本文關鍵詞：EYA2基因的CpG島甲基化對肺腺癌發(fā)生發(fā)展的影響

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【摘要】：本論文旨在研究EYA2基因在肺腺癌中的甲基化水平和該基因表達量在肺腺癌細胞生長中的作用。首先,通過Western blotting方法檢測了各種非小細胞肺癌細胞中EYA2蛋白的表達量,并使用熒光定量PCR方法檢測EYA2基因的mRNA轉錄水平,結果顯示蛋白水平和]mRNA轉錄水平在肺腺癌細胞中明顯上調。其次,采用亞硫酸鹽修飾測序法檢測EYA2基因全CpG島的甲基化水平,發(fā)現(xiàn)EYA2基因在肺腺癌細胞和肺腺癌組織中處于低甲基化水平,而在對照正常肺部細胞中處于高甲基化水平,且EYA2基因的甲基化程度和其蛋白表達量呈反向趨勢。第三,利用RNA干擾方法在肺腺癌細胞中將其蛋白表達量穩(wěn)定下調,檢測EYA2基因表達水平對一些肺腺癌細胞生長相關指標的影響,具體方法如下：1.采用MTS法檢測EYA2基因表達下調處理細胞的增殖情況；2.染色處理后,在流式細胞儀上檢測該蛋白下調處理細胞的周期變化和凋亡變化；3.使用劃痕模擬傷口愈合模型和trans-well模型的方法分別檢測這些經過下調處理細胞的遷移和侵襲能力變化。結果發(fā)現(xiàn)EYA2基因表達下調導致肺腺癌細胞增殖速率明顯低降低,處于G0/G1期的細胞數(shù)量明顯上升,S期和G2/M期的細胞數(shù)量下降,細胞凋亡數(shù)量明顯變多,細胞遷移和侵襲能力的明顯減弱。由此得出,EYA2基因甲基化水平的降低以及其表達量升高在一定程度上對肺腺癌的發(fā)生與生長起著重要作用。
【關鍵詞】：EYA2 非小細胞肺癌 甲基化 細胞生長 腫瘤擴散
【學位授予單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 前言7-13
• 1. 肺癌7-8
• 2. DNA甲基化8-11
• 3. EYA2基因研究立項依據(jù)11-13
• 第二章 實驗材料與方法13-31
• 1. 實驗材料13-19
• 1.1 儀器13-14
• 1.2 耗材14-15
• 1.3 試劑15-16
• 1.4 配制溶液16-19
• 2. 試驗方法19-31
• 2.1 細胞復蘇19
• 2.2 細胞培養(yǎng)19-20
• 2.3 細胞凍存20
• 2.4 組織樣本采集20
• 2.5 靶蛋白表達檢測20-22
• 2.6 mRNA轉錄水平檢測22-23
• 2.7 甲基化檢測23-27
• 2.8 靶基因表達抑制處理27-28
• 2.9 細胞增殖檢測28-29
• 2.10 細胞周期和凋亡檢測29
• 2.11 細胞的遷移29-30
• 2.12 侵襲能力檢測30
• 2.13 數(shù)據(jù)分析30-31
• 第三章 結果31-41
• 1. EYA2在肺腺癌細胞中表達上調31-33
• 2. EYA2基因的CG島在肺腺癌中表現(xiàn)為異常低甲基化水平33-34
• 3. 肺腺癌細胞中EYA2蛋白表達的下調抑制了細胞增殖,阻滯了細胞周期并增加了細胞的凋亡34-39
• 4. 肺腺癌細胞中EYA2蛋白的下調抑制了細胞的遷移和侵襲能力39-41
• 第四章 討論41-49
• 1. EYA2基因的CPG島分布以及該基因在肺腺癌中的甲基化異常變化41-43
• 2. EYA2基因與肺腺癌細胞生長和擴散相關生理功能的關系43-45
• 3. EYA2基因作為潛在肺腺癌特異性腫瘤標記物和治療特異性靶標的重要性45-49
• 結論49-50
• 參考文獻50-54
• 參與的科研項目54-55
• 致謝55

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周莉;呂喜英;張冠男;;PD-1在NSCLC細胞免疫治療中的研究進展[J];承德醫(yī)學院學報;2015年04期

2 徐孟;陳小玲;陳代文;余冰;羅鈞秋;何軍;毛湘冰;虞潔;鄭萍;黃志清;;Six1對骨骼肌發(fā)育和肌纖維類型轉化的調控[J];動物營養(yǎng)學報;2015年07期

3 劉紅麗;葉志華;彭玲霞;豆艷;;護理干預對肺癌吸煙患者戒煙的影響[J];護理管理雜志;2010年07期

4 朱小鵬;徐炎華;;EML4-ALK融合基因在非小細胞肺癌中的研究[J];臨床肺科雜志;2014年01期

5 周麗華;劉勝崗;楊紅忠;彭毅強;聶華萍;梁偉軍;周輝;;厄洛替尼聯(lián)合NP方案治療非小細胞肺癌的臨床療效分析[J];腫瘤藥學;2014年02期

6 阮紀愷;;益肺和胃湯聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌臨床觀察[J];內蒙古中醫(yī)藥;2014年29期

7 高宇;朱志圖;;應用脂質體紫杉醇聯(lián)合順鉑對比白蛋白結合型紫杉醇聯(lián)合順鉑一線治療晚期非小細胞肺癌的臨床觀察[J];南昌大學學報(醫(yī)學版);2014年08期

8 李慶;王玉明;段勇;;長鏈非編碼RNA與腫瘤關系的研究現(xiàn)狀[J];實驗與檢驗醫(yī)學;2014年04期

9 劉春玲;張少燕;吳佩娜;葛潤梅;謝展飛;;以頭頸部表現(xiàn)為首發(fā)癥狀肺癌的臨床分析[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2014年19期

10 張潔霞;李時悅;占揚清;歐陽銘;;中國非小細胞肺癌患者K-Ras和EGFR基因突變與臨床病理特征的關系[J];臨床腫瘤學雜志;2014年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;中國表皮生長因子受體基因敏感突變和間變淋巴瘤激酶融合基因陽性非小細胞肺癌診斷治療指南(2014版)[A];中國腫瘤內科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閔凌峰;香煙煙霧提取物誘導肺腺癌A549細胞相關分子改變的比較蛋白組學研究[D];中南大學;2011年

2 黃昂;非小細胞肺癌患者CD14~+HLA-DR~(-/low)髓系抑制性細胞特點及與肺癌進展相關性研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2013年

3 賈園薈;組蛋白去甲基化酶PHF8參與神經分化的研究與UHRF1、UHRF2調控起始性DNA甲基化的功能研究[D];華東師范大學;2013年

4 張巍;人體內2種表觀遺傳修飾識別蛋白和2種支架蛋白的結構研究[D];華中師范大學;2013年

5 張立國;水稻顯性矮稈基因Epi-df的圖位克隆、表觀修飾特征分析及功能研究[D];南京農業(yè)大學;2012年

6 趙為民;豬胚胎骨骼肌中基因間長非編碼RNA的鑒定、特征及功能的初步分析[D];中國農業(yè)科學院;2013年

7 Muhammad Abid Sheikh;DNA甲基轉移酶3b新靶點的鑒定及其在神經元分化中表達的調節(jié)及功能研究[D];東北師范大學;2013年

8 李思運;中醫(yī)補益法在肺癌化療不良反應治療中的運用[D];南京中醫(yī)藥大學;2013年

9 單鵬;ⅢA、ⅢB期非小細胞肺癌以手術為主的綜合治療效果分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2009年

10 康明明;玉米小分子RNA及其靶基因的鑒定與功能分析[D];中國農業(yè)大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曾鐵波;小鼠AK142849和AK003491基因的印記鑒定和表達分析[D];哈爾濱工業(yè)大學;2010年

2 岳崢;GSTP1基因多態(tài)性與非小細胞肺癌遺傳易感性及化療敏感性研究[D];中國醫(yī)科大學;2008年

3 李英英;基于人機綜合分析的周仲瑛教授辨治肺癌病案研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2012年

4 羅文婷;X-線修復交叉互補基因多態(tài)性及環(huán)境因素與非小細胞肺癌的流行病學研究[D];福建醫(yī)科大學;2012年

5 李玉楓;黑色素瘤相關抗原-A3在肺癌中的表達及臨床意義的研究[D];南方醫(yī)科大學;2012年

6 曾園園;IL-6/JAK/STAT3與TGF-β/Smad通路介導肺癌細胞上皮—間充質轉化過程的交互作用機制研究[D];蘇州大學;2013年

7 廉欣;吉非替尼治療晚期肺腺癌療效的影響因素分析[D];大連醫(yī)科大學;2012年

8 郭陽;非小細胞肺癌患者肺癌組織和血漿中KRAS基因突變研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

9 畢婧;肺癌RASSF10基因啟動子甲基化的研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

10 宋佳巍;營養(yǎng)水平對不同品種鵝生長發(fā)育及MyoG、Foxo1基因表達的影響[D];吉林農業(yè)大學;2013年

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本文編號：693426