達rfp/gfp,而b9和b10細胞僅表達gfp。b4細胞還表達cd1a、cd83和cd86等樹突狀細胞的分子標記蛋白,B9和B10細胞可分別表達CD68、F4/80和FAP-α、α-SMA、S100等巨噬細胞和成纖維細胞的分子標記蛋白,經(jīng)病理診斷它們均為惡性腫瘤細胞。采用微電極測得移植瘤組織中氧含量,在常態(tài)下的頭皮下移植瘤中的平均氧含量為(28.93±8.06)mmol/L,腦內(nèi)移植瘤的平均氧含量為(47.46±15.96)mmol/L。經(jīng)HBO治療后,腦內(nèi)移植瘤在治療出窗時的平均氧含量增加為(86.61±10.91)mmol/L,與前者相比有顯著差異(P0.01)。HBO治療后的免疫炎性細胞明顯減少。結(jié)論:(1)本課題組所建的RFP+/GFP+雙色熒光分別示蹤人腦膠質(zhì)瘤干細胞和宿主組織細胞的模型,與傳統(tǒng)人腦膠質(zhì)瘤干細胞移植普通裸小鼠模型相比,其獨特的優(yōu)勢除了依賴熒光顯微鏡就可以區(qū)別出腫瘤微環(huán)境中哪些是腫瘤細胞,哪些是腫瘤間質(zhì)細胞外,還能界定出RFP+/GFP+共定位在一個細胞上的黃色細胞,即是腫瘤細胞與宿主細胞發(fā)生了融合的細胞;(2)基于腫瘤免疫炎性反應是腫瘤局部的全身性反應,而且參與反應的細胞,主要來自骨髓中的髓源性抑制細胞,因此腫瘤細胞接種部位相對不重要,重要的是如何鑒定和量化這些免疫炎性細胞;(3)RFP+/GFP+的人腦膠質(zhì)瘤干細胞移植瘤模型,對研究腫瘤微環(huán)境而言,可進一步用于腫瘤微環(huán)境對腫瘤生長、侵襲、播散和轉(zhuǎn)移等起正面或負面影響、以及腫瘤微環(huán)境細胞自身惡性轉(zhuǎn)化及其耐放化療等多方面的研究;(4)通過本模型證明,HBO治療可改善腫瘤微環(huán)境乏氧而抑制腫瘤免疫炎癥反應來提高膠質(zhì)瘤化療的敏感性。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤干細胞 腫瘤免疫炎性微環(huán)境 雙色熒光示蹤動物模型
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 研究背景12-15
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-26
• 討論26-29
• 小結(jié)29-30
• 參考文獻30-35
• 綜述:高壓氧聯(lián)合放化療治療腫瘤的研究現(xiàn)狀35-44
• 參考文獻39-44
• 縮寫詞表44-45
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文45-46
• 致謝46-47

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1 王莉莎;;社長的話[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年12期

2 張慈安;魏品康;李勇進;;腫瘤酸性微環(huán)境的研究進展[J];腫瘤;2010年06期

3 姚志麟;;三個人口組在各種微環(huán)境中的一氧化碳暴露和總暴露[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);1986年03期

4 程鴻,楊幼明,張帆;籠內(nèi)換氣對微環(huán)境的影響[J];中國實驗動物學雜志;1991年Z1期

5 彭玉萍;;營造科學的睡眠微環(huán)境[J];家庭醫(yī)藥(快樂養(yǎng)生);2013年03期

6 徐銳;;打造睡眠微環(huán)境[J];家庭醫(yī)藥(快樂養(yǎng)生);2013年02期

7 楊沁怡;謝欣怡;;腫瘤炎性微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[J];醫(yī)學信息(中旬刊);2011年08期

8 唐代彬;李樹清;;神經(jīng)元微環(huán)境及其調(diào)節(jié)[J];中國微循環(huán);2008年01期

9 徐靚;季峰;;腫瘤酸性微環(huán)境與抗腫瘤耐藥對策研究進展[J];國際消化病雜志;2010年02期

10 孫靈芝;莊偉端;;內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的原位激活與微環(huán)境[J];中國醫(yī)藥導報;2012年34期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余秀芳;蔣賢輝;;關注微環(huán)境創(chuàng)建農(nóng)業(yè)健康生態(tài)[A];科技、工程與經(jīng)濟社會協(xié)調(diào)發(fā)展——中國科協(xié)第五屆青年學術年會論文集[C];2004年

2 徐志剛;劉曉英;焦學磊;;基于C8051F005的新型組培氣體微環(huán)境調(diào)控系統(tǒng)的研制與試驗[A];中國農(nóng)業(yè)生物技術學會第三屆會員代表大會暨學術交流會論文摘要集[C];2006年

3 蔡尤溪;胡石政;吳仁杰;駱志輝;;超潔凈微環(huán)境設計參數(shù)之實驗與模擬研究[A];第五屆海峽兩岸制冷空調(diào)技術交流會論文專輯[C];2001年

4 王方;;展柜微環(huán)境控制的應用研究[A];中國文物保護技術協(xié)會第七次學術年會論文集[C];2012年

5 李福山;;肝癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移與微環(huán)境調(diào)節(jié)[A];2013年廣東省肝臟病學會《全國肝病防治高峰論壇》深圳會議講義匯編[C];2013年

6 鄧方閣;張秀英;王心蕊;李玉林;;體外模擬心肌微環(huán)境對人骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌分化的影響[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

7 楊長青;楊麗;常義忠;陳錫美;;整合素α1β1和α1β2是纖維化微環(huán)境中肝腫瘤細胞浸潤的主要介導因素[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 申俊;周紅梅;;腫瘤-宿主界面微環(huán)境中的細胞交互作用模型研究[A];中華口腔醫(yī)學會第六屆全國口腔黏膜病學術會議論文集[C];2004年

9 蔣宏亮;康成軍;蔡國強;於麟;王利群;;腫瘤弱酸性微環(huán)境響應性殼聚糖基多層次膠束:高級組裝與解組裝研究[A];2011年全國高分子學術論文報告會論文摘要集[C];2011年

10 許嘉;高佳佳;高瑩;金陶勝;;天津市典型交通微環(huán)境內(nèi)顆粒物的個體暴露研究[A];2010年海峽兩岸環(huán)境與能源研討會摘要集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 劉海;“微環(huán)境”時刻影響兒童健康成長[N];新華每日電訊;2003年

2 孫國根;腫瘤發(fā)生、惡化的“微環(huán)境”可被清除[N];中國醫(yī)藥報;2013年

3 小舒;搞科研的微環(huán)境十分重要[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 記者 胡其峰;我科學家實現(xiàn)腦細胞生存微環(huán)境可視[N];光明日報;2013年

5 編譯 李勇;微環(huán)境可作為抗癌藥研發(fā)新靶點[N];中國醫(yī)藥報;2013年

6 遼寧中醫(yī)藥大學 鄭洪新　上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院 王擁軍;探索“腎藏精”與干細胞及其微環(huán)境及NEI網(wǎng)絡動態(tài)平衡關系[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

7 唐曉景 渠紅麗;最好的時代與最優(yōu)的微環(huán)境[N];東營日報;2013年

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1 張博;高糖微環(huán)境通過GSK3β調(diào)控Cyclin D1、CXCR-4影響大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖遷移[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

2 張雪;軟骨微環(huán)境及細胞起源對再生軟骨類型的調(diào)控作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

3 許小青;化學小分子誘導的蛋白質(zhì)活性中心周圍微環(huán)境的變化[D];南京師范大學;2016年

4 王凱;蜂膠對炎性疾病和炎癥微環(huán)境的影響及其作用機制[D];浙江大學;2016年

5 徐春雯;室內(nèi)空氣穩(wěn)定性對人體呼吸微環(huán)境的影響[D];湖南大學;2014年

6 宋敏;DJ-1蛋白對肺癌微環(huán)境的調(diào)節(jié)作用及其與EGCG防癌的關系[D];中南大學;2010年

7 高劍;新疾病外傷后細菌性致死性肉芽腫病原菌——痤瘡丙酸桿菌生物膜三維模型重建及生物膜與微環(huán)境pH的相互作用[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

8 朱秀委;數(shù)學腫瘤學的研究與應用：微環(huán)境的作用[D];浙江大學;2011年

9 徐志剛;組培微環(huán)境與規(guī)�；缭O施環(huán)境調(diào)控的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2002年

10 謝華桃;角膜上皮干細胞與基質(zhì)微環(huán)境細胞的緊密連接及其機制的研究[D];華中科技大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫志平;結(jié)核分枝桿菌BSL-3實驗室微環(huán)境表面污染檢測及消毒的研究[D];復旦大學;2014年

2 朱愛林;COPD微環(huán)境對A549細胞增殖、遷移和侵襲的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

3 朱蔚沫;基于城市微環(huán)境PM_(2.5)暴露的人群健康風險研究[D];南京大學;2016年

4 謝濤;膠質(zhì)瘤干細胞誘發(fā)腫瘤免疫炎性微環(huán)境相關動物模型的研究[D];蘇州大學;2016年

5 賀宇姣;網(wǎng)絡微環(huán)境下中學思想政治課教學實效性研究[D];陜西師范大學;2015年

6 韓遠青;車載微環(huán)境監(jiān)控系統(tǒng)的設計與實現(xiàn)[D];中山大學;2014年

7 侯彥年;敦煌莫高窟微環(huán)境控制系統(tǒng)的設計與實現(xiàn)[D];北京交通大學;2014年

8 王雪晴;典型交通微環(huán)境空氣中15種鄰苯二甲酸酯的污染特征及健康風險[D];浙江大學;2015年

9 劉迎輝;基于低溫微環(huán)境的肺癌發(fā)生與川烏治療研究[D];河南大學;2015年

10 劉淼;不同微環(huán)境下木葡萄糖醋桿菌的代謝組學研究[D];天津科技大學;2014年

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本文編號：700137